用细胞遗传学技术测定芽孢杆菌的受精率

Liz 开发的协议允许我们确定白蝇的受精率。应用这种技术将提高我们对白蝇行为和生态的理解。白蝇是血胶体，所以受精率等于卵巢时的性别比。

据我们所知，该协议是白蝇的第一个描述，可以在三小时内完成。首先，在培养皿盖上做一个可覆盖的孔，以插入并去除成年白蝇。设置湿度室，通过将一个舒适的工作角度的薄销插入熔化的移液器尖端，以制作薄探头，来设计探头。

可选地，用热量拉长玻璃移液器尖端，以便于处理白蝇蛋。然后，让雌性白蝇在干净的叶子上雌性苍蝇，切开，以适合在培养皿中的阿加。在白蝇的卵巢中，用肥皂和水清洁显微镜滑梯。

干燥好，将一块石蜡薄膜伸展到一端，使液体形成滴和鸡蛋更容易看到。要除尘鸡蛋，在成人去除和收集鸡蛋之前，使用玻璃巴斯特移液器将83%的次氯酸钠漂白剂溶液加入石蜡膜。漂白剂和冰川醋酸都有腐蚀性。

应在发动机罩或通风良好的区域使用手套进行处理。DAPI 也是刺激物，应用手套处理。然后，从叶子上取下成年白蝇，将叶子放在显微镜下。

小心地将每个鸡蛋从底座上提起，直到从叶子上取出脚皮。在执行此协议之前，先练习许多鸡蛋。将鸡蛋慢慢从底座上提起，一旦看到鸡蛋从叶子上取出，就将其从叶子上完全提起。

将两到三个鸡蛋转移到每滴漂白剂中，并离开10分钟。要固定鸡蛋，请使用玻璃移液器丢弃漂白剂。然后，加入冰醋酸滴，等待三分钟。

接下来，去除冰川醋酸，加入克拉克溶液的滴。然后，等待 10 分钟，直到大部分溶液蒸发。加入70%乙醇滴，再等10分钟。

要弄脏鸡蛋，首先去除任何残留的乙醇。然后，在鸡蛋中加入1xPBS滴，使pH接近7。将显微镜幻灯片放入湿度室，以防止干燥。

30 分钟后，取出 1xPBS，每毫升 DAPI 添加 1 微克滴。将显微镜幻灯片放入暗湿度室，等待至少 15 分钟。要洗鸡蛋，请先取出 DAPI 溶液。

然后向鸡蛋中加入1xTBST滴。五分钟后，卸下 1xTBST。重复此洗涤两次，总共三次洗涤。

最后洗涤后，小心地将所有从副膜中切化的鸡蛋放到显微镜幻灯片的清洁部分。去除多余的 TBST 并添加 20 微升安装介质。最后，在鸡蛋顶部放置一个干净的盖幻灯片，用透明指甲油密封盖幻灯片，以便长期存放，然后使用荧光显微镜进行成像。

卵子脱光后，DAPI核染色允许使用荧光显微镜观察时分配受精和胚胎性别。雌性前核是受精的雌性卵子和未受精的雄性卵子的中心附近，精子在雌性卵子的顶点附近可见。这项技术的一个应用是确定细菌内分血是否影响白蝇的原发性别比。

例如，里基西亚感染和未感染的B.tabici白蝇所产卵子的主要性别比率在两种治疗方法中的性别比例没有显著差异。至于成年后饲养的卵子，对受感染的瑞基西亚感染者和未受感染的成年人也见有类似的结果，至少在这项研究中，没有提供证据，证明受里基西亚感染的女性受精率更高。通过使用这个协议，可以确定特异性精子是否可以受精卵。

如果没有观察到受精，可以备份，看看精子在交配过程中是否转移，通过寻找女性的精子。如果受精确实发生，可以比较成人的性别比例与受精率，以确定杂交后代发育的可行性。