用于阿尔韦拉尔巨噬细胞和CD4和T细胞免疫造血和HIV储液评估的支气管性洗浴液和匹配血液的处理

由于艾滋病毒在细胞和解剖水库中持续存在，因此无法治愈。这种方法允许对从肺部分离的免疫细胞进行HIV储液评估。该技术允许从BAL液体中分离肺粘膜T细胞和肺泡巨噬细胞，以进一步表型或维罗学评估为HIV细胞库。

了解道白道巨噬细胞和CD4阳性T细胞的生物学及其对艾滋病毒库的贡献，可导致对艾滋病毒治疗面临的挑战的重要见解。从BAL分离原发巨噬细胞可应用于其他各种研究领域，包括炎症性或传染性肺病，如哮喘和肺结核。在根据标准方案从患者那里获得 BAL 液体后，在将样品转移到生物安全柜内的 50 毫升管中，先将液体旋涡。

如果液体看起来非常浑浊或被细丝组织污染，则通过 70 微米尼龙网过滤器将样品过滤到新的 50 毫升管中。离心后，将上流液转移到新的50毫升管中，并使用移液器尖端轻轻分解含有整个BAL细胞的颗粒。将颗粒重新淹没在一毫升的 RPMI 1640 介质中，并添加 10 个 1.5 毫升微离心管中每毫升保留的上流液的 1 毫升。

将剩余上流液的10毫升等同物加入15毫升的圆锥管中，并将所有上流液样品放入零下80摄氏度的存储中。每25毫升原样品将颗粒细胞悬浮液稀释在10毫升的介质中，通过离心收集BAL细胞。然后将颗粒重新在一毫升的介质中补充10%的胎儿牛血清或FBS进行计数。

为了对整个BAL和外周血单核细胞进行分选，将5倍10添加到每个子集的两个五毫升圆底聚苯乙烯管中，用于未染色和活力染色的补偿控制，并将每个子集样本的其余部分添加到每个样本的五毫升管中。通过离心收集细胞，并在冰上每管PBS的100微升中重新补充控制颗粒，直到它们被使用。重新填充细胞的颗粒，用于在250微升中分拣250微升，其中20分之一的Fc受体阻断缓冲液在4摄氏度下阻断缓冲液一小时，以阻止任何非特异性结合。

在阻断孵育结束时，添加适当的抗体鸡尾酒，在摄氏四度下再孵育一小时。在初级抗体孵育结束时，将一毫升PBS加入每个管中进行离心，并将颗粒重新塞在250微升的分拣缓冲液中，在保护从光到分拣的冰上。要准备补偿控制，将每滴抗小鼠免疫球蛋白卡帕补偿珠和每毫升PBS的负控制补偿珠添加到微离心管中，并将100微升珠溶液转移到每个样品中，用于补偿。

将鸡尾酒中每个抗体的微升添加到每个包含珠子的单独管中，并在每个可行性污渍补偿控制管中加入一个微升的生存能力污渍。在4摄氏度下20分钟后，每管用1毫升PBS清洗样品，每管250微升新鲜PBS中重新暂停颗粒。将整个BAL电池未污染的控制样品加载到流量环测仪上，并设置补偿矩阵。

接下来，加载样品管，在低压下对细胞进行排序，浇注以排除噪声，包括活细胞和CD45阳性细胞，并排除双精度。在较大的骨髓群体中，将CD206和CD169双阳性细胞分拣为道喉巨噬细胞。在较小的淋巴细胞群体中，分离CD3阳性细胞，对CD4和CD8单阳性群体进行排序。

要对外周血单核细胞样本进行排序，请门排除噪声和双精度，并包括活的CD45阳性细胞，如所示。在CD3上浇注后，将CD3阴性、CD14阳性细胞进行门控，用于分选单阳性单细胞，并门控CD3阳性、CD4和CD8阳性细胞，用于对两个单阳性细胞进行分选。当计算整个BAL样本时，可以可视化不同的细胞类型，包括更大的圆形巨噬细胞和更小的圆形淋巴细胞。

巨噬细胞是BAL液体中最丰富的细胞类型，占非吸烟者肺部细胞的85%。负责。这些细胞在吸烟者中被丰富到看起来几乎排他性的点，与在非吸烟者中观察到的巨噬细胞相比，它们往往会扩大约40%。用于从BAL流体样本中分拣道长噬细胞的标记是根据先前描述的道长巨噬细胞的表型选择的，例如存在于噬菌体细胞和西亚洛得海素受体CD169上的曼诺塞受体CD206。

分离后，道拉巨噬细胞和其他细胞类型可用于通过流细胞切除术、免疫功能测定或超敏感PCR储液量化进行免疫表分。这种技术提供了获得高度纯的组织居民巨噬细胞，这在历史上一直很难实现，允许以前无法达到的检查大量的免疫细胞群体。