这项工作是由国家卫生部授予DK083327 DK093491研究院（SZH）的支持。

1。准备胰腺腺泡细胞钙成像<ol><li>准备HEPES孵育缓冲液含有20mM的HEPES，95 mM氯化钠，氯化钾4.7毫米，0.6毫米MgCl 2，1.3毫米的 CaCl 2，10mM葡萄糖，2mM谷氨酰胺，1×最小的Eagle培养基非必需氨基酸。调整最终的pH值至7.4，用NaOH溶液。 </li><li>准备一个BSA孵育缓冲液，HEPES培养缓冲液（如上所述），以25毫升，加入牛血清白蛋白（1％w / v的末期）。 </li><li>准备胶原酶消化缓冲液中，加入1.1毫克/毫升（200单位/毫升）-4型胶原酶和1毫克/毫升大豆胰蛋白酶抑制剂的6毫升BSA孵育缓冲液（如上所述）。 </li><li>两部分硝酸和盐酸2小时的一部分浸渍酸洗22x22毫米的盖玻片。然后倒出使用去离子水并存储在70％的乙醇。 </li><li> CO 2窒息安乐死一个鼠标。东方动物在仰卧位，并准备在腹部表面由CLE70％乙醇aning。进行剖腹探查，腹腔暴露。胰腺解剖，在一个小的权衡船含胶原酶消化缓冲液6毫升，立即用清水冲洗。 </li><li>解剖任何大块的脂肪或可见血管，然后取出5毫升胶原酶消化缓冲液，并将其重新添加到15毫升锥形管。 </li><li>使用精细解剖剪刀切末胰腺小称量船胶原酶消化缓冲液含1毫升。剁碎，直到所得的溶液均匀地分散。 </li><li>碎的产品转移到一个125毫升的锥形塑料烧瓶中，然后加入剩余的5毫升胶原酶消化缓冲液的容器中。确保组织被完全淹没在缓冲区。 </li><li>将烧瓶放置在37℃水浴中，振摇30分钟90转。在这短短的停机时间，准备钙激活受体激动剂（ 如蛙皮素，卡巴）和冲洗22x22毫米酸洗盖DI水单。干燥，然后放置在平坦的表面上的顶部的实验室膜内衬。 </li><li> 30分钟的消化完成后，转让暂停回来到15毫升锥形管，使细胞定居。小心吸取胶原酶消化缓冲液和更换BSA孵育缓冲液6毫升。管用手大力摇晃，持续10秒，以使细胞分散成更小的簇。摇晃时立即删除任何大，漂浮物从悬而未决的媒体。 </li><li>允许剩余的细胞来解决，新鲜BSA孵育缓冲和交换媒体。 </li><li>重复步骤1.11两次，直至吊销只有细微到肉眼可见的小群组成。细胞应类似于图1A中所示的（顶行）。 </li><li>删除了BSA的孵育缓冲和更换与HEPES孵化缓冲。 </li><li>准备一个750微米，100X股票氟上午04时，在10％DMSO。 </li><li>将细胞在15毫升锥形管中，将细胞悬浮液和无BSA-HEPES孵育缓冲液。要做到这一点，添加合适的音量（1:100稀释）的原液细胞悬液。然后板500微升这种悬挂到每一个22x22毫米盖玻片。 </li><li>在室温下，在黑暗中保持盖玻片。以第一的Ca 2 +测量30分钟后加载。染料被自动起动时的灌注，发生30分钟后，染料吸附量，从培养基中除去。 </li></ol> 2。测量胰腺腺泡细胞钙<ol><li>用DI水冲洗每个灌注设置，并用适量的缓冲或激动剂。总理缓冲区或激动剂每个注射器，以确保适当的流量。夹注射器环站约1-2英尺以上的显微镜阶段。 </li><li>用细镊子仔细掌握其边缘盖玻片含细胞悬液。盖倾斜滑45°，让多余的缓冲地跑了出去。顶部的橡胶垫圈与盖玻片上的细胞的盖玻片放置，装配腔（ 图2A和2B）。 </li><li>灌注室固定在舞台上，并插入油管包含缓冲室进入第一入口（ 图2C）。将含有缓冲液的注射器上，并允许缓冲液灌注在整个表面上的盖玻片。一旦缓冲区已达到的腔室的另一端，插入了真空线到真空进样口。任何其他管（含激动剂，抑制剂等 ）插入到相应的位置沿室。 </li><li>可视化的细胞，使用一个200X或400X，1.4数值孔径的目标和氩激光激发萤光上午04时的染料，在波长为488 nm（ 图1A，下图）。的激光的功率设置应进行调整，使光电倍增管（PMT）是不饱和的发射光。此外，PMT的两端的电压，需要进行优化，以最大的光检测。 </li><li>大于515 nm的长通的发射信号被收集在帧速度为2-5秒/帧的可视化用于可视化的速度，全球钙波（ 图3和4）的缓慢振荡模式和0.2-0.3秒/帧。 </li><li>成像完成后，关闭注射器和删除所有的管子。拆卸室，并重复步骤2.2-2.4。 </li><li>荧光强度随着时间的推移和转移到图像J的数值（由美国国立卫生研究院免费提供的软件包，可以发现在<a href="http://rsb.info.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsb.info.nih.gov/ij/</a> ）收集数据。 </li><li>查看实时蜂窝图像识别地区的利益（投资回报， 即心尖，基底核等 ） </li><li>采集荧光强度，这些投资回报率和represent荧光强度/基线荧光强度（ 即 F/F0）的。 </li><li>通过绘制F / F 0与生成描时间。除了描记，代表图像通常使用伪显示。 </li></ol> 3。胰腺腺泡细胞制备细胞损伤分析<ol><li>暖DMEM F-12媒体（不含酚红）至37°C。 </li><li>添加BSA（0.1％w / v的末期），和HCl（50μM最终）的DMEM F-12介质中。 </li><li> 50毫升的DMEM培养液分装成一个圆锥形管。 </li><li>准备一个缓冲区胶原酶IV型胶原酶0.5毫克/毫升（12单位/毫升），加入10毫升补充的DMEM F-12介质。 </li><li> CO 2窒息安乐死一个鼠标。东方动物在仰卧位，并准备用70％乙醇清洗腹部表面。进行剖腹探查，腹腔暴露。胰腺解剖，并立即用清水冲洗，一个小称量船Çontaining 6毫升胶原酶缓冲区中。 </li><li>剁碎组织使用精细解剖剪刀3-5分钟或直到出现所得溶液均匀地分散。 </li><li>碎组织转移到一个125毫升的锥形烧瓶中加入额外的的胶原酶缓冲区，然后将用5毫升到37℃水浴中振荡5分钟，以90 rpm。 </li><li>从摇床中删除，使细胞简要定居，并交换用5毫升的新鲜胶原酶缓冲。然后孵育一个额外的35分钟，在37℃水浴振荡在90转。 </li><li>大力悬浮消化，用移液管停牌，直至出现均匀无明显的细胞团块。然后轻轻移液管将细胞悬浮液通过一个预湿的尼龙网丝成锥形瓶中。 </li><li>大力吸取额外的3毫升新鲜的DMEM F-12介质（用胶原酶），通过网孔，，以迫使任何剩余的细胞通过。 </li><li>添加另一个6-10毫升的DMEM F-12媒体和LLOW细胞下沉2-3分钟。重复此步骤两次，最后一次洗涤后，去除上清。 </li><li>新鲜的DMEM F-12介质，悬浮细胞，和板500μl的细胞悬浮液添加到48孔组织培养板的各孔中。的细胞应类似于图1B中所描述的那些。 </li><li>允许坐板在37℃水浴90转5分钟，然后再添加激动剂。 </li><li>刺激细胞不同激动剂2-4小时。 </li><li>倾斜板成一角度，以使细胞沉淀，并仔细吸取介质（通常为100微升）的等分试样和闪光灯在液氮中冷冻。 </li><li>闪光冻结剩余的细胞悬液。闪光冻结是没有必要为LDH测量。作为一种替代的样品可以保存在冰中，如果他们将被测定的当天，或储存在-20℃下长期贮存。 </li></ol> 4。测量乳酸脱氢酶泄漏<ol><l&gt;测量乳酸脱氢酶（LDH）活性，主要使用Promega公司利用CytoTox 96非放射性细胞毒性检测试剂盒（见表特定的试剂和材料）中提供的试剂和说明。 </li><li>每瓶12毫升测定缓冲液（试剂盒中提供的），乳酸脱氢酶（LDH）衬底（亦提供）。 </li><li>解冻冷冻的细胞悬浮液和培养基样品在室温下在水浴中。 </li><li>板50微升在96 - 孔板的每一个媒体样本。 </li><li>在细胞悬浮液中，添加必要的10倍体积的裂解缓冲液，使最终浓度为1X。轻轻振荡后，在37℃60分钟。 </li><li>溶解的样品在250×g离心4分钟，沉淀细胞碎片。 </li><li>对于细胞裂解物，板加入50μl1:10稀释到96孔板的各孔中。 </li><li>重组后的基板向每孔中加入50μl，在室温下在黑暗中孵育板30分钟。 </li><li>停止反应，终止液（在试剂盒提供），向每孔加入50μl。 </li><li>测量在490nm处的吸光度。 </li><li>使用下列公式计算％LDH漏出。减去一个空白的OD值的读数从一个仅含有PBS中，衬底的下面的光的密度进行校正，并停止溶液。 </li></ol> LDH媒体=（OD492媒体）×（媒体稀释倍数）×（第一卷媒体）*由于它通常是不必要的媒体样本稀释，稀释因子将最经常equal1的。 总LDH =（（裂解液OD 490）×（裂解液稀释倍数）×（第一卷细胞悬液））+（（媒体外径490）×（稀释倍数）×（分装取样媒体第一卷）） <img alt="公式1" fo:src="/files/ftp_upload/50391/50391eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50391/50391eq1.jpg" /> 5。胰腺腺泡细胞感染腺病毒<ol><li>准备胰腺腺泡细胞在第3节。 </li><li>步骤3.12，新增10 7传染性单位（IFUs）的腺病毒的细胞悬液孵育30分钟，在37°C </li><li>均匀板2 ml的细胞悬液，在6孔板中。 </li><li>对于大多数表达结构，细胞应充分感染18小时内和一些荧光素酶的结构，只是在6小时内。 </li></ol>

