多纤维光测量记录自由移动动物的神经活动

光纤光度测量 CSOM 成像结合了基因编码的自定义指示器和光纤，以监控自由流动动物的神经活动。这对于理解一组特定的神经元在指挥或响应动作或刺激时如何发挥作用至关重要。这种技术是一种从特定大脑区域记录由其连接或基因特征定义的可访问方法，内置控制功能可将信号与噪声分离。

证明处理器将是，叶卡捷琳娜·马泰诺娃，一个研究生在我的实验室。首先松开五轴转换器上的所有螺钉。将零线拧到贴在五轴转换器上的适配器上。

然后在低功耗下打开 470 纳米激发灯，将光纤尖端指向自动荧光塑料幻灯片。下一个记录从免费金属氧化物半导体或CMOS相机在实时模式。增加增益或调整查找表，直到图像在目标的焦点可见。

将五轴转换器推进到目标方向，确保 470 纳米光以配线 SMA 或 FC 端的光纤为中心，直到在相机上解析图像。最后，调整 X 轴和 Y 轴，直到图像居中并解析良好。可视化从配线变种端发出的光，因为它应显示为等向性圆。

首先打开所有激励灯，以更好地可视化光纤。并调整摄像机增益，使像素不饱和，并存在光纤的清晰图像。然后拍摄初步图像。

在光纤周围绘制感兴趣的区域或 ROIS。并保留它们以测量录制过程中的均值。对于多个光纤录制，通过从所有光纤进行实时录制来测试独立光纤。

将一根光纤指向光源，然后用手指轻点。观察通道中的波动。然后将彩色胶带应用到光纤的末尾，以标注哪个 ROI 对应于哪个光纤。

最后，使用支架、夹子和支架将配线悬挂在竞技场上方，设置录制区域。最后，确保动物不会受到纤维长度的移动限制，并可以在整个竞技场上自由移动。首先，用眼睛检查配线纤维的端端，并用迷你光纤显微镜检查。

如果纤维表面被划伤，使用纤维抛光膜用细砂砾重新抛光纤维。然后用 70% 乙醇和棉片施用器清洁配线的端端。使用 70% 乙醇和棉尖施用器清洁光纤管。

使用覆盖着黑色收缩管的陶瓷分套将配线变频端连接到植入的纤维。在连接过程中，确保套筒紧固。让动物恢复几分钟。

然后开始记录光信号，然后运行实验。在录制时，请仔细观察实时跟踪，以确保录制的质量。并注意信号的任何跳跃，表示套筒不够紧。

对于双色记录，在光度测量系统中添加 516 纳米 LED 以激发红色荧光钙传感器，以及适当的双色镜和滤镜。然后在目标和 CMOS 摄像机之间添加图像拆分器，以分隔绿色和红色发射波长度。最后，在红色和绿色两种颜色的所有光纤周围绘制 ROIS。

确保用相应的光纤和通道清楚地识别每个 ROI。使用 470 纳米和 560 纳米 LED 同时触发激发，并用 410 纳米 LED 交替。结果表明，测量的荧光与LHA-LHB通路激活小鼠的空气泡芙同时显著增加。

然而，在表达绿色荧光蛋白或GP的小鼠中，在空气泡芙的给法过程中未检测到信号的变化。这项技术使研究人员能够从不同大脑区域的特定类型的细胞中合理记录。当动物自由行为时。

这进一步剖析这些大脑区域的功能的能力，因为它们与行为有关。