首先,用无菌的一次性手术刀刀片将分离的大脑切成大约 1 平方毫米的块。小心地将切碎的大脑转移到一个新的无菌 50 毫升试管中。向切碎的大脑中加入终浓度为 0.25% 胰蛋白酶。
将组织在 37 摄氏度的水浴中孵育 20 分钟。加入 5 毫升完全神经胶质细胞培养基以中和胰蛋白酶,并使用 10 毫升移液器轻轻混合组织悬液。小心地将细胞悬液倒入细胞过滤器中。
然后从无菌的 1 毫升注射器中取出柱塞,并使用柱塞将组织研磨成网片。向每个培养瓶中加入等体积的含有 1 至 2 个脑和神经胶质细胞培养基的细胞悬液,最终体积为 15 mL。在第一天观察到稀疏的细胞和过多的细胞碎片。
到第 4 天,产生了贴壁星形胶质细胞。在培养第 8 天观察到具有典型星形胶质细胞形态的汇合细胞。