首先，用消毒剂彻底清洁培养箱和蠕动泵的所有区域，以确保准无菌环境。然后用 700 微升含镁和钙的 PBS 冲洗每根管路，然后用 500 微升 C2 或 EC 条件培养基冲洗。对于左侧腔，使用从诱饵锁到蠕动泵塞的短距离管道，对于右侧腔，使用另一个对称的管道。
从培养箱中取出带有 HUVEC 和 C2BBe1 细胞的生物芯片后，每个腔室进行 350 微升的培养基更换。然后将插头从下部移动到上部。将 350 微升新鲜培养基添加到生物芯片的下腔室中。
之后，取下所有插头并将所有端口填充到最顶部。从左腔开始，将诱饵锁适配器插入生物芯片的端口，将第一根管路连接到上腔的右端口。然后将第二根管路连接到下腔室的左端口。
接下来，取储液槽，在储液槽底部加入一小滴细胞培养基。然后将储液槽插入第一根管路的另一侧，并对另一个腔室重复此操作。将所有端口连接到管道或储液槽后，用 3.5 mL 细胞培养基填充储液槽。
然后将装有盖子的管子的松动侧放在储液槽的顶部，以关闭每个腔室的微流体系统。将生物芯片运输到蠕动泵中。使用蠕动泵塞，将每条管路连接到蠕动泵，使介质从储液罐流入腔体，然后通过泵流回。
然后以每分钟 50 μL 的流速灌注每个腔室。预充血完成后，停止蠕动泵。取下连接到每个储液槽管的盖子，将其放在泵旁边的无菌组织上。
去除所有培养基后，用 2 mL 新鲜制备的培养基填充储液槽。重新连接管路和盖子，以每分钟 50 微升的流速继续循环灌注 24 小时。蠕动泵停止后，打开所有腔体的储液罐。
清空储液槽并断开管道和储液槽与生物芯片的连接。每个腔室用 500 微升含镁和钙的冷 PBS 洗涤微流体腔两次。向所有腔体中加入 500 μL 冰冷的甲醇。
打开芯片后，切割或去除生物芯片的粘合箔。将含有 PET 膜的组织切成两半，与不同的免疫面板平行染色。使用精密镊子，将每个膜片转移到带有封闭和透化溶液的 24 孔板中的单独孔中。
然后将膜片转移到潮湿室内的干净载玻片上。向每个膜片中加入 50 μL 制备的一抗和染色溶液。将样品转移至 24 孔板后，用洗涤液洗涤膜两次，每次 5 分钟，然后用含镁和钙的 PBS 洗涤。
使用荧光封固剂和盖玻片，将膜片安装在干净的载玻片上，并将它们储存在 4 摄氏度直至显微镜成像。富注 5 天后，用 DAPI 染色的核 DNA 显示表达 CD68 的完全分化单核细胞衍生的巨噬细胞扩散到整个血管组织。HUVEC 通过形成粘附连接（如 VE-钙粘蛋白）形成一个汇合层，显示组织完整性。
此外，von Willebrand 因子由 HUVEC 高度表达。富集 5 天后，C2BBe1 细胞形成表达连接蛋白 E-cadherin 和 ZO-1 的极化上皮细胞层。灌注 6 天后，可以在 Z 堆栈的 x 和 y 切片中检测到上皮绒毛状和隐窝状结构的三维生长。
