来自多个小生物体的自动多模态刺激和同时神经元记录

神经反应可以洞察大脑活动，但可能因实验和个人而异。该协议有助于自动化刺激记录和分析，并简化不同类型和模式的刺激编程。自动化技术允许以相同的微流体格式并行记录多个神经元和生物体。

这提高了记录的可重复性，并允许探索跨群体的神经元变异性。需要不同的刺激模式来揭示适应和感觉统合等神经现象。该方法可推广到从细胞和类器官到生物体和植物的其他动态信号。

首先，打开显微镜，使用灌注注射器填充并去除储液管中的气泡，然后用缓冲液填充流出管。从真空干燥器中取出微流体装置。将设备放在显微镜上并快速插入出口管。

轻轻推动出口注射器，将液体注入设备，直到液滴从入口中流出。在这个液滴出现的入口处，使用液滴到液滴的连接插入相应的流体入口管，确保液滴同时存在于入口管和设备端口孔上，以避免引入气泡。将下一个入口管连接到下一个液滴。

如果需要，从出口注入更多液体，然后重复直到所有入口都充满。在未使用的入口和蜗杆装载口插入实心阻挡销。检查屏幕上的流量，以确保流量沿所需方向流动。

翻转阀门控制器上的一个，观察流入微流体领域的刺激流。如果流量不平衡，请调整水库高度。使用钢丝尖镐将年轻的成年动物转移到未播种的线虫生长培养基或NGM琼脂平板上，然后用大约5毫升的一个XS基础缓冲液淹没平板，使动物可以游泳。

使用预先填充了一个XS基础缓冲液的附加管将蠕虫吸入一到三毫升的加载注射器中。使用立体镜，用一只手将管子移到每个所需的动物的液体表面以下，并使用另一只手握住的注射器将其拉入管中。关闭出口轮廓，取下蠕虫装载销，并使用滴对滴连接将蠕虫装载注射器连接到设备。

然后轻轻地将动物带入竞技场。建立缓冲流，并允许长达一小时的四米唑固定。使用文本编辑器，创建一个名为 userdefinedacquisition settings 的刺激定义文本文件。

TXT包含自动图像采集的刺激设置。该文件定义显微镜采集参数，如曝光和激发时序、试验持续时间、间隔和保存目录。它还定义了实验类型和刺激时间设置。

对于单个刺激实验，请使用只有一个重复刺激命令的格式。对于多模式实验，请使用具有多个刺激命令的格式，方法是包含表示刺激模式顺序的模式数字序列。对于每个模式，在单独的行上输入刺激命令。

接下来，运行显微镜控制软件。验证所有流体入口是否打开，竞技场内需要流动，并且感兴趣的神经元在实时窗口中聚焦。然后关闭实时窗口并运行脚本多模式运行脚本。

软件中的BSH。要分析数据，请依次单击插件，然后跟踪，然后运行NeuroTracker。选择包含要跟踪的 tiff 视频文件的文件夹，然后选择要处理的文件范围。

接下来，使用图像和调整菜单，打开亮度对比度和阈值控制窗口。检查深色背景，不要在阈值窗口中重置范围，将阈值方法设置为默认值，将可视化效果设置为红色。然后在亮度对比度窗口中单击自动以获得神经元可见性。

在亮度对比度窗口中，调整最小和最大滑块，直到神经元清晰可辨。然后调整阈值水平，直到所有神经元都显示为与其他物体分开的小红点。调整帧滑块以观察神经元运动和强度变化，注意要从跟踪中排除的任何动物，例如由于与其他动物重叠。

在确定要跟踪的神经元后，根据需要调整每只动物的阈值水平，使得神经元上方的红色阈值区域在每一帧中都可见。单击神经元以记录其位置和阈值水平。选择所有神经元后，按空格键开始跟踪。

监控每只动物的跟踪过程并进行任何必要的更正。如果NeuroTracker暂停，它就会失去神经元。根据需要调整阈值水平并重新单击神经元。

如果积分框跳转到附近的另一个动物或非神经元结构，请按空格键暂停。将滑块移回第一个错误帧，然后重新单击正确的神经元位置。运行神经追踪器摘要pdf。

m 文件，然后选择包含神经追踪器数据文本文件的文件夹。等待生成摘要 PDF，以便验证跟踪过程。可以通过每只动物和试验的数量和神经反应来识别动物，并观察以评估种群变异性。

使用函数数据浏览。m 探索按试验编号、动物数量、刺激模式或其他类别分组的神经数据。在配对脉冲实验中测试了时间抑制现象，该实验产生了八种模式，由两个一秒的气味脉冲组成，间隔从0到20秒不等。

第一个一秒气味脉冲在双乙酰检测AWA神经元中引起相等的响应幅度，并且第二个脉冲中的响应随刺激间隔而变化。通过捕获试验实验评估去抑制，其中观察到对双乙酰刺激的适应，但新型2-甲基吡嗪刺激的呈现没有引起强烈的去抑制效果。测试的多模态刺激表明，单独的化学刺激会引起适应，而单独的光刺激则不会。

然而，组合的多模态刺激模式表明，光生反应容易受到化学诱导的适应。通过修改微流体设计以包括两个领域，我们可以同时比较遗传或其他扰动以及匹配的参考。设置完成后，可以通过多种方式修改系统。

例如，我们已经自动测量了化学剂量反应和神经活动的状态依赖性变化，例如睡眠和清醒状态之间的变化。