使用多重免疫组织化学进行图像分析以表征妊娠早期的 uNK 细胞亚型

首先，用适当的抗体染色后对子宫内膜组织切片进行成像。要导入多光谱图像，请在软件界面中导航到 File（文件），然后导航到 Open image（打开图像）。单击 Select Fluorophores 并选择合适的光谱库以解混荧光基团，然后单击 OK 进行确认。

使用 AF 吸管工具分离自发荧光光谱，从 AF 图像中对具有代表性的组织区域进行采样，并标记四个细胞表面标记并分配特定颜色进行识别。单击 Prepare Image 或 Prepare All 以完成准备工作。对于组织分割，手动描绘每种组织类型的 3 到 5 个区域，包括上皮、基质和空白区域。

根据需要调整区域和参数以改进训练数据集，从而提高软件识别组织结构的准确性。在 segment cells （分割细胞） 下，选择 Nuclei （细胞核） 和 Membrane （膜）。选择 DAPI 以识别细胞核并调整强度设置以检测所有细胞核，而不会产生背景噪声。

选择 CD16、CD49A 和 CD56 信号以找到膜并协助核分裂。使用核成分分裂功能来区分位置很近的细胞核。在表型方案中，采用 CD56、CD49A、CXCR4 和 CD16 标记进行细胞表型分析。

使用 Add 按钮将单元格分类为正表达或负表达每个标记。在训练过程中，为每个表型手动标记至少 5 个细胞。配置细胞表型后，软件将指示每个细胞的表面标志物的表达。

将数据导出到电子表格以供进一步分析。新的分类策略根据 CD49A 和 CXCR4 的表达确定了四种 NK 细胞亚型。