This work was funded by the DFG (SFB 779 TPB8, Kr1879/3-1 MRK), DIP grant (MRK), EU FP7 MC-ITN NPlast (MRK), Center for Behavioral Brain Sciences (CBBS, Sahsen-Anhalt), (AK and SB), MM is a recipient of European Molecular Biology Organization (EMBO) Long-Term Fellowship (EMBO ALTF 884-2011) and Marie-Curie IEF.

从成年大鼠脑1。制备急性海马脑片<ol><li>麻醉大鼠异氟醚。注意：执行使用封闭exicator的过程中，不要吸入异氟醚。确保动物完全麻醉。 </li><li>杀头的大鼠，迅速 ​​隔离大脑，并沉浸在precarbonated（95％O 2/5％CO 2的混合气体）冰冷Gey中的溶液（组成MM：130氯化钠，4.9氯化钾，1.5氯化钙2·2H 2 O ，0.3硫酸镁4·2H 2 O，11氯化镁2·6H 2 O，0.23 KH 2 PO 4，0.8的Na 2 HPO 4·7H 2 O，5个葡萄糖·H 2 O，25 HEPES，22 碳酸氢钠 ，pH值7.32） 30分钟1,2,10,16。 </li><li>取下内嗅皮层，小脑和组成部分。与正中矢状切分出皮质半球，然后将每个半球倒在其内侧表面。此后使50-70°切割（50-70°横向）沿着每个半球13,14的背缘。 </li><li>胶水每个半球的切片系统的切片平台上的新鲜切割面。该平台应涵盖precarbogenated冰冷Gey中的解决方案。 </li><li>切350微米50-70°横切片由前至后一边用调整，以减少Z轴振荡àvibratome。海马结构，subicular和内嗅皮质，以及它们位于背侧海马的皮层将用于实验13,14的条带的一部分。 </li><li>转移海马为马蹄形，并浸没式孵化器和孵化至少2小时，在32℃，carbogenated人工脑脊液（学联含MM：110氯化钠，氯化钾2.5，2.5氯化钙2·2H 2 O，1.5硫酸镁4·2H 2 O，1.24 KH 2 PO 4，10葡萄糖·H 2O，27.4 碳酸氢钠 ，pH值7.3），1,2,10,16。 </li></ol> 2，定位电极的基线记录，和LTP的诱导<ol><li>海马切片传送到​​安装在显微镜下浸没式录音室。灌注（6-7毫升/分钟）与carbogenated ACSF中至少30分钟，在32℃下。 </li><li>准备玻璃毛细管微电极填充学联（尖阻力为3-5MΩ）。 </li><li>放置一个玻璃微电极填充ACSF中的CA1谢弗抵押纤维的刺激和在海马CA1辐射层为fEPSP记录1,2,10（ 图2）。电极之间的距离应为大约300微米。 </li><li>由谢弗抵押纤维与双相方波电流脉冲（200毫秒/极性）的刺激的范围3-4五唤起场兴奋性突触后电位（fEPSPs）加强</li><li>通过测量INP执行的最大刺激试验UT输出关系和定义的刺激强度作为获得最大fEPSP斜率值的40％，并保持它在整个实验常数。 </li><li>开始基线记录的最大刺激试验后至少15分钟。测量的响应来测试刺激整个实验过程中，每分钟。执行基线记录用低频刺激。 </li><li>记录基线为至少30分钟。 </li><li>对于晚期LTP的诱导采用高频100赫兹强直电刺激由三个1秒刺激的列车在100赫兹有5分钟intertrain间隔。为了增加在CA1区5微米荷包牡丹碱刺激的字段可以洗2分钟强直电刺激之前和最后强直电刺激后，应立即被淘汰。 </li></ol> 3，收集片的LTP和快速冷冻的诱导后<ol><li>停止LTP记录2分钟或强直性刺激的三列火车诱发晚期LTP后30分钟。 </li><lI&gt;取出电极，快速切片转移到precold金属平台上放置干冰。重复该过程控制切片保持在U型孵化器。注意：使用手套，同时用干冰工作。 </li><li>收集在1.5ml试管和存储每片在-80℃。 </li></ol>从海马CA1区4​​核的分离富集馏分<ol><li>取1.5毫升的Eppendorf管中冷冻切片从-80℃并保持在冰上。 </li><li>加入0.5ml的新鲜冷的TBS缓冲液含有蛋白酶（PI）和磷酸酶（PS）的抑制剂，进入管毫升。孵育2-3分钟，并传输到立体。注意：使用防护手套和实验室外套，同时采用PI和PS工作。 </li><li>解剖用两针的海马CA1锥体层区域。用一针，用于保持在体视显微镜和第二针用于切割CA1区下的切片。 </li><li>收集解剖CA1区域从5片（每组）到新的1.5毫升试管中含有50μl的裂解缓冲液（1×含以mM低渗裂解缓冲液：10 HEPES，1.5的MgCl 2，10的KCl，pH值7.9，用PI和PS）。请注意，此材料用量将足以运行2-3免疫印迹。 </li><li>均质化通过小心移液上下收集的组织。用200微升吸管。在冰上孵育的裂解液为5-7分钟以使细胞溶胀。 </li><li>取2微升的裂解液，滴在显微镜载玻片，并可视化明视场显微镜下的细胞的肿胀。与细胞的正常肿胀的细胞核显示为圆形完整结构。 </li><li>收集20微升样品到新的1.5 ml管的“匀浆分数”。添加8微升变性4×SDS上样缓冲液中。 </li><li>离心剩余的溶胞产物在11000 rpm离心1分钟。 </li><li>小心地从顶部（&#39;胞浆部分“）收集上清液，TRansfer到一个新的管中，加入20微升的4倍上样缓冲液。 </li><li>悬浮颗粒在60微升低渗缓冲液加入20μl4X采样缓冲区。该馏分被称为一个“核浓缩部分&#39;。 </li><li>匀浆，胞浆和核富含分可以储存在-20℃或-80℃，以后免疫。 </li></ol> 5，半定量免疫印迹的突触核蛋白质<ol><li>解冻的样品和在95℃下煮沸5分钟。 </li><li>采取从每个级分5微升，并确定由氨基黑测试或BCA测试中的蛋白质浓度。 </li><li>装载于SDS-PAGE电泳从匀浆等量的蛋白样品，细胞质和细胞核富集馏分。从控制和LTP切片样品应放置在同一凝胶的直接比较。 </li><li>执行标准的西方印迹程序（湿传递推荐）。 </li><li>探索与T膜他抗体的选择。随后，同样的印迹（或并行运行同一样品）可以探测与细胞质标记 - 神经元特异性enolase2（NSE2）和核标志 - 的NeuN和肌动蛋白抗体作为内参。 </li></ol> 6，数据分析<ol><li> LTP的诱导效率可以通过Clampfit软件进行分析。基线记录的平均坡度使用强直电刺激后的山坡上双因素方差分析，P比较&lt;0.05为差异有显著不同。该fEPSP斜率值在图中表示为均值±标准差</li><li>对于免疫印迹定量，无论是扫描的放射自显影胶片和分析蛋白条带通过的ImageJ或荧光带集成密度与LICOR系统。免疫反应性条带的数值应被归一化的负载和印迹控制。对于控制的比较和LTP的用户组nonparametrical采用Mann-Whitney U检验可能使用。 </li></ol><table border="0"CELLPADDING =“0”CELLSPACING =“0”&gt; <tbody><tr><td> 缓冲区的命名 </td><td> 试剂 </td><td> 浓度（mM） </td><td> 金额 </td><td> 评论/说明 </td></tr><tr><td> Gey中的溶液 （pH值：7.3〜7.4） </td><td>氯化钠</td><td> 130 </td><td> 7.6克</td><td>无菌过滤</td></tr><tr><td>千毫升</td><td>氯化钾</td><td> 4.9 </td><td> 0.37克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>氯化钙2·2H 2 O </td><td> 1.5 </td><td> 0.22克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>硫酸镁4·2H 2 O </td><td> 0.3 </td><td> 0.0739克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>氯化镁2·6H 2 O </td><td> 11 </td><td> 2.24克</td><td></td></tr><tr><td></td><td> KH 2 PO 4的</td><td> 0.23 </td><td> 0.0313克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>的Na 2 HPO 4·7H 2 O </td><td> 0.8 </td><td> 0.2145克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>葡萄糖·H 2 O </td><td> 5 </td><td> 0.9909克</td><td></td></tr><tr><td></td><td> HEPES </td><td> 25 </td><td> 5.96克</td><td></td></tr><tr><td></td><td> 碳酸氢钠 </td><td> 22 </td><td> 1.85克</td><td></td></tr><tr><td> 学联 （pH值：7.3〜7.4） </td><td>氯化钠</td><td> 110 </td><td> 6.428克</td><td>无菌过滤</td></tr><tr><td>千毫升</td><td>氯化钾</td><td> 2.5 </td><td> 0.1865克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>氯化钙2·2H 2 O </td><td> 2.5 </td><td> 0.368克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>硫酸镁4·2H 2 O </td><td> 1.5 </td><td> 0.370克</tD&gt; <td></td></tr><tr><td></td><td> KH 2 PO 4的</td><td> 1.24 </td><td> 0.169克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>葡萄糖·H 2 O </td><td> 10 </td><td> 1.9817克</td><td></td></tr><tr><td></td><td> 碳酸氢钠 </td><td> 27.4 </td><td> 2.3克</td><td></td></tr><tr><td> 1X低渗缓冲液 （pH值：7.9） </td><td> HEPES </td><td> 10 </td><td> 0.23克</td><td></td></tr><tr><td>百毫升</td><td>氯化镁2·6H 2 O </td><td> 1.5 </td><td> 0.0304克</td><td></td></tr><tr><td></td><td>氯化钾</td><td> 10 </td><td> 0.07455克</td><td></td></tr></tbody></table> 表1缓冲器。

