这项工作是由德意志研究联合会（B＆K 196“Signaltransduktion北adaptativen UND maladaptiven kardialen改建-Prozessen”，FR 1638 / 1-2）以及由DZHK（德国中心心血管研究，健康研究的德国中心的部分支持，这是一个BMBF（德国教育和研究部的）行动）。

注：分离过程的基本步骤示于图1中的所有步骤都在下面详细描述的协议。乳头肌隔离，安装在器官浴室，采集和分析是在一个连续的和强制性的时间表进行。 所有的动物实验均按照有关保护动物的有德国法律进行，并批准了海德堡大学的伦理审查委员会。 1.准备仪表<ol><li>对于收缩测量使用多节器官浴设置。 离体收缩器官浴中设置的组件示于图2。 注意：为尽量减少的时间制备的乳头肌和实验方案的开始之间的时间量，建立设备和事先准备缓冲器收集实验tissue.This provid上课的时间，该组织保持生存能力进行实验的最大量。 </li><li>启动计算机和数据采集设备。打开器官浴热（预设为32℃），并允许单位预先设定的温度。 </li><li>准备采集设备。启动中提到的软件手册记录数据。 </li><li>检查，并进行校准（如有必要）在每个通道上，零所有通道从各自的力换能器（与该信道相关联）提供的电信号标准化到由经认证的重量供给2克力。 </li><li>开启气体供给（95％O 2/5％CO 2）到器官浴室中。连续气在整个协议的所有测量室。 </li></ol> 2.准备缓冲区和生理解决方案<ol><li>准备一个的Krebs-Henseleit缓冲溶液以达到最终浓度为119毫摩尔NaCl; 25毫米的NaHCO 3; 4.6毫米氯化钾; 11MM葡萄糖; 1毫米的Na-Pyruvate; 1.5毫米氯化钙2; 1.64毫米硫酸镁 ; 1.18毫KH 2 PO 4和调节pH值至7.4（见表1的生理溶液）。 </li><li>制备单独的Krebs-Henseleit缓冲溶液如步骤2.1中所述用另外30毫2,3-丁二酮单肟（BDM）和50的IE肝素/毫升隔离期间使用。凉溶液至4℃（见表1制备的溶液）。缺血模拟，如表1中所述制备缺血溶液。 </li><li>对于钙离子的协议-依赖性收缩， 钙离子加入到的Krebs-Henseleit缓冲溶液到请求的最终浓度。 注意：它直接使用前准备这些解决方案，并与卡波盖斯以避免Calciumcarbonate沉淀。使用前Prewarm解决方案，以32℃。 </li></ol> 3.准备的乳头切除术过程中使用的冲气管道和解剖菜<ol><li>连接软气唱管（外径2-4毫米），气体连接（100％的氧气，卡波备选地）与专家工作。 </li><li>创建冲气管解剖盘内配合的封闭环。穿刺放气管数次，一个连续鼓泡是有保证的。此放气管可多次使用。 </li><li>制备夹层菜与硅弹性体在底部（0.5厘米厚），以使销可以卡到其中。