人性化的 nod/scid/il2γ空 (hu-nsg) 小鼠 hiv 复制和延迟研究模型

这些问题有助于回答艾滋病毒/艾滋病研究中的一些关键问题，例如艾滋病毒感染的分子机制和预后，以及如何以及在什么地点建立延迟储层。这项技术的优点是它是非侵入性的，并建立了hu-NSG小鼠，必须治疗多血统的发展比移植的人类干细胞，是易受HIV感染，并接受cART。首先通过无菌、70微米、尼龙、网状滤网过滤消化的、人、胎、肝组织、浆料样品，获得单细胞悬浮液，并按照制造商的说明，通过磁性活性细胞分选丰富CD34+HSC。

计数后，在冰上新鲜 DPBS 中，每毫升浓度以两倍十至七的可行细胞重新悬挂 HSC。接下来，将整个新生儿NO德/SCID/伽马或NSG小鼠的垃圾放入无菌的饼状辐照笼中，用来自200至250摄氏度的伽马射线从137辐射源对动物进行治疗。然后将细胞装入定制的 Hamilton 80508 50 微升注射器中，并配备 30 量针，然后用 5 倍至 10 到 5 的活人 CD34+HSCs 和 25 微升的 DPBS 将每个新生儿动物直接注射到肝脏中。

感染后十至十二周，通过离心从每只小鼠身上旋转反轨道、外周、血液样本，将血浆超先输转移到微离心管中，进行80摄氏度的负极性储存，作为实验上适当的。对于 HSC 移植验证，用 200 微升红细胞裂解缓冲液重新悬浮颗粒，并在 1.5 毫米微离离管中将细胞悬浮液拉下，在室温下孵育 10 分钟。然后通过离心收集剩余的白细胞，每次洗涤在0.5毫升新鲜、0.01%牛血清白蛋白或BSA中两次洗涤。

第二次洗涤后，用100微升的阻滞鸡尾酒在4摄氏度下阻断20分钟，然后按照每1倍至6次细胞浓度的2微升抗身体鸡尾酒标记适当的抗身体鸡尾酒。在4摄氏度下30分钟后，在新鲜的DPBS加BSA中清洗细胞两次，然后根据标准方案通过流量细胞学评估外周血样，以量化每个样本的人类CD45+CD3+CD14+或CD19+细胞的百分比。然后计算CD4+CD8+T细胞的比例，根据标准、定量、逆转录酶、PCR方案评估血浆样本中的病毒载量。

为了评估HIV感染的影响，将HIV包病毒送到麻醉的人类、NSG小鼠，其外周血液中人类CD45+细胞数量超过20%，通过内向管内给皮，每只小鼠浓度为200纳米P24，每两周通过逆轨道出血采集血液样本，并分析CD4-CD8比率和血浆病毒载量，如所证明的。对于病毒抑制验证供应受感染的，人类NSG动物与新鲜，组合，抗逆转录病毒疗法，或cART，每周加糖水4周，收集血液样本通过逆轨道出血每两周，并分析CD4-CD8的比例和血浆病毒载量，如证明。当血浆病毒载量低于检测限值，并恢复CD4-CD8比1.5至2.5之间，在CART提取后每2周通过逆轨道出血收集外周血样时，评估病毒反弹，并评估样本，如所示。

在初始移植验证期间，人类CD45+细胞计数应在20%至80%之间，通过流动细胞计量分析，人类白细胞的子集应显示为离散种群。在健康个体中，CD4+-CD8+细胞的比例仍然介于1.5和2.5之间，而在病毒感染时通常观察到显著的CD4+T细胞耗竭。值得注意的是，健康比率恢复，以回应CART治疗。

在整个感染过程中，通过定量RT PCR检测血浆病毒载量，并分别绘制并用于评估病毒传递和抗病毒治疗的效率。虽然这种方法可以提供对艾滋病毒/艾滋病病毒学研究和治疗发展的见解，它也可以应用于与人类疾病相关的其他研究，如癌症、糖尿病和自身免疫疾病。hu-NSG小鼠模型的开发为免疫学和肿瘤学的研究人员探索人类新的功能障碍和病理学铺平了道路，特别是针对HIV慢性感染和延迟水库的机械和治疗研究。