与三机构的干细胞的倡议（斯塔尔基金会），这项工作是由来自瑞士国家科学基金会通过从NYSTEM（C026447 C026446）资助先进的研究人员的研究奖金支持。

1，文化传媒，涂层餐具和hPSCs维护的制备 1.1介质的制备注：过滤所有媒体灭菌和储存在4℃下在黑暗中长达2周。试剂名称，公司和产品编号列在材料表 。 <ol><li> DMEM/10％FBS：结合885毫升的DMEM 100毫升FBS，将10毫升青霉素/链霉素和5ml L-谷氨酰胺。 </li><li> HES-介质：联合800毫升DMEM/F12，200毫升KSR，加入5ml L-谷氨酰胺，将5ml青霉素/链霉素，将10ml的MEM最小必需氨基酸溶液，加入1ml的β-巯基乙醇。加入10毫微克/毫升过滤介质的FGF-2之后。 注意：β-巯基乙醇有毒，避免吸入，食入和皮肤接触。 </li><li> KSR-分化培养基：联合820毫升敲除DMEM中，加入150ml KSR，将10毫升L-谷氨酰胺，将10毫升青霉素/链霉素，将10ml的MEM最小必需氨基酸溶液和1ml的β-巯基乙醇。 </li><li> N2-differentiati对中：将12克DMEM/F12粉980毫升DH 2 O，加1.55克葡萄糖，2克小苏打和100毫克的APO人转。混合2毫升DH 2 O和25毫克人胰岛素和40微升1N NaOH中，加入溶解液的培养基中。加入100μl腐胺盐酸盐，60微升亚硒酸钠，100微升孕激素，并把音量调高至1 L DH 2 O。 </li></ol> 1.2涂层的培养皿<ol><li>基质胶涂层：解冻1毫升吹打19毫升DMEM/F12在等分，直到它已冻结溶解基质胶等分。通过一个40微米的细胞过滤器和板8 ml/10厘米盘子传递给它移除团块。孵育菜1小时在室温。立即电镀细胞前吸出基质胶。 注：与基质胶快的工作，因为它可以聚集在温度高于4℃。 </li><li> PO /林/ FN涂层：添加含有15微克/毫升聚-L鸟氨酸氢溴酸盐到10 cm培养皿10毫升1X PBS中。孵育菜过夜，在37°C。用1X PBS洗涤板一次，并添加1×PBS中含有2微克/毫升小鼠层粘连蛋白-I和2μg/ ml的纤维连接蛋白10 ml/10厘米的菜。孵育菜过夜，在37°C。电镀前的细胞中，完全除去溶液，并让平板站在它们到组织培养罩壁而不在盖彻底干燥在室温15-20分钟。 注：该菜是完全干燥，并准备细胞接种时，人们可以看到表面（肉眼可见）的晶体结构。所述板可保持在室温数小时在这个干燥状态。 PO /林/ FN菜必须提前准备时间2天。在紧急情况下，林先生/ FN可以培养只有2-4小时。然而，这也许会引起不理想的分化/生存结果。 </li></ol> 1.3维护hPSCs的注：hPSCs维持在0.1％明胶和有丝分裂灭活小鼠胚胎成纤维细胞（MEFS）在HES-培养基中添加10毫微克/毫升如前10,12所描述的FGF-2。这些细胞应该分开每6-8天。 <ol><li>外套10 cm培养皿用8ml 0.1％明胶（在1x PBS中没有镁或钙），在室温下5分钟。 </li><li>在37℃水浴中快速解冻冷冻的MEF。新增100万的MEF〜10毫升DMEM/10％FBS。 </li><li>吸出明胶和板的细胞。在37°C至少6小时。 </li><li>从准备MEF板吸出DMEM/10％FBS，用1X PBS洗涤板一次，并加入10 ml的HES-培养基中添加10μMY-27632二盐酸盐。允许介质进行预热，在37℃20分钟。 注意：对于hPSCs的手工分割层流罩具有嵌入显微镜使用。然而，所述细胞可以使用适当的替代方法进行传代。 </li><li>在层流罩与嵌入式显微镜，使用细胞升降机分离独立的殖民地，并让他们自由浮动。 </li><li>使用1ml注射器吸出漂浮的殖民地和派遣他们到了清新，温暖的MEF板。将大约四分之一的细胞的新菜。在37°C。 </li><li>每天用新鲜的HES中等进给单元格。 </li></ol> hPSCs 2。电镀的分化注：hPSCs应该分开或镀分化时，菌落较大，但仍然有尖锐的边缘与尽可能少的分化细胞在它们的边界（ 见图1B）。当细胞使用手动传代保持的菌落应足够大，以容易地通过眼睛看到。为了得到正确的感觉这个时间点可以维护一个单独的HPSC菜了两周，没有传代，观察细胞到达和经过的理想时间点传代/区分它们。 <ol><li>准备10厘米菜基质胶1小时开始分化之前。成功的基质胶涂层可以是以4倍的放大倍率验证。 </li><li>当hPSCs准备进行分割，吸出培养基并加入4毫升的0.05％胰蛋白酶-EDTA细胞中。 </li><li>水平摇动培养皿2分钟剧烈直到1可以看到的MEF为单细胞，在显微镜下剥离所述板。该HPSC殖民地保持连接的殖民地。 </li><li>立即，彻底，吸出胰蛋白酶，让站在板在室温下2-4分钟。 </li><li>加入2ml HES-介质的板块和使用P1000的移液管，取下电池。 注意：如果细胞不能轻易提起离开板面，该板可以用于另一个2-3分钟孵育空在RT。 </li><li>细胞转移到8毫升HES-培养基中添加10μMY-27632二盐酸盐。 </li><li>从预先准备的10cm皿吸出基质胶。板上的细胞以1:1或1:2的比例（例如：从一个10cm皿将细胞分成两10厘米菜）到基质胶盘。在37°℃过夜。 注：此电镀，就会导致约100,000个细胞/ cm 2。 </li></ol> 3，诱导神经分化注意：分化可以被启动（0天）时，细胞是90-100％汇合（ 见图1C），通常第二天。如果未达到准确汇合的是，该细胞可每日用HES培养基喂养，直到他们准备好差异化。或者，细胞镀的初始数量可以增加。 <ol><li>在第0天至3，每天喂细胞10 ml/10 cm培养皿中含有0.1微米LDN193189和10μMSB431542 KSR-分化培养基。 </li><li> 4日及5饲料的细胞用75％KSR-分化培养基和25％N2-分化培养基均含有LDN193189和SB431542。 </li><li>在第6天及7进料的细胞，用50％KSR-分化培养基和50％N 2 - 分化培养基中均含有LDN193189和SB431542。 </li><li>在第8天及9进料的细胞，用25％KSR-分化培养基和75％N 2 - 分化培养基中均含有LDN193189和SB431542。 </li><li>在9日和10准备PO /林/ FN菜肴在1.2.2所示的第11天细胞replating。 </li><li>每天上含10进细胞N2-分化培养基LDN193189和SB431542。 </li></ol> 4，在液滴数控规格Replating <ol><li>在一天11吸蓝/ FN从先前准备的板，让他们完全干燥在室温20-30分钟，如1.2.2所述。 </li><li>从分化细胞移除培养基，用1×PBS洗一次细胞加入8毫升accutase/10厘米的菜。孵育20分钟，在37℃下</li><li>使用细胞起苗，分离细胞和悬浮在其中的Accutase用5毫升吸管。该悬浮液转移到15毫升管。 </li><li>加入5 ml的1×PBS中，并旋转该细胞5分钟，在114×g下。 </li><li>重悬细胞于10ml 1x PBS中。为确保单细胞悬浮液，通过40微米的细胞滤网过滤它们并使用血细胞计数器或等同技术计数细胞。 </li><li>旋转细胞向下，重悬它们在含有200μM的抗坏血酸（AA），20纳克/毫升的BDNF，100纳克/毫升FGF8，20毫微克/毫升SHH，10μMY-27632二盐酸盐以100,000的浓​​度N 2 - 分化培养基-150,000 cells/10微升。 </li><li>使用重复移液器，板10微升滴接近对方没有他们接触到干燥的PO /林/ FN15厘米菜肴。 注：分化细胞的一个10 cm培养皿通常会导致大约2-3倍15厘米菜肴或约100×10微升droplets/15厘米的菜。 </li><li>让水滴站立在室温20-30分钟，然后很认真（不打扰滴）加到30毫升N2/AA/BDNF/FGF8/SHH/Y和孵化，在37°C。 </li><li>第12天，精心喂养细胞20 ml/15 cm培养皿N2/AA/BDNF/FGF8/SHH。 </li><li>从大Ÿ14-17养活细胞每隔第二或第三天与N2/AA/BDNF/FGF8。 </li><li>在16日和17准备PO /林/ FN板FACS分选后replate数控细胞。 </li></ol> 5，荧光激活细胞分选的NC细胞（FACS） 注：该细胞流式细胞仪的编制需要约2小时。 <ol><li>在18天删除介质，用1×PBS洗一次细胞在培养皿并添加12毫升的Accutase。于室温孵育20分钟，在37℃下</li><li>使用细胞挺杆，从表面分离细胞，并让它们自由浮动。吸取细胞进入暂停使用5毫升吸管，将它们转移到50毫升的试管，加入30毫升的1X PBS中。旋转细胞5分钟，在114×g下。 </li><li>使用P1000移液器，悬浮在1ml 2％FBS / HBSS（在HBSS中含有15mM的HEPES）的细胞。加19毫升的2％FBS / HBSS中，并通过一个40微米的细胞滤网过滤细胞，以确保单细胞悬浮液。冰上孵育的细胞15米在对抗体阻断，然后用血细胞计数器计数。 </li><li>旋下来的细胞，重悬在他们1000万细胞/ 2％FBS / HBSS毫升的浓度。 </li><li>预留100万单元，每个单元为未染色，单染（HNK-1只和p75只）和二级抗体染色只（APC只和488只），流式细胞仪控制。 </li><li> 1毫升悬液加入5微升的HNK-1和5微升的p75的主要抗体每10万个细胞，以适当的样品孵育20分钟冰。 </li><li>在10ml的1×PBS（离心5分钟，在114×g离心）洗涤细胞，重悬细胞于1ml的2％FBS / HBSS中。在1ml的悬浮液中加入2μl的APC和1μl的488次级抗体，每10万个细胞，以适当的样品，孵育20分钟在冰上于黑暗中。 注意：APC及488在这里用于HNK-1和p75染色，分别二次抗体。 </li><li>在10ml的1×PBS洗涤细胞两次，重悬千万细胞于500μl2％FBS / HBSS含DAPI（在0.5纳克/微升），或另一种合适的活细胞染色来排除死细胞的FACS分析。 </li><li>转移样品到适当的FACS管。 </li><li>制备FACS管用0.5毫升的2％FBS / HBSS进行细胞收集。 注：细胞和集合管中的排序时间保持在冰上，在黑暗中。 </li><li>用细胞分选机的激光器，可以检测DAPI，APC和488排序DAPI-/HNK-1 + / P75 +双阳性细胞。 注：制备时间和处理细胞的导致细胞死亡的一个很小的比例，DAPI染色死细胞仅从而允许这些细胞被排除在所划分的人口。任何替代活/死染色同样适用于这一目的。 DAPI本身不引起细胞毒性的活细胞群。 </li></ol> 6。Replating排序细胞，数控维护和扩展注：流式细胞仪分选细胞应该是手与领导的特殊照顾，以确保最佳的生存。让他们在冰上，直到replating他们。不要旋涡振荡或吸取他们严厉。该细胞可以通过轻弹管再悬浮。 <ol><li>流式细胞仪分选后，算上数控细胞，然后旋下来，重悬在N2分化培养基中，在适当的音量10毫微克/毫升FGF2，20 ng / mL的EGF和10μMY-27632二盐酸盐，以replate他们在30,000细胞/ 10微升滴。 </li><li>彻底干燥先前准备的PO /林/ FN板和每10 cm培养皿板约50-70滴。让站在菜在室温20-30分钟。 </li><li>非常小心地加入N2/FGF2/EGF/Y-27632 20 ml/10厘米的菜，而不会干扰液滴。孵育的细胞在37℃下</li><li>喂细胞每2-3天用N2/FGF2/EGF。 注：NC细胞膨胀或传代大约每隔4-5天，或当他们开始液滴内堆放。 </li><li>要通过数控细胞，去除培养基，WASH细胞一次用1×PBS加入8毫升accutase/10厘米的菜。孵育20分钟，在37℃下</li><li>吸取单元的电源使用5毫升吸管板，并将它们转移到15毫升管。加6毫升的1X PBS。 </li><li>旋转细胞5分钟，在114×g下。 </li><li>重悬细胞中的N2-分化培养基中，以便有20000 cells/10微升液滴补充有10纳克/毫升FGF2，20毫微克/毫升的EGF和10μM的Y-27632二盐酸盐。 </li><li> Replate细胞在10微升滴干上PO /林/ FN板。让站在菜在室温20-30分钟。 </li><li>小心加入N2/FGF2/EGF/Y-27632 20 ml/10厘米的菜。在37°C。 注：NC细胞可以维持或扩大长达2周为相对均匀的祖细胞群。较长的文化可能会导致它们分化成各种子代细胞类型。 </li></ol>