<ol>
	<li>Behnisch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+translocation+of+Jacob+in+hippocampal+neurons+after+stimuli+inducing+long-term+potentiation+but+not+long-term+depression.">Nuclear translocation of Jacob in hippocampal neurons after stimuli inducing long-term potentiation but not long-term depression.</a> PLoS One. 6 (2), e17276 (2011).</li><li>Cai, F., Frey, J. U., Sanna, P. P., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+degradation+by+the+proteasome+is+required+for+synaptic+tagging+and+the+heterosynaptic+stabilization+of+hippocampal+late-phase+long-term+potentiation.">Protein degradation by the proteasome is required for synaptic tagging and the heterosynaptic stabilization of hippocampal late-phase long-term potentiation.</a> Neuroscience. 169 (4), 1520-1526 (2010).</li><li>Chapman, C. A., Perez, Y., Lacaille, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+GABA(A)+inhibition+on+the+expression+of+long-term+potentiation+in+CA1+pyramidal+cells+are+dependent+on+tetanization+parameters.">Effects of GABA(A) inhibition on the expression of long-term potentiation in CA1 pyramidal cells are dependent on tetanization parameters.</a> Hippocampus. 8 (3), 289-298 (1998).</li><li>Ch'ng, T. H., Uzgil, B., Lin, P., Avliyakulov, N. K., O'Dell, T. J., Martin, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+transport+of+the+transcriptional+coactivator+CRTC1+from+synapse+to+nucleus.">Activity-dependent transport of the transcriptional coactivator CRTC1 from synapse to nucleus.</a> Cell. 150 (1), 207-221 (2012).</li><li>Dieterich, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caldendrin-Jacob:+a+protein+liaison+that+couples+NMDA+receptor+signalling+to+the+nucleus.">Caldendrin-Jacob: a protein liaison that couples NMDA receptor signalling to the nucleus.</a> PLoS Biol. 6 (2), e34 (2008).</li><li>Fainzilber, M., Budnik, V., Segal, R. A., Kreutz, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+synapse+to+nucleus+and+back+again--communication+over+distance+within+neurons.">From synapse to nucleus and back again--communication over distance within neurons.</a> J. Neurosci. 31 (45), 16045-16048 (2011).</li><li>Hardingham, G. E., Bading, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+versus+extrasynaptic+NMDA+receptor+signalling:+implications+for+neurodegenerative+disorders.">Synaptic versus extrasynaptic NMDA receptor signalling: implications for neurodegenerative disorders.</a> Nat. Rev. Neurosci. 11 (10), 682-696 (2010).</li><li>Ivanov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposing+role+of+synaptic+and+extrasynaptic+NMDA+receptors+in+regulation+of+the+extracellular+signal-regulated+kinases+(ERK)+activity+in+cultured+rat+hippocampal+neurons.">Opposing role of synaptic and extrasynaptic NMDA receptors in regulation of the extracellular signal-regulated kinases (ERK) activity in cultured rat hippocampal neurons.</a> J. Physiol. 57, 789-798 (2006).</li><li>Jordan, B. A., Kreutz, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleocytoplasmic+protein+shuttling:+the+direct+route+in+synapse-to-nucleus+signaling.">Nucleocytoplasmic protein shuttling: the direct route in synapse-to-nucleus signaling.</a> Trends Neurosci. 32 (7), 392-401 (2009).</li><li>Karpova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encoding+and+transducing+the+synaptic+or+extrasynaptic+origin+of+NMDA+receptor+signals+to+the+nucleus.">Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus.</a> Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).</li><li>Kim, M. J., Dunah, A. W., Wang, Y. T., Sheng, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+roles+of+NR2A-+and+NR2B-containing+NMDA+receptors+in+Ras-ERK+signaling+and+AMPA+receptor+trafficking.">Differential roles of NR2A- and NR2B-containing NMDA receptors in Ras-ERK signaling and AMPA receptor trafficking.</a> Neuron. 46, 745-760 (2005).</li><li>Lai, K. O., Zhao, Y., Ch'ng, T. H., Martin, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importin-mediated+retrograde+transport+of+CREB2+from+distal+processes+to+the+nucleus+in+neurons.">Importin-mediated retrograde transport of CREB2 from distal processes to the nucleus in neurons.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (44), 17175-17180 (2008).</li><li>Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LTP+in+cultured+hippocampal-entorhinal+cortex+slices+from+young+adult+(P25-30)+rats.">LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats.</a> J. Neurosci. Methods. 130 (1), 19-32 (2003).</li><li>Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+analysis+of+activity-dependent+cyclic+AMP-responsive+element-binding+protein+phosphorylation+during+long-lasting+long-term+potentiation+in+area+CA1+of+mature+rat+hippocampal-organotypic+cultures.">Single cell analysis of activity-dependent cyclic AMP-responsive element-binding protein phosphorylation during long-lasting long-term potentiation in area CA1 of mature rat hippocampal-organotypic cultures.</a> Neuroscience. 131 (3), 601-610 (2005).</li><li>Perlson, E., Hanz, S., Ben-Yaakov, K., Segal-Ruder, Y., Seger, R., Fainzilber, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vimentin-dependent+spatial+translocation+of+an+activated+MAP+kinase+in+injured+nerve.">Vimentin-dependent spatial translocation of an activated MAP kinase in injured nerve.</a> Neuron. 45 (5), 715-726 (2005).</li><li>Xiang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+maintenance+of+mature+hippocampal+slices+in+vitro.">Long-term maintenance of mature hippocampal slices in vitro.</a> J. Neurosci. Methods. 98 (2), 145-154 (2000).</li><li>Zhao, M., Adams, J. P., Dudek, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern-dependent+role+of+NMDA+receptors+in+actin+potential+generation:+consequences+on+extracellular+signal-regulated+kinase+activation.">Pattern-dependent role of NMDA receptors in actin potential generation: consequences on extracellular signal-regulated kinase activation.</a> J. Neurosci. 25 (30), 7032-7039 (2005).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

