首先，将培养 HEK 293 细胞所需的所有材料放入清洁的生物安全罩中。解冻后，将HEK 293细胞悬浮液从小瓶转移到50毫升管中的30毫升预热悬浮细胞培养基中。将细胞在 37 摄氏度、80% 湿度、8% 二氧化碳和 200 RPM 下孵育三到四天。
将 100 微升细胞悬液加入 400 微升 0.4% 台盼蓝溶液中，并轻轻倒置试管进行混合。将 50 μL 台盼蓝处理的细胞悬液放在血细胞计数器载玻片上，计数总活细胞并计算转染所需的细胞悬液量。将所需量的细胞悬液加入预热悬浮细胞培养基中，并在 37 摄氏度下与 8% 二氧化碳一起孵育。
在 300 毫升悬浮细胞培养基中加入每毫升 HEK 293 细胞悬浮液 100 万个细胞，并在 37 摄氏度下与 8% 二氧化碳一起孵育。第二天，将悬浮细胞培养基、质粒和转染试剂加热至室温。将质粒加入制备的培养基中并短暂涡旋，然后加入转染试剂并再次短暂涡旋，然后在室温下孵育 30 分钟。
在转染混合物的孵育过程中，对第一天培养的细胞进行计数，如有必要，将细胞密度调整在每毫升 2 至 250 万个细胞之间。30 分钟后，将转染混合物滴加到细胞中，同时轻轻旋转试管，孵育 72 至 96 小时。在第五天，向细胞中加入 33 毫升 10x 细胞裂解缓冲液，并通过轻轻摇动混合。
将悬浮液在 37 摄氏度下摇动孵育 1.5 小时。将细胞悬液在4摄氏度下以3,428G离心60分钟。通过0.45微米PES真空过滤器过滤上清液，并将澄清的裂解物收集在过滤容器中。
将 90 毫升 40%PEG 8， 000 溶液加入 360 毫升过滤的细胞裂解物中。将70%乙醇灭菌的搅拌棒加入细胞裂解物中，在冰上或冷藏室中以300RPM搅拌一小时，然后在4摄氏度下孵育过夜，不搅拌。