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作者没有利益冲突的披露。

对于R-NC细胞的人类胚胎干细胞从/人iPS细胞成功分化以下考虑应作出。这是至关重要的无菌培养条件下工作在任何时候。特别是，它要定期检测HPSC文化的支原体污染，因为这种污染会阻碍成功的差异化是重要的，但还不能轻易地在HPSC文化视觉检测。在R-NC分化应在90-100％的细胞密度被启动;低细胞密度的影响细胞存活和R-NC分化的效率。重要的是要凭经验验证最佳浓度和一些试剂的批号，特别是KSR支...

人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）和人类诱导多能干细胞（hiPSC）显示巨大的潜力，特别是人类疾病对没有良好的动物模型也主要组织提供的调查和今后的治疗。对人类胚胎干细胞/ hiPSC技术应用实例如下：可从人类胚胎干细胞/人iPS细胞生成的再生医学在无限数量1特别感兴趣的细胞。细胞可以从携带特定疾病的患者被制造，以及用于建立体外疾病模型2,3。这种疾病模型，然后可以在追求新的药物化合物4和现有药物的疗效和毒性5的测试被用于大规模药物筛选， 体外疾病模型可以导致新的疾病机制的鉴定。对于人类胚胎干细胞/ IPSC的技术的所有应用中的具体工作是很重要的，良好定义受影响的权益性疾病ð细胞类型。因此，固体和可重复的体外分化协议的可用性是对人类胚胎干细胞/ hiPSC技术的所有应用是至关重要的。协议是可取的，显示最小的变异性，时间牺牲，努力，其中胚胎干细胞/ hiPSC线和不同的研究者难度和成本，以及最大可再现性。 在表皮和神经上皮之间的脊椎动物神经胚形成神经嵴（NC）的细胞出现。它们增殖和迁移广泛地在整个发育中的胚胎和产生子代细胞类型的令人印象深刻的多样性，包括骨/软骨时，颅面骨，感觉神经，雪旺氏细胞，黑素细胞，平滑肌细胞，肠神经元，自主神经元，嗜铬细胞，心脏室间隔细胞，牙齿和肾上腺/甲状腺腺细胞6。因此，NC细胞是一个有吸引力的细胞类型的干细胞领域和对于重要的各种疾病，如先天性巨结肠7，家族性自律神经失调8以及癌症，如神经母细胞瘤9建模。此外，他们提供学习的体外人类胚胎发育的某些方面的可能性。 当前可用的和广泛应用的体外分化方案的数控细胞从人类胚胎干细胞10,11的推导需要长达35天分化的，它涉及到神经诱导的基质饲养细胞如MS5细胞，因而根据定义不明确的条件下进行。虽然它可以是按比例放大，以产生大量的NC细胞，例如需要用于高通量药物筛选4，这是劳动和成本密集型的。此外，它涉及神经花环，可以是难以再现的手动传代并且当它被施加于多种人类胚胎干细胞或hiPSC的因而是受总体变异性，特别是线。这里，示出了NC细胞在18天的协议，它是不含饲养细胞的逐步推导。这个方法是更短，比目前使用的协议更明确。此外，它是在生成的NC细胞不同hiPSC线中非常健壮。重要的是，它表明，数控细胞由双方协议产生出现在的神经花环（以下称为花环-NC或R-NC）的边界。无论是使用的两个协议所产生的细胞形态看起来是相同的，他们表达了同样的数控标记和聚集在一起的微阵列分析。使用新的协议（R-NC）衍生的NC细胞是功能性的，类似于使用旧协议（MS5-R-NC），使得它们可以迁移并进一步分化成神经元衍生的NC细胞。因此，这些细胞可以同时使用与MS5-R-NC细胞。数控细胞从人类胚胎干细胞/ IPSC的推导在R-NC细胞的协议将是对人类胚胎干细胞/ IPSC的技术涉及数控谱系的所有应用程序非常有用。&lt;/ P&gt;