在上述协议中所述的步骤提供指导如何准备从青年或成年大鼠海马急性切片，诱导和记录LTP，迅速解剖切片的刺激区域，并准备核浓缩部分的研究活动相关的蛋白质动力学。这种方法源于对彼此独立地使用几种不同的方法组合。我们优化的工作流程，并为初学者建立自己的实验后，LTP的诱导，研究蛋白质的亚细胞再分配提供足够的细节。作为一个例子，我们证明了LTP的晚期形式诱导S180的核积累磷...

突触N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDA受体）发挥在突触可塑性和细胞存活信号而激活突触外NMDA受体的可触发的神经变性和细胞死亡的关键作用。这些变化依赖于严密控制/受规管活动相关的基因表达，因此需要激活突触或树突和细胞核7之间不断的沟通。在MAP激酶ERK1 / 2的突触NMDA受体的信号的下游效应，并参与NMDA受体活化诱导的基因表达，而经由突触外NMDA受体信号没有或ERK1 / 2的活性8,11的抑制作用。 有迹象表明，已经显示出远端树突和细胞核之间穿梭蛋白的数量。许多这些蛋白质含有核定位信号，并正在积极沿着在动力蛋白和importin依赖性微管运输到核6,9。 InterestinglY，一些使者只是过境到细胞核针对特定突触的刺激。例如，环AMP应答元件结合蛋白2（CREB2）的逆行运输，通过化学股份有限公司但不LTP 12诱导。本地化的NMDA受体依赖的突触刺激驱动CREB调节转录共激活因子（CRTC1）进入细胞核，易位过程，其涉及在长期海马可塑性4。它最近的研究表明，该蛋白信使雅各布转位到后两个核，突触和突触外NMDA受体的激活和调节CREB依赖性基因转录的5。信号的突触和突触外原点编码雅各的翻译后修饰。突触活动引起雅各ERK1 / 2磷酸化依赖于在位置180（pJacobS 180）的一个关键丝氨酸这是一个必要的后续易位初级海马文化的核心。此外，我n个急性海马pJacobS 180转位到谢弗抵押LTP后核CA1区神经元而不是公司咯 。 pS180雅各导致的可塑性相关的基因表达增加，这基因表达反馈到突触功能。形成鲜明对比，雅各布该易位至细胞核后突触外NMDA受体活化不磷酸化在Ser180和可能具有不同的蛋白复合物有关在核中引起“CREB切断”和突触触头10回缩。 对突触核蛋白质的信使核进口的大多数已发表的研究中分离的神经细胞原代培养工作已经完成。因此，这将是有趣的，如果这样的调查结果可以复制使用海马生理更多的相关条件下神经元的连接和功能更好的保存。在这里，我们提出了一个优化的协议，以评估LTP-DE通过免疫印迹侧基的蛋白质信使核转。这个方法也适合于分析中的粗核级分的蛋白质的活性依赖的磷酸化。具体来说，目前的协议包括制备急性海马CA1区片，感应和记录的LTP。接着，CA1区用显微镜解剖，分离出刺激的区域。我们结合和修饰赵和他的同事17引入的更改提供CellLytic核抽提试剂盒的协议核隔离。优化过程包括解剖海马CA1区的低渗缓冲液裂解使细胞肿胀，核释放。细胞裂解和细胞核形态可以通过显微镜检查来确定。铀浓缩是一个短离心步骤来实现的。免疫印迹分析用抗体的NeuN和NSE2，核或细胞质级分的特异性标记物，表明该方法可以被用作快速和可重复的协议来隔离这些亚细胞组分，并研究样蛋白的磷酸化非常不稳定的翻译后修饰。此外，此方法是有利的，对于小的组织样本来自海马切片的CA1区解剖区域导出，并且可以组合使用，以海马切片的免疫组化分析。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 1. Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CED 1401 AD/DA converter</td>
			<td>Cambridge Electronics Design, UK</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axopatch 200B amplifier</td>
			<td>Axon&#65292;USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><a href="http://www.iciba.com/data_acquisition_system">Axon Digidata acquisition system</a></td>
			<td>Axon&#65292;USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clampex 10.0 Data acquisition and analysis software</td>
			<td>Axon&#65292;USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica microscope</td>
			<td>Leica TCS SP2&#65292;Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-97 Standard microelectrode puller</td>
			<td>Sutter&#65292;USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><a href="http://www.iciba.com/stereomicroscope">Stereomicroscope</a></td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica S4E, Germany</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibrotome</td>
			<td>Leica VT1000S, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolated pulse stimulator</td>
			<td>Model2100, A-M systmes, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific, HERAEUS, FRSCO17</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS-PAGE system</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooler</td>
			<td>JULABO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bright field Microscope</td>
			<td>NIKON ECLIPSE TS100</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture incubator</td>
			<td>Thermo Electron Corporation, HERAEUS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Luigs &#38; Neumann, SM-5, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blotting chamber and electric power supplier</td>
			<td>Hoefer Scientific Instruments, San Francisco</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooler</td>
			<td>Julabo, F12</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific, Heraeus, FRESCO 17</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submerged type Recording Chamber</td>
