第三星果蝇中枢神经系统活动的电生理记录

该方法通过测量嗜血杆菌黑色素中枢神经系统的电发生，有助于回答昆虫毒理学和昆虫生理学领域关键问题。这允许人们测试广泛的科学假设，并协助发现新的杀虫剂行动模式。该技术的主要优点是，它提供了一个简单、可重复和相对较高的通量系统，以最少的财政投入来研究果蝇的神经系统。

要启动，请打开采集/分析软件。单击主工具栏中的"设置"，然后选择"频道设置"，这将打开一个对话框。将总通道数减至三个。

通道一将记录来自放大器的原始信号，其范围为 100 毫伏。通道 2 将用于计算通道 1 中高于给定阈值的事件数。为此，单击"计算"选项卡可打开通道 2 的下拉菜单。

选择循环测量，这将打开第二个对话框。选择通道 1 作为源。然后，在下拉菜单测量中，选择"事件时的单位峰值"。

最后，在检测设置区域中，从下拉菜单中选择"简单阈值"。阈值级别在检测调整窗口上输入，该窗口要设置在背景噪声之上。要将电活动转换为以赫兹表示的速率图，请选择第三通道上的算术。

在新窗口中，输入 1000 倍平滑秒，括号通道两个逗号 2。然后，在单位下拉菜单中选择频率单位赫兹。关闭对话框以返回到主屏幕。

通道三的 y 轴应以赫兹表示，x 轴应及时表示。通过首先识别和提取一种游荡的三星嗜血杆菌黑色素，将其放入200微升的盐水中，对幼虫果蝇CNS进行解剖。然后，用一对细钳抓住嘴钩，用第二对钳子抓住虫子的腹部，用轻压，避免撕裂薄薄的切层。

轻轻地将嘴钩和腹部向不同方向拉，将虫子的角端与头部区域分开，并露出虫子的内脏。CNS 将与气管和消化道交织在一起。用钳子将 CNS 从消化道和气管中调出。

从虫子中解剖果蝇中枢神经系统是成功的关键一步。解剖的神经道必须完好无损，对下降的马达神经没有任何重大损伤。连接到神经的电机神经数量增加基线发射频率。

如有必要，用Vannas弹簧剪刀手动将CNS后部转到脑叶，从而破坏血脑屏障。转节应基于使用化学品的物理化学性质进行。红线是建议的转流点和横穿的CNS与完整的下降周围神经干干显示这里。

首先，首先将玻璃移液器电极从硅酸盐玻璃毛细管拉到 5 到 15 兆欧姆的电阻。将转接的 CNS 插入包含 200 微升盐水的蜡室。用鳄鱼夹将未涂层的昆虫针夹夹在接地线上，并将针插入盐水以完成电路。

使用微操纵器，将电极定向到横切的 CNS 的极点。在连接外周神经干干之前，通过调整采集/分析软件中的阈值水平来消除背景噪声。对注射器施加轻微的负压，将外围神经吸入吸盘。

在收集基准触发速率数据之前，开始对数据采集软件进行记录，并平衡基准触发速率五分钟。五分钟后，添加200微升盐水和车辆，使腔室的总量达到400微升，开始记录控制发射速率。如果控制处理的触发模式与此处所示的示例不相似，请放弃准备和记录。

当在记录三到五分钟后确定基线时，提取200微升盐水，并加入200微升在盐水中溶解的实验剂。在获取/分析软件中标记此时间点的药物应用，包括包含药物和最终浓度的注释。此处显示的是暴露于 DMSO 之前和之后具有代表性的神经放电痕迹。

箭头指示应用时间。看到对 DMSO 的响应有限。增加泛氧剂的剂量以浓度依赖的方式放大了转眼果蝇CNS的峰值放电频率，而神经抑制剂GABA则以浓度依赖的方式降低了尖峰放电频率。

在尝试此程序时，重要的是要记住，这是一个外体实验，因此盐水的条件，如pH值和温度，是中枢神经系统准备的长期活动的关键。同样，缺乏无关的电活动、有效的法拉第笼和减少 60 赫兹的噪音是这次测定成功的关键。通过这种测定收集的数据有助于确定杀虫剂的具体作用模式。

通过电压夹电生理学、生化分析和其他药理学分析等方法对这些数据进行后续验证。