<ol>
	<li>Toescu, E. C., Lawrie, A. M., Petersen, O. H., Gallacher, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+distribution+of+agonist-evoked+cytoplasmic+Ca2++signals+in+exocrine+acinar+cells+analysed+by+digital+image+microscopy.">Spatial and temporal distribution of agonist-evoked cytoplasmic Ca2+ signals in exocrine acinar cells analysed by digital image microscopy.</a> Embo J. 11, 1623-1629 (1992).</li><li>Ito, K., Miyashita, Y., Kasai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromolar+and+submicromolar+Ca2++spikes+regulating+distinct+cellular+functions+in+pancreatic+acinar+cells.">Micromolar and submicromolar Ca2+ spikes regulating distinct cellular functions in pancreatic acinar cells.</a> Embo J. 16, 242-251 (1997).</li><li>Husain, S. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ryanodine+receptor+mediates+early+zymogen+activation+in+pancreatitis.">The ryanodine receptor mediates early zymogen activation in pancreatitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 14386-14391 (2005).</li><li>Raraty, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-dependent+enzyme+activation+and+vacuole+formation+in+the+apical+granular+region+of+pancreatic+acinar+cells.">Calcium-dependent enzyme activation and vacuole formation in the apical granular region of pancreatic acinar cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 13126-13131 (2000).</li><li>Orabi, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dantrolene+mitigates+caerulein-induced+pancreatitis+in+vivo+in+mice.">Dantrolene mitigates caerulein-induced pancreatitis in vivo in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299, G196-G204 (2009).</li><li>Shah, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protease+Activation+during+in+vivo+Pancreatitis+is+Dependent+upon+Calcineurin+Activation.">Protease Activation during in vivo Pancreatitis is Dependent upon Calcineurin Activation.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. , (2009).</li><li>Muili, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+and+genetic+inhibition+of+calcineurin+protects+against+carbachol-induced+pathologic+zymogen+activation+and+acinar+cell+injury.">Pharmacologic and genetic inhibition of calcineurin protects against carbachol-induced pathologic zymogen activation and acinar cell injury.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. , (2012).</li><li>Orabi, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+enhances+carbachol-induced+protease+activation+and+accelerates+Ca2++waves+in+isolated+rat+pancreatic+acini.">Ethanol enhances carbachol-induced protease activation and accelerates Ca2+ waves in isolated rat pancreatic acini.</a> J. Biol. Chem. 286, 14090-14097 (2011).</li><li>Nathanson, M. H., Padfield, P. J., O'Sullivan, A. J., Burgstahler, A. D., Jamieson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+Ca2++wave+propagation+in+pancreatic+acinar+cells.">Mechanism of Ca2+ wave propagation in pancreatic acinar cells.</a> J. Biol. Chem. 267, 18118-18121 (1992).</li><li>Reed, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+extracellular+pH+induces+damage+in+the+pancreatic+acinar+cell+by+enhancing+calcium+signaling.">Low extracellular pH induces damage in the pancreatic acinar cell by enhancing calcium signaling.</a> J. Biol. Chem. 286, 1919-1926 (2011).</li><li>Amsterdam, A., Jamieson, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+isolated+pancreatic+exocrine+cells.">Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 69, 3028-3032 (1972).</li><li>Van Acker, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+progression+locus-2+is+a+critical+regulator+of+pancreatic+and+lung+inflammation+during+acute+pancreatitis.">Tumor progression locus-2 is a critical regulator of pancreatic and lung inflammation during acute pancreatitis.</a> J. Biol. Chem. 282, 22140-22149 (2007).</li><li>Ito, K., Miyashita, Y., Kasai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+control+of+multiple+forms+of+Ca(2+)+spikes+by+inositol+trisphosphate+in+pancreatic+acinar+cells.">Kinetic control of multiple forms of Ca(2+) spikes by inositol trisphosphate in pancreatic acinar cells.</a> J. Cell Biol. 146, 405-413 (1999).</li><li>Leite, M. F., Burgstahler, A. D., Nathanson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++waves+require+sequential+activation+of+inositol+trisphosphate+receptors+and+ryanodine+receptors+in+pancreatic+acini.">Ca2+ waves require sequential activation of inositol trisphosphate receptors and ryanodine receptors in pancreatic acini.</a> Gastroenterology. 122, 415-427 (2002).</li><li>Paredes, R. M., Etzler, J. C., Watts, L. T., Zheng, W., Lechleiter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+calcium+indicators.">Chemical calcium indicators.</a> Methods. 46, 143-151 (2008).</li><li>Schild, D., Jung, A., Schultens, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+calcium+entry+through+calcium+channels+in+olfactory+receptor+neurones+using+a+laser+scanning+microscope+and+the+calcium+indicator+dyes+Fluo-3+and+Fura-Red.">Localization of calcium entry through calcium channels in olfactory receptor neurones using a laser scanning microscope and the calcium indicator dyes Fluo-3 and Fura-Red.</a> Cell Calcium. 15, 341-348 (1994).</li><li>Saluja, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretagogue-induced+digestive+enzyme+activation+and+cell+injury+in+rat+pancreatic+acini.">Secretagogue-induced digestive enzyme activation and cell injury in rat pancreatic acini.</a> Am. J. Physiol. 276, 835-842 (1999).</li><li>Husain, S. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ryanodine+receptors+contribute+to+bile+acid-induced+pathological+calcium+signaling+and+pancreatitis+in+mice.">Ryanodine receptors contribute to bile acid-induced pathological calcium signaling and pancreatitis in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. , (2012).</li><li>Gurda, G. T., Guo, L., Lee, S. H., Molkentin, J. D., Williams, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholecystokinin+activates+pancreatic+calcineurin-NFAT+signaling+in+vitro+and+in+vivo.">Cholecystokinin activates pancreatic calcineurin-NFAT signaling in vitro and in vivo.</a> Mol. Biol. Cell. 19, 198-206 (2008).</li></ol>

