基因治疗诱导聚化涂层保护 dna 折纸纳米结构

DNA纳米结构的生物稳定性对于未来的体内应用至关重要，例如靶向药物的输送。然而，DNA在体内被各种酶降解。在这里，我们提出了一种涂层技术，保护DNA纳米结构免受酶降解。

主要优点是，我们的涂层包括已经在生物体中使用的无毒化合物，表面的功能仍然可能。这种功能化对于将分子传感器纳入目标识别和用于药物货物释放的开关非常重要。聚化涂层显著增加封装的DNA折纸结构的细胞吸收，因此这种方法可以打开大门，将DNA或硅在诊断和治疗中应用。

DNA纳米技术的潜在基因传递应用还需要细胞吸收。我认为这种方法非常简单，很容易掌握。首先，测量纯化DNA折纸的浓度。

使用两个微升的 TB 缓冲器作为空白来校准紫外分光光度计。然后在260纳米测量DNA折纸浓度。然后计算纯化DNA折纸溶液中的磷酸盐量，使用公式二，如手稿中所述。

使用结核缓冲液进行稀释，准备15微升DNA折纸结构，包括一纳米磷酸盐。将 13.2 微升添加到 TB 中，至 1.8 微升的气糖。在DNA折纸的15微升中加入15微升的赤藤山溶液，以开发一个N/P比为8的DNA折纸赤素多面体。

使用手稿中描述的计算，继续准备不同 N/P 比率的聚式。为2%的加糖凝胶准备80毫米的管子。加入352微升2.5摩尔氯化镁，然后用10微升DNA凝胶染色剂预染色。

将凝胶溶液倒入干凝胶盒中。插入凝胶电泳梳，让它在室温下凝固15至30分钟。同时用11毫摩尔氯化镁补充运行缓冲液。

将每个样品的 10 到 20 微升与 20% 的 6 倍加载缓冲液混合。将样品加载到阿加罗斯凝胶井中，包括裸DNA折纸作为控制。在室温下以 70 伏运行凝胶两个半小时至三个小时。

然后使用紫外线扫描仪来可视化凝胶。要执行 DNase I 保护测定，请将每个聚丛的四个微升以不同的 N/P 比进行比较，将 10 倍 DNase I 缓冲液的 1.5 微升、8 微升的 TB 和 1.5 微升的 DNase I 添加到单独的 2 毫升 PCR 管中。然后在37摄氏度的热循环器中孵育24小时。

要消化DNase I，加入两微升，每毫升20毫克蛋白质酶K，在热循环器中孵育30分钟，温度为37摄氏度。然后，解开核心DNA纳米结构，每毫升40千吨硫酸盐添加3.6微升50毫克。然后使用这些样品和新鲜的DNA折纸作为控制，以执行如前面所述的阿加糖凝胶电泳。

从凝胶中切除与加载的样品对应的带子。要提取DNA折纸，请使用挤压冻结提取柱，并按照制造商的说明，继续进行阴性污渍传输电子显微镜成像，如手稿中所述。将纯化的 36 纳米摩尔 HRP-NR 的 6.5 微升与 6.5 微升不同浓度的聚物混合。

要以一、二、四、十和二0的N/P比率准备聚体，请将6.5微升蒸馏水与6.5微升的各种浓度聚物混合，以1、2、4、10和20的N/P比对应，来准备一个空白组。然后，将每个已准备溶液的 12.5 微升添加到 96 井板的单独井中。然后将 72.5 微升的 HEPES 缓冲液添加到每个井中并混合。

将10微升15毫摩尔ABS，然后将5微升的12毫摩尔过氧化氢加入到每井中，然后通过上下移液混合。最后，使用多模板读取器测量 421 纳米的吸光度，超过 4 小时。使用凝胶缓速分析分析多面体后，裸纳米结构向阴极转移，可能是因为磷酸盐组与聚物结合的负电荷的抵消，以及复合物的大小增加。

当添加额外的多离子，如硫酸二苯二苯胺时，多面体形成被逆转。与较低的分子量相比，分子量较高的脱酸硫酸盐效率更高。在使用负染色传输电子显微镜分析聚丛后，显微图显示裸DNA折纸纳米结构、斩首后线性聚乙二烯胺聚丛、甲虫山复用、受镁耗竭、酶降解和血清消化的裸损DNA折纸图像。

在DNase I的存在下，两小时后，裸纳米结构被完全消化，而甲氧三亚封装DNA折纸的线性聚乙酰胺聚丙烯在每毫升DNase I.Linear聚乙酰胺聚丙烯中保持完好无损，比甲醇类更有效地保护DNA纳米结构。当多面体的N/P比增加时，DNA消化率较低。涂覆酶后，或经过功能化的DNA折纸，线性聚乙酰胺聚酶和赤藤素在变异N/P比率，没有显着的干扰酶活性。

另一方面，HRP酶的动力学在与DNA折纸结合后发生显著变化。重要的是要从净化良好的DNA折纸结构开始。存在一个稳定的链，也可以绑定到聚酯。

它们很难从DNA折纸复用中分离。我们的涂层分子也用于基因治疗应用。这意味着DNA纳米结构将来可以用来改变生物体的基因组。

对于阿加罗斯凝胶染色，通常使用分子，相互分解DNA，并有可能突变。染色DNA时，请遵循实验室的安全说明。