该协议使用热成像技术来识别能够调节植物蒸腾的新化合物。这种技术在可测试的植物种类、化合物的性质和成像类型方面是通用的。要建立种植植物,首先在标准10至20英寸的植物托盘中加入一层四厘米厚的细紫土,没有孔,并在托盘中放置两厘米分开的种子。
将种子持有人填入紫流石,将一个向日葵种子尖端放入每个种子持有人中,使一半的种子保持暴露。当所有种子都镀上时,再用两厘米的细紫刚石和雾气覆盖它们,上面是水。一小时后,用盖子盖住托盘,将植物放在温室的生长室中。
要建立水培系统,请用蒸馏水填充适合生长植物的合适容器,并加入制造商指示的一般水培肥料。然后使用空气和水泵对产生的水培溶液进行持续运动。要准备水培浮子,将一块两厘米厚的膨胀聚苯乙烯泡沫切成容器的尺寸,并使用木材燃烧工具在泡沫上打一到两厘米直径的孔。
然后将浮子放入水培系统中。种植五天后,轻轻地把幼苗从紫菜中拉出来。立即将幼苗放在一个水容器中 30 分钟,以清除多余的紫土,并软化剩余的紫土。
当新兴的主根可见时,请按手删除 pericarp。将种子架内的幼苗转移到水培系统中准备好的聚苯乙烯泡沫浮子中。在水培中种植植物两天。
让小复合库中的化学物质在室温下解冻。标签六无帽两毫升微管的负对控制处理,三管为 ABA 治疗,最后 60 管用于分析 20 种感兴趣的三钙化化学物质的影响。在每个试管中加入每种化学品的10微升,在三个BA管中加入10微升10毫摩尔BA和二甲基硫化物,在六个控制管中加入10微升二甲基硫化物。
然后小心地将 990 微升 10 毫摩尔 MES 氢氧化钾混合到每个管中。将管子放入管架中,将正负控制和实验管均匀地分布在机架内,以考虑位置相关偏差。要设置热像仪,请先将摄像机安装在复印支架上,然后将所有电缆连接到笔记本电脑。
在打开笔记本电脑并打开热成像分析软件之前打开相机。要调整录制参数,请将鼠标滚动到"录制"按钮上,以允许在"录制设置"下选择扳手图标,并选择适当的记录模式和选项。为了处理幼苗,小心地抬起种子架,并迅速将根浸入含水的浅盘中。
将每个幼苗在水下的根部切成0.8至1厘米,在种子架最基底的末端下方,以防止被吸收,并将新切的植物插入一管化学品中。当所有幼苗都转移后,将植物放在热像仪下,并确认所有植物都在摄像机的视野内。要将相机对焦到胶卷表面,请按"控制 Alt A",然后单击"录制影片"。
将打开确认录制的新窗口。一到两个小时后,停止录制。对于数据分析,请打开正确的 seq 文件并暂停影片。
单击添加感兴趣的测量光标区域三 x 三像素图标,并将鼠标移到第一个工厂的科蒂顿中心。左键单击图像,为科蒂顿贴上标签。以相同的方式标记第一种植物的第二个科蒂顿。
当所有工厂都标有两个光标时,单击兴趣图标的编辑区域并左键单击按住并滚动以选择所有感兴趣的区域。接下来,将鼠标滚动到统计查看器图标上并选择时间绘图。将打开一个新窗口。
运行影片时,图形将填充数据。然后在图形窗口中,单击双箭头打开新菜单,然后单击保存图标以保存数据。使用红色染料红红素B表明,化学品在10分钟内通过切根明显吸收到向日葵幼苗的科蒂莱顿中。
当植物用 ABA 处理时,在 30 分钟内在向日葵中检测到叶温升高,这与口腔孔径和口腔传导的减少有关。此外,使用10微摩尔 ABA 治疗后 15 分钟和 5 微摩尔 ABA 治疗后 20 分钟观察到叶面温度升高,证明通过热成像测量叶温是测量口腔孔径和电导率的一个很好的代理。在这个具有代表性的实验中,基于分数的标准统计处理允许识别促进口腔闭合或开口的化学品。
为了测量化合物对蒸腾的影响,在光线、湿度和温度的最佳条件下种植植物非常重要。该协议可以应用于大多数二元。它还可用于评估新化合物对光合作用性能的影响,例如通过测量叶绿素荧光。