用于子宫内膜组织中子宫 NK 细胞亚型分析的多重免疫组织化学

首先，在载玻片上获取人子宫内膜组织切片进行多重免疫组织化学，并在 60 摄氏度下烘烤组织切片两小时。随后，将玻片依次浸入适当的溶液中，以进行脱蜡、水合和固定。将每种抗体的 200 毫升相应 AR6 或 AR9 缓冲液添加到耐热抗原修复盒中。

将切片放入抗原修复缓冲液中后，在微波炉中以高功率加热直至沸腾。松散地盖上包埋盒，并以小功率加热 15 分钟。玻片冷却后，用双蒸水冲洗，然后进行 PBST。

然后用吸水纸去除多余的溶液，并用疏水屏障笔在纸巾周围画一个完整的圆圈。然后将切片与 3% 过氧化氢在室温下孵育 8 分钟。接下来，涂上封闭溶液，并在室温下孵育 10 分钟。

去除封闭溶液后，将 150 μL 第一一抗 CD49a 以 1 至 1000 倍的稀释度在 1x 抗体稀释剂中涂于每张玻片上。在使用二抗之前，请使用吸水纸去除多余的水分。在每个载玻片上加入 4 至 5 滴 1x 抗小鼠和兔辣根过氧化物酶二抗。

然后在放大稀释剂中将酪胺信号放大剂或 TSA 染料稀释 1 至 100 倍。并向每张载玻片中加入 150 微升这种稀释溶液并孵育。为了去除未结合的荧光团，将切片在耐热盒内的 200 毫升 AR6 缓冲液中在微波炉中煮沸 2 分钟。

然后将微波炉从高功率转为低功率 15 分钟。滴加 150 微升用 PBST 稀释的 DAPI 工作溶液。在黑暗区域完全干燥切片约 30 分钟。

滴一滴抗淬灭荧光封固剂，并小心地放置盖玻片。