首先将麻醉的动物放置在手术平台上。在每只动物的眼睛上涂抹润滑眼药膏，以防止手术过程中角膜干燥。用三轮交替的聚维酮、碘和异丙醇对剃光的手术部位进行消毒。
然后将一卷纸巾或一根直径为 1.5 厘米的管子放在动物下方，刚好靠近臀部。用开窗帘覆盖动物，将开窗帘居中放在腰椎上，以便进行手术通路。为了验证动物的麻醉深度，捏住每只爪子并观察是否有任何戒断反应。
然后使用 11 号手术刀刀片，从 L2 到 L6 椎骨的中线做一个 3 厘米长的皮肤切口。现在将一把无菌弯曲的手术剪刀插入肌肉和皮肤之间，并轻轻打开尖端，将皮肤与下面的肌肉分开。移除覆盖 L2 至 L5 椎骨棘突的筋膜。
将 25 至 35 微升 AAV9 载体移液到无菌微量离心管的盖子中。将载体的整个体积从瓶盖中吸入胰岛素注射器中。然后识别动物身上的 L5 和 L4 棘突。
将注射器针头放置在 L5 棘突的左侧，将其与突起的尾端对齐。将注射器针头向前推进约 8 毫米，越过 L5 椎板，然后在 L4 椎板下方进入腰椎池，直到与骨骼接触。缓慢按下注射器柱塞约五秒钟。
然后慢慢地将针头从插入部位抽出。使用 4-0 缝合线或手术钉，开始闭合伤口一端的切口。为了评估染料注射的成功，在对动物实施安乐死后，在脊柱突两侧平行于脊柱的肌肉上做一个四厘米长的切口。
使用脊柱钳或剪刀巧妙地去除脊柱突之间的肌肉。使用 rongeur，从 L6 提取棘突到下胸椎。将 rongeur 的下尖端插入 L5 椎板下方，然后咬几口，有方法地去除覆盖在脊髓上的骨头。
