首先,从培养箱中取出含有雌雄同体雌虫成虫的培养板。同步 him-5 蠕虫后,用 M9 缓冲液洗涤蠕虫 5 次。将 1 日龄成年雄性从种子板转移到含有 M9 缓冲液的试管中。
将蠕虫放在未接种的 NGM 平板上,以消除残留细菌并防止检测过程中食物的干扰。准备含有 1.5% 螺旋钻、25 毫摩尔氯化钠、1.5 毫摩尔 Tris 碱和 3.5 毫摩尔 Tris 盐酸盐的趋化测定板。在微波炉中加热趋化溶液中的螺旋钻,直至完全溶解。
冷却后,使用移液管将 chemoattraction 螺旋液均匀分配到培养皿中。将盖子打开在干净的区域,让螺旋钻的表面略微干燥。表面适当干燥后,盖上盖子。
为了进行化学吸引测定,请在盖子和培养皿的底部标记三个不同的点。将两微升一摩尔叠氮化钠涂抹到板上的每个实验点和对照点。用蠕虫采摘器挑选 20 条健康且自由移动的雄性蠕虫。
在解剖显微镜下,在起点释放蠕虫。快速向对照点加入 2 μL M9 缓冲液,向盖子上的实验点加入 2 μL 性信息素。轻轻盖上盖子,将板放在安静、温度稳定的区域。
30 分钟后,通过计算每个点的蠕虫数量对测定进行评分。为了增强趋化性的评估,使用相机记录蠕虫的轨迹。him-5 雄性的趋化性指数始终高于 0.5,表明对性信息素来源有很强的吸引力,而 SRD-1 雄性的趋化指数接近于零。
成功的化学吸引测定显示 him-5 雄性随着时间的推移更接近信息素源,颜色编码的轨迹表示时间、距离、速度、直线度和方向正确性。