没有利益冲突的声明。

细胞分离方法和随后的分析这里描绘了强有力的工具来研究生理和病理的胰腺外分泌功能。隔离分散胰腺腺泡细胞的方法最早是由阿姆斯特丹和贾米森在1972年11。这里介绍的方法已经适应从更近的隔离方法由范·阿克尔和同事12。虽然这些技术是高度可重复性，也容易学习的，有几个重要的功能，必须进行精确的每个方法。了解这些技术的细节将允许更容易故障排除和改进应用。 <...

胞内钙离子的动态变化是必要的生理和病理腺泡细胞事件。这些不同的效果被认为是导致钙从不同的空间和时间模式的钙信号1。例如，从腺泡细胞分泌的酶和流体与钙尖峰其中分泌发生根尖极受限制的区域。与此相反，一个全球性的钙波强烈的非振荡钙信号与早期导致急性胰腺炎3,4的病态事件。这些措施包括腺泡内的蛋白酶激活酶的分泌减少，腺泡细胞损伤。我们的实验室使用孤立的胰腺腺泡研究这些早期病理事件，导致疾病在体内和体外 5-7。这里详细描述的方法为目的的测量CY隔离主要腺泡细胞tosolic钙水平和细胞的损伤。这些细胞中腺病毒感染的方法也被提供。

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mice</td>
 <td>NCI</td>
 <td>N/A</td>
 <td>Male 20-30 grams; virtually any strain should yield comparable results.</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HEPES</td>
 <td>American Bioanalytical</td>
 <td>AB00892</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium Chloride</td>
 <td>J.T. Baker</td>
 <td>3624-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Potassium Chloride</td>
 <td>J.T. Baker</td>
 <td>3040-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Magnesium Chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>M-8266</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium Chloride</td>
 <td>Fischer</td>
 <td>C79</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dextrose</td>
 <td>J.T. Baker</td>
 <td>1916-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>L-Glutamine</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>G-8540</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1X minimum Eagle's medium non-essential amino acid mixture</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>11140-050</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium Hydroxide</td>
 <td>EM</td>
 <td>SX0593</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bovine Serum Albumin</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A7906</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>4188</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Soybean Trypsin Inhibitor</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>T-9003</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Carbon Dioxide</td>
 <td>Matheson Gas</td>
 <td> 124-38-9 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>125 ml Erlenmeyer plastic flask</td>
 <td>Crystalgen </td>
 <td>26-0005</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dissection kit</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>14161-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>70% Ethanol</td>
 <td>LabChem</td>
 <td>LC222102</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>P1000, P100, P10 pipettes</td>
 <td>Gilson</td>
 <td>FA10005P</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Weighing boat</td>
 <td>Heathrow Scientific</td>
 <td>HS1420A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Plastic transfer pipettes</td>
 <td>USA Scientific</td>
 <td>1020-2500</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>15 ml conical tubes</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>352095</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 ml conical tubes</td>
 <td>BD Falcon</td>
 <td>352070</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1.5 ml micro-centrifuge tube</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>05-408-129</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.65 ml micro-centrifuge tube</td>
 <td>VWR</td>
 <td>20170-293</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>22 x 22 mm glass coverslips</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>032811-9</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nitric Acid</td>
 <td>Fischer</td>
 <td>A483-212</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hydrochloric Acid</td>
 <td>Fischer</td>
 <td>A142-212</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Deionized water</td>
 <td>N/A</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18 x 18 mm coverslips</td>
 <td>Fischer</td>
 <td>021510-9</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Laboratory film</td>
 <td>Parafilm</td>
 <td>PM-996</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluo-4AM</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>F14201</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dimethylsulfoxide</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>D2650</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Luer lock</td>
 <td>Becton Dickinson</td>
 <td>932777</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>60 ml syringe</td>
 <td>BD Bioscience</td>
 <td>DG567805</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>23 &frac34; gauge needle</td>
 <td>BD Bioscience</td>
 <td>9328270</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PE50 tubing</td>
 <td>Clay Adam</td>
 <td>PE50-427411</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Flat head screwdriver </td>
 <td>N/A</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DMEM F-12, no Phenol Red</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>21041-025 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30.5 gauge needle</td>
 <td>BD Bioscience</td>
 <td>305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5 CC syringe</td>
 <td>BD Bioscience</td>
 <td>309603</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>25 ml Erlenmeyer flask</td>
 <td>Fischer</td>
 <td>FB50025</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nylon mesh filter </td>
 <td>Nitex</td>
 <td>03-150/38</td>
 <td>150 &mu;m pore size</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>48 well tissue culture plate</td>
 <td>Costar</td>
 <td>3548</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>96 well tissue culture plate </td>
 <td>Costar</td>
 <td>3795</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6 well tissue culture plate</td>
 <td>Costar</td>
 <td>3506</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Liquid nitrogen</td>
 <td>Matheson Gas</td>
 <td>7727-37-9</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cytotoxicity assay kit</td>
 <td>Promega</td>
 <td>G1782</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Adeno-GFP</td>
 <td>N/A</td>
 <td>N/A</td>
 <td>Gift from J. Williams</td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Equipment</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ring stand with clamps</td>
 <td>United Scientific</td>
 <td>SET462</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Perifusion chamber</td>
 <td>N/A</td>
 <td>N/A</td>
 <td>Designed by S.Z.H and colleagues at Yale University</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vacuum line</td>
 <td>Manostat</td>
 <td>72-100-000</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Water bath with shaker</td>
 <td>Precision Scientific</td>
 <td>51220076</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Confocal microscope</td>
 <td>Zeiss</td>
 <td>LSM 710</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>BioTek Synergy H1 plate reader</td>
 <td>BioTek</td>
 <td>11-120-534</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tissue culture hood</td>
 <td>Nuaire</td>
 <td>NU-425-600</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tissue culture Incubator</td>
 <td>Thermo</td>
 <td>3110</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