此菜可多次使用。 </li></ol> 4.分离的小鼠左前乳头肌注：在启动乳头肌的隔离前，检查煤气管道是畅通无阻的。 <ol><li>准备器官浴设置为启动乳头肌的准备之前提到的协议部分1-3。制备所有溶液在实验当天。 </li><li>颈椎脱位accordi牺牲鼠标（约8-12周龄）NG专家的工作和机构准则。 </li><li>通过固定前爪固定在背侧位置的动物和后爪上的夹层板，通过与锋利的骨剪刀肋切割打开两侧的胸腔侧，然后切断与一个横向切口隔膜。取出心包。现在的心脏和主动脉的访问。 </li><li>修复钝钳的心脏上的血管共干靠近心脏，迅速分开心脏与肺部剪刀和周围的组织。 </li><li>跳动的心脏转移至培养皿装有充以氧（步骤2.2）中的冷却溶液制备。让心脏跳动，并通过触摸心尖钳刺激心脏收缩轻声。 </li><li>一旦该心脏完全exsanguinous，其传输到解剖盘充满冷却制备溶液（步骤2.2）和通入O 2。从这个步骤上使用立体显微镜。 </li><li>修复老天室温通过右心室使心脏从背部可见（右心室位于右侧，从运营商的观点）一个小针。 </li><li>采用显微剪刀分开两个心房的房室水平，切从心室连接组织并丢弃。通过从AV-阀级到心脏，避免任何机械压力的顶点室壁执行剪切。 </li><li>打开心室和修复左路游离壁用钳子，因此具有一起来看看这两个左心室乳头肌。 </li><li>略切去上左前乳头肌的两侧保持在乳头肌制备瓣膜帆的一部分的心室组织的横向和避免接触或拉伸乳头肌尽可能。解剖从乳头肌的其余室壁组织。 </li><li>在乳头肌准备两侧安装丝线（7/0，指标0.5）aration，一个在瓣膜帆，一个在肌肉部分。修复准备在器官浴室充满器官浴的解决方案，并通入卡波，温度32℃的建议。 </li></ol> 5.平衡乳头肌和刺激<ol><li>在器官浴中的固定后立即刺激乳头肌制备的矩形脉冲（2毫秒持续时间和100mA的电流）在1赫兹的刺激频率。 </li><li>确保器官浴溶液的频繁变化，或者通过连续变化或根据所使用的器官浴类型的设置频繁地手动改变（每5分钟）。 </li><li>逐步提高预紧直到最大抽搐力达。后面没有进一步增强在抽搐力预紧的增加时，最大抽搐力达到。 </li><li>平衡后的45-60分钟，开始实验方案。 </li></ol>注意：下面列出的实验方案包括标准的机动生理和病理条件下心肌收缩的特点。在代表节中，我们还详细示出代表性的结果说明这些协议（也见表2）。 <ol><li>记录和试验方案分析<ol><li>对于记录，使用合适的软件，有足够的时间分辨率（采集率≥1kHz时）。 </li><li>分析参数，包括抽搐力的振幅（高度），达峰时间张力（TTP）和半数最大松弛时间（R 50 / TFALL，分别）中提到的软件程序（如实施例图表的ADInstruments 5.5， 参见图4）。 </li></ol></li></ol>

