首先,将 1.5 毫升 0.1 毫克/毫升碘化丙啶溶液移液到电极阵列中的每个孔中。将插件放入电极阵列中的每个孔中,将插件的支脚安装到对准槽中,使插件与孔的上表面齐平。将顶部电极印刷电路板拧到电极阵列孔的顶部,并将电极阵列连接到多孔衬底电穿孔或 PSEP 设备。
将电极阵列放入 37 摄氏度的培养箱中以实现温度平衡。单击 GUI 左上角 membrane 旁边的下拉菜单,然后单击 400 纳米 GBO。在 GUI 的右侧,在 post pulse time duration minute 编辑字段中键入 1。
现在,单击运行按钮,并在出现提示时为 1 至 3 和 4 至 6 孔输入适当的名称。然后,单击 “确定” 开始实验。一小时后,从培养箱中取出电极阵列,并将插入片段转移回实验板中的原始位置。
在 200 微升试管中将 2 微升 Hoechst 33342 和 5 微升钙黄绿素 AM 与 123 微升细胞培养基混合。轻轻吸取 10 μL 染色溶液放入每个脉冲后插入管中,然后将插入管放回培养箱中 5 分钟。将孔板转移到具有 5 倍放大倍率物镜的荧光显微镜的板架上。
使用明场和每种染色剂的荧光进行成像。将 1.5 毫升细胞培养基移液到电极阵列中的每个孔中。将细胞样品插件放入 1 至 3 孔中,将对照插件放入 4 至 6 孔中,将插件的支脚放入对齐槽中。
将顶部电极印刷电路板拧到电极阵列井的顶部,并将电极阵列连接到 PSEP 设备。将电极阵列放入 37 摄氏度的培养箱中以实现温度平衡。单击 GUI 左上角 membrane 旁边的下拉菜单,然后单击 400 纳米 GBO。
现在,单击运行按钮,并在出现提示时为 1 至 3 和 4 至 6 孔输入适当的名称。然后,单击 “确定” 开始实验。一小时后,从培养箱中取出电极阵列,并将插入片段转移回实验孔板中的原始位置。
在细胞培养基中制备 Hoechst 33342、钙黄绿素 AM 和碘化丙啶后,混合并轻轻吸取 10 μL 染色溶液到每个脉冲后插入片段中,然后将插入片段放回培养箱中 5 分钟。在荧光显微镜上,使用明场和每种染色剂的荧光对细胞样品插入物进行成像。优化的健康曲线显示没有低于基线,并且 TEEI 的增加最大。
细胞单层的 PSEP 后成像显示细胞死亡可忽略不计,并且细胞单层健康完全融合。优化的不健康数据导致 TEEI 反应减弱。PSEP 后成像显示,由于单层细胞较少,细胞死亡几乎为零,递送效率降低。
应用未优化的波形导致 TEEI 反应显著降低,表明大量细胞死亡和递送效率降低。