			<td>custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-shape and submerged type incubator&#160;</td>
			<td>custom made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small surgical scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin spatula</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Pasteur pipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic culture dish&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bunsen beaker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 2. Reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name of Reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>ROTH</td>
			<td>Art.-Nr.3957.1</td>
			<td>&#8805;99.5%, p.a.,ACS,ISO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>ROTH</td>
			<td>Art.-Nr.6781.1</td>
			<td>&#8805;99.5%, p.a.,ACS,ISO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183;2H2O</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>1.02382.0500</td>
			<td>pro analysi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&#183;2H2O</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>5886.05</td>
			<td>pro analysi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>CAS-NO: 7791-18-6; EC-NO:2320946</td>
			<td>for Molecularbiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>12034.025</td>
			<td>for Molecularbiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4&#183;2H2O</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>1.06574.1000</td>
			<td>extra pure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose&#183;H2O</td>
			<td>ROTH</td>
			<td>Art.-Nr.6887.1</td>
			<td>for Molecularbiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>ROTH</td>
			<td>Art.-Nr.9105.4</td>
			<td>PUFFERAN, &#8805;99.5%, p.a.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>1.06329.1000</td>
			<td>pro analysi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor Coctail</td>
			<td>ROCHE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphostop</td>
			<td>ROCHE</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicuculline</td>
			<td>Tocris bioscience</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Isofluran</td>
			<td>Baxter</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 4. Antibodies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary antibodies</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Species</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pJac-s180</td>
			<td>Biogenes/ purified</td>
			<td></td>
			<td>rabbit (dil. 1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NeuN</td>
			<td>Milipore</td>
			<td>MAB377</td>
			<td>mouse (dil. 1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSE</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>D20H2</td>
			<td>rabbit (dil. 1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-actin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-5441</td>
			<td>mouse (dil. 1:5,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Species</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG HRP Conjugated</td>
			<td>DAKO</td>
			<td></td>
			<td>goat anti - mouse (1:5,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG HRP Conjugated</td>
			<td>NEB</td>
			<td></td>
			<td>goat anti - rabbit (1:5,000)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of ca1 nuclear enriched fractions from hippocampal slices to study activity-dependent nuclear import of synapto-nuclear messenger proteins