<ol>
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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Influence+of+the+Interval+between+Beats+on+Myocardial+Contractility.">The Influence of the Interval between Beats on Myocardial Contractility.</a> Pharmacol Rev. 15, 601-652 (1963).</li><li>Bocalini, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+remodeling+after+large+infarcts+in+rat+converts+post+rest-potentiation+in+force+decay.">Myocardial remodeling after large infarcts in rat converts post rest-potentiation in force decay.</a> Arq Bras Cardiol. 98 (3), 243-251 (2012).</li><li>Juggi, J. 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作者宣称，他们有没有竞争的财务权益。

在这个手稿，我们描述的方法来研究的鼠的乳头肌收缩力在体外可被用来回答有关心脏生理和病理小鼠几个科学问题以及支持的转基因品系的分析和新药物的方法的发现治疗心脏功能障碍。我们示出了使用这种方法来评估的心肌收缩性生理，病理和药理性质（参照图3）。这里未示出的其它应用包括使用不同的药理学试剂的细胞内途径的评价（参见12）。 </p...

像离子通道参照它们的作用为心脏收缩蛋白的调查是必不可少的发现不同的病理机制，并建立新的治疗策略用于心脏疾病，如局部缺血和心脏衰竭。 哺乳动物心肌收缩功能已知通过各种离子通道，转运和其他蛋白质被调制。动作电位诱发激活电压依赖性肌膜L型钙通道引出的Ca 2+内流 ，从细胞外空间，并随后到的 Ca 2+ -诱导的 Ca 2+释放（CICR）1，这将触发蜂窝收缩2。钙 -信号起着心脏收缩力和适应方面发挥核心作用的生理或病理压力。儿茶酚胺激活心脏β肾上腺素能受体，从而刺激腺苷酸环化酶（AC）的合成营。被激活，proteiÑ ​​激酶A（PKA）的磷酸化细胞内的不同和膜相关蛋白质如L-型Ca 2+通道 ，磷蛋白和兰尼碱受体导致的钙瞬变和心脏收缩1,3,4修饰。的cAMP通过磷酸二酯酶（PDE）的降解。 G s - 偶联受体比β肾上腺素能受体其它的活化也导致的cAMP蓄积。 心室肌细胞肌条收缩测量的技术已经非常成熟的大型哺乳动物物种5-8。基于基因的可能性靶向小鼠建立的方法来分析鼠心脏生理是重要的。然而，大约在小鼠中分离肌肉制剂的生理特性的现有数据的差异取决于实验条件9-12。 所描述的方法被用来分析左心室乳头肌的预心脏收缩parations 体外 。在没有影响改变心肌收缩力在体内 ，如血压，神经体液刺激和生理或代谢应激进行心肌收缩力的研究。承包肌肉制剂的跳动速率可以严格定义，改变随意。抽搐力能够在特定刺激，如钙浓度，跳动频率或温度的情况下进行分析。此外，这种方法可用于研究不同信号传导途径的组件和通过控制上述实验条件下进行比较的转基因小鼠模型的心脏的性能。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9434&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5280&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right">223506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td align="right">230391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P 5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-Butanedione monoxime</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0753</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forskolin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3917</td>
			<td>Hazard statement H312, solve in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-?Isobutyl-?1-?methylxanthine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5879</td>
			<td>Hazard statement H 302, solve in DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoprenaline hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5627</td>
			<td>Hazard statement H 315-H319-H335</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Heparine 250.000 IE/10ml</td>
			<td>ratiopharm</td>
			<td>PZN 3874685</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histamine dihydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H7250</td>
			<td>Hazard statement H 315-H 317-H319- H334-H335</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

contractility measurements on isolated papillary muscles for the investigation of cardiac inotropy in mice

乳头肌从成年小鼠心脏分离，可用于在不同的生理/病理条件下，研究心脏收缩。独立的外部影响，如血管紧张或神经体液状态的收缩特性可以被评估。它描述了单细胞测量孤立心肌细胞之间， 像超声心动图体内研究科学的方法。因此，乳头肌制剂作为一个很好的模型来研究心脏生理/病理生理学和可用于像由药剂的调制或转基因动物模型的探索调查。这里，我们描述分离鼠左前乳头肌以调查在器官浴设置心脏收缩的方法。在对比一个肌肉条准备从心室壁分离，乳头肌可以全盘而不损伤肌肉Tissu酒店制备Ë严重。器官浴设置包括几个温度控制，毒气和电极配备器官浴室。将分离的乳头肌固定在器官浴室和电刺激。诱发抽搐力是使用压力传感器和参数，如抽搐力的振幅和抽搐动力学分析记录。不同的实验方案，可以执行以调查收缩剂如儿茶酚胺或其他药物的碳酸钙和频率相关的收缩以及剂量 - 反应曲线。此外，像急性缺血病理状况可以模拟。

本手稿的孤立鼠的乳头肌收缩制剂测量值的协议被调谐到最佳条件，以实现在生理条件下可再现的实验结果。为了确定最佳的实验条件下，我们进行试点实验，不同的器官浴温度和细胞外钙离子浓度（参见12）。这里描述的协议用的1.5mM的胞外钙浓度和32℃的温度下进行。 基底收缩特性要抽搐力振幅表征基底收缩性质，参数，抽搐率，达峰时间（?...

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Contractility Measurements on Isolated Papillary Muscles for the Investigation of Cardiac Inotropy in Mice

鼠左心室乳头肌可用于研究在体外心脏收缩。本文详细介绍了隔离和实验方案，研究心脏收缩的特点。

对离体乳头肌的心脏收缩力对小鼠的研究收缩尺寸

Papillary muscle isolated from adult mouse hearts can be used to study cardiac contractility during different physiological/pathological conditions. The ...

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