在执行 PLA 点采集以定位蛋白质相互作用后，打开来自不同条件的图像 在 ImageJ 中调整分析参数。确定并指定这些参数以及宏程序中的数据。要删除背景，请单击 处理 和 减去背景.
使用预览功能测试不同的滚动球半径。要去除杂色，请单击 处理， 杂色和 去斑.然后点击 处理并平滑 在 nucleus 菜单中应用平滑功能并改进填充。
现在，单击图像，然后单击 类型，然后选择 8 位转换为 8 位图像。之后，通过转到调整阈值 图片， 调整，最后， 阈值.调整阈值以可视化图像中的所有原子核或点，同时避免过度饱和和结构崩溃。
此外，请注意不同图像中的值和测试。要转换为蒙版，请单击 处理， 二进制和 转换为蒙版.对于核心，单击 Process（进程）、Binary（二进制）和 Fill Holes（填充孔），然后单击 Process（进程）、Binary（二进制）和 Watershed（分水岭）。
对于 PLA 点，单击 Process、Binary 和 Watershed。对于细胞核计数，测量不同细胞核的面积或长度以估计平均大小。通过单击 Analyze 和 Analyze Particles 来使用近似值来分析粒子。
将大小设置为 15 个无穷大并检查选项。显示掩码、显示结果、清除结果、添加到管理器和在边缘上排除。要计算 PLA 点的数量，请测量它们的面积或半径以估计它们的平均大小。
对于 ROI 管理器上的每个 ROI，单击 Analyze 和 Analyze Particles。将大小设置为 0.02 到 3。检查选项、show mask、display results、clear results、summarize 和 excludes on edges。
保存结果，显示图像中存在的每个细胞核中每个细胞核的点数。与对照和 DMSO 处理的细胞相比，依托泊苷处理 20 分钟、1 小时和 3 小时后 DNA 损伤后，Nek4 Ku70 相互作用在细胞核中增加。与 DMSO 对照相比，依托泊苷处理显着增加了 Nek5 拓扑异构酶 2-β 相互作用。
依托泊苷处理 20 分钟后，γ-H2AX 染色增加，并在长达 3 小时内保持升高，表明 DNA 损伤反应持续。