学活性依赖的蛋白表达，细胞内转位，或磷酸化是必不可少的理解突触可塑性的潜在的细胞机制。长时程增强（LTP）和诱导的急性海马长时程抑制（LTD）被广泛地接受为学习和记忆的细胞模型。有迹象表明，使用活细胞成像和免疫组化的方法来可视化活动相关的蛋白质动力学大量的研究。然而，这些方法依赖于抗体的免疫细胞化学在单个神经元的荧光标记蛋白或过表达的适宜性。蛋白质的免疫印迹是一种替代方法提供的结果，独立确认。在制备由个别tetanized海马切片的亚细胞级分的第一限制因素是材料的低量。二，处理程序是至关重要的，因为升甚至很短，小的操作艾尔文片可能会引起一定的激活信号级联。在这里，我们描述，以便获得足够纯度的核浓缩部分的足够量的从大鼠脑急性海马切片的CA1区的优化工作流程。作为一个代表性的例子中，我们表明，突触核蛋白质的信使的ERK1 / 2磷酸化形式雅各积极进入细胞核后，诱导LTP，并且可以从CA1区神经元核浓缩部分进行检测。

之前我们已经表明，突触核蛋白质的信使雅各下诱导LTP，但不有限公司1个聚集在细胞核内。此外，刺激突触后转雅各需要激活蛋白激酶ERK1 / 2磷酸化雅各在Ser180（ 图1）。磷酸雅各易位至细胞核中的importin依赖性和磷酸化状态可以被保存在延长的时间周期由协会与中间丝αinternexin15（ 图1）。雅各的磷酸化状态是对的活性依赖性基因和细胞存活的表达很重要...

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Isolation of CA1 Nuclear Enriched Fractions from Hippocampal Slices to Study Activity-dependent Nuclear Import of Synapto-nuclear Messenger Proteins

我们提供了用于诱导的长时程增强，在海马CA1区和核富集级分的从片的tetanized区域的随后分离的详细协议。这种方法可以被用来确定活性依赖的核蛋白质导入在学习和记忆的细胞模型。

从海马CA1区片核富含分的分离，研究突触核信使蛋白质的活性依赖进口核

Studying activity dependent protein expression, subcellular translocation, or phosphorylation is essential to understand the underlying cellular ...

isolation-ca1-nuclear-enriched-fractions-from-hippocampal-slices-to

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Neuroscience

12.0K 次观看.  Leibniz Institute for Neurobiology. 我们提供了用于诱导的长时程增强，在海马CA1区和核富集级分的从片的tetanized区域的随后分离的详细协议。这种方法可以被用来确定活性依赖的核蛋白质导入在学习和记忆的细胞模型。 

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