preparation of pancreatic acinar cells for the purpose of calcium imaging, cell injury measurements, and adenoviral infection

胰腺外分泌胰腺细胞是主要的实质细胞，进入胰管和胰腺酶的分泌起着主要作用。这也是网站发起胰腺炎。在这里，我们介绍了如何腺泡细胞分离从整个胰腺组织及细胞内钙信号的测量。此外，我们描述的技术，与腺病毒构建体转染这些细胞，并随后测量乳酸脱氢酶，细胞损伤的标志物的泄漏，以及在体外诱导腺泡细胞损伤的条件。这些技术提供了强大的工具来表征腺泡细胞生理和病理。

腺泡细胞钙测量的生理刺激的反应的一个例子在图3中提供。腺泡细胞钙装有染料和荧光4灌注乙酰胆碱模拟氯化氨甲酰胆碱（CCh的1μM））8。细胞的反应中的钙波的形式，从而启动在顶端区域，并传播到在基底外侧区域3,9。 如图3B中所示的代表轨迹的呈现出的典型的峰值高原通常观察1μM的氯化氨甲酰胆碱的图案。相反，使用次最大剂量的胆囊收缩素类似物...

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Preparation of Pancreatic Acinar Cells for the Purpose of Calcium Imaging, Cell Injury Measurements, and Adenoviral Infection

我们描述一个可重复的方法准备从小鼠小鼠胰腺腺泡细胞研究生理和病理相关刺激腺泡细胞钙信号和细胞损伤的目的。这些细胞中腺病毒感染的方法也被提供。

制备胰腺腺泡细胞钙成像的目的，细胞损伤的测量，以及腺病毒感染

The pancreatic acinar  cell is the main parenchymal cell of the exocrine pancreas and plays a primary  role in the secretion of pancreatic enzymes into ...

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13.1K 次观看.  Children's Hospital of Pittsburgh of UPMC. 我们描述一个可重复的方法准备从小鼠小鼠胰腺腺泡细胞研究生理和病理相关刺激腺泡细胞钙信号和细胞损伤的目的。这些细胞中腺病毒感染的方法也被提供。