Vollblutassay mit dualer Co-Stimulation zur antigenspezifischen Analyse der Immunität des Wirts gegen pilzliche und virale Krankheitserreger

Unsere Forschung konzentriert sich auf das Immunmonitoring von Patientinnen und Patienten auf der Intensivstation. Einige Patienten entwickeln während der mechanischen Beatmung eine schwere virale Lungenentzündung. Wir isolieren die Ursache der Viren, charakterisieren aber auch die lokale und systemische Immunantwort mit dem in diesem Video vorgestellten Protokoll, um immunologische Risikofaktoren zu identifizieren.

Traditionelle antigenspezifische T-Zell-Assays, die auf isolierten mononukleären Zellen basieren, sind sehr anfällig für präanalytische Störfaktoren, zeit- und ressourcenintensiv und benötigen große Mengen an Blut. Dies schränkt die Implementierung von antigenspezifischen T-Zell-Assays in der klinischen Forschung oder in der klinischen Routine als prognostische oder diagnostische Biomarker stark ein. Wir präsentieren ein vielseitiges Immunoassay-Protokoll, das verschiedene nachgelagerte Messwerte von nur 250 Mikrogramm Blut pro Stimulus ermöglicht.

Dies ermöglicht Anwendungen, auch wenn dieses Volumen begrenzt ist oder mehrere Antigene gescreent werden müssen. Darüber hinaus ist unser Assay einfach durchzuführen und für mehrere Krankheitserreger geeignet. Zusätzlich zu seiner Vielseitigkeit und dem geringen erforderlichen Blutvolumen diente unser Protokoll als Stimulationsumgebung, die gründlich und spezifisch für Antigen-induzierte T-Helferzellantworten optimiert wurde.

Dies wurde durch eine Dual-Core-Stimulation erreicht, die das Protokoll auch robuster gegenüber Störfaktoren wie immunsuppressiver Pharmakotherapie oder präanalytischen Verzögerungen macht. Wir verwenden dieses Protokoll für das Immunmonitoring von Patienten mit beatmungsassoziierter viraler Pneumonie. Unsere Kooperationspartner in Würzburg und Houston arbeiten an einer klinischen Translation von Cytomegalievirus-spezifischen Immunoassays.

Darüber hinaus verwenden sie dieses Protokoll für Studien zur Immunpathogenese von Pilzen und präklinische Immuntherapiestudien in Mausmodellen für opportunistische Infektionen.