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:897px;" width="897">
	<colgroup>
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	<tbody>
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			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Regents</td>
			<td style="width:219px;">company</td>
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			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
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			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM/F12</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>11330-032</td>
			<td></td>
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		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Knockout Serum Replacement</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>10828-028</td>
			<td>Lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Glutamine</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicinlin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MEM minimum essential amino acids solution&#160;</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
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			<td></td>
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		<tr height="20">
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			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>21985-023</td>
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		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Recombinant human FGF basic (FGF2)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>233-FB-001MG/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Knockout DMEM</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>10829-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM/F12 powder&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12500-096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium Bicarbonate&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">APO human transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Human insulin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Putriscine dihydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Selenite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Matrigel matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Poly-L Ornithin hydrobromide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse Laminin-I</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>3400-010-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fibronectin</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dispase in Hank&#39;s Balanced Salt Solution 5U/ml</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>7013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypsin-EDTA&#160;</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>25300-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Y-27632 dihydrochloride</td>
			<td>Tocris-R&#38;D Systems</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LDN193189</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SB431542</td>
			<td>Tocris-R&#38;D Systems</td>
			<td>1614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accutase</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AT104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ascorbic Acid&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BDNF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>248-BD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FGF8</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>423-F8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse recombinant sonic hedgehog (SHH)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>464SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HBSS</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>14170-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HEPES</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>1563-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Human recombinant EGF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>236EG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">gelatin (PBS without Mg/Ca)</td>
			<td>in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti HNK-1/N-Cam (CD57) mIgM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6680-100TST</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-p75 mIgG1 (Nerve Growth factor receptor)</td>
			<td>Advanced Targeting Systems</td>
			<td>AB-N07</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">APC rat anti-mIgM</td>
			<td>BD Parmingen</td>
			<td>550676</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">AlexaFluor 488 goat anti-mouse IgG1&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21121</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti Oct4 mIgG2b (used at 1:200 dilution)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-5279</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Material/Equipment:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse embryonic fibroblasts (7 million cells/vial)</td>
			<td>GlobalStem</td>
			<td>GSC-6105M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture dishes: 10cm and 15 cm plates, centrifuge tubes, FACS tubes,&#160; pipetts, pipet tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass hematocytometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture incubator (CO2, humidity and temperature controlled)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture laminar flow hood with embedded microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture biosafety hood</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell sorting machine, i.e. MoFlo</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Inverted microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1 ml TB syringe 27Gx1/2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell lifter Polyethylene</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3008</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

feeder-free derivation of neural crest progenitor cells from human pluripotent stem cells

人类多能干细胞（hPSCs）对研究人类胚胎巨大的发展潜力，在盘模拟人类疾病和移植细胞的疾病或意外事故后再生的应用程序的来源。神经嵴（NC）的细胞是前体种类繁多的成年体细胞，例如从外周神经系统和神经胶质细胞，黑素细胞和间充质细胞的细胞。它们是细胞来研究人类胚胎发育，包括细胞命运规范和迁移方面的重要来源。数控祖细胞进一步分化成终末分化的细胞类型提供模拟人类疾病的体外 ，研究疾病的机理及产生细胞再生医学的可能性。本文介绍了目前在体外分化协议数控细胞从hPSCs推导的适应。这个新的协议需要18天迪菲的rentiation，是无饲养，易于扩展和高重现性之间的人类胚胎干细胞（hESC细胞）线，以及人类诱导多能干细胞（hiPSC）线。旧的和新的协议得到平等的身份数控细胞。

在R-NC协议在MS5-R-NC协议11的两个最重要的改进是无饲养层，定义的分化条 ​​件和时间要求的整体缩短。 MS5料器单元13是已被证明可以从人胚胎干细胞14支持神经分化的鼠骨髓衍生的基质细胞。人类胚胎干细胞培养的MS5饲养层细胞密度低的形式上皮结构和神经花环15，在其外围的数控细胞出现10，从而模拟人类早期神经发育。然而，目前还不清楚什么信号分...

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Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

从人类多能干细胞（HPSC）源性神经嵴（NC）细胞具有模拟人类发展和疾病的细胞替代疗法的巨大潜力。这里，一个无饲养适应的目前广泛使用的<em&gt;在体外</em&gt;分化方案用于从hPSCs NC单元的推导给出。

从人多能神经嵴前体细胞的无饲养推导干细胞

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

feeder-free-derivation-neural-crest-progenitor-cells-from-human

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.1K 次观看.  Sloan-Kettering Institute for Cancer Research. 从人类多能干细胞（HPSC）源性神经嵴（NC）细胞具有模拟人类发展和疾病的细胞替代疗法的巨大潜力。这里，一个无饲养适应的目前广泛使用的在体外分化方案用于从hPSCs NC单元的推导给出。