制备用于流式细胞术和细胞因子分析的全血样品，以确定抗原特异性宿主对真菌和病毒病原体的免疫力

要开始流式细胞术的样品制备，请从培养箱中取出含有 Brefeldin A 的全血样品的刺激管。向每个含有布雷菲德菌素 A.的刺激管中加入 500 微升 0.5 摩尔 EDTA 溶液，将样品转移到新的 15 毫升离心管中。然后将 1 毫升红细胞裂解缓冲液移液到每个刺激管中冲洗。

将缓冲液和细胞悬液转移到同一个离心管中。将试管以 600 g 离心 7 分钟，然后小心吸出上清液。然后将红细胞裂解缓冲液添加到沉淀中并重悬。

在室温下孵育样品，直到样品看起来透明或最多孵育 6 分钟。将试管以 600 g 离心 7 分钟。弃去上清液后，向沉淀中加入 1 毫升 HBSS。

将细胞悬液转移到 2 mL 反应管中。然后以 400 g 离心试管 5 分钟。在进行流式细胞术染色之前丢弃上清液。

将样品从不含 Brefeldin A 的刺激管转移到 1.5 mL管中。将试管以 2， 000 g 离心 20 分钟。现在小心地将上清液移液到新的 1.5 毫升试管中。

如果不立即分析上清液，请将样品在 80 摄氏度下冷冻保存。使用冷冻样品时，在分析前以大于 7， 000 g 的速度再次离心解冻的上清液 5 分钟。根据细胞因子检测方案的要求对样品进行预稀释。

将细胞沉淀重悬于 1 mL RNA 保护缓冲液中。将其冷冻保存在 80 摄氏度，以便后续分离 RNA。或者，将细胞沉淀重悬于 700 μL 裂解缓冲液中，以便立即分离 RNA。