高通量识别对伪单鱼的电阻syringae pv。番茄中的番茄使用苗子洪水测定

这种高通量协议允许快速筛选番茄幼苗从野生加入细菌病原体伪多多纳丝。幼苗洪水测定最大限度地减少了植物生长时间和生长室需求，允许植物的快速周转，并允许测试大样本量。这种测定是一个强大的工具，可以用来筛选在野生加入和其他线与复杂的遗传背景的耐药性。

该协议为两个伪多莫纳斯西林加菌株的洪水接种提供了具体方向。然而，它是多功能的，可以修改，以检测宿主耐药性的其他细菌病原体。演示这个程序的将是亚娜哈桑，一个研究专家在我的实验室。

首先种植番茄苗。将番茄种子放在2.2毫升微离心管中，加入两毫升50%漂白剂溶液。摇动管 25 分钟，然后用移液器取出漂白剂溶液。

加入两毫升的超纯水，通过倒置管子五次来清洗种子。从管子中吸出液体，再重复洗涤四次。最后洗涤后，加入两毫升的超纯水，将种子倒入无菌的培养皿中。

用乙醇燃烧钳子，然后用 0.5 XMS 加 0.8% 的加糖介质将 5 到 7 个种子转移到 100 x 25 毫升的盘子上， 对钳子进行灭菌。用手术胶带密封板的边缘。确保板堆积平坦，朝上。

在黑暗中将灭菌的种子分层，至少三天，以同步发芽。三天后，垂直定向板，使根沿板的表面生长，种子线水平方向。将种子转移到一个生长室，温度为22摄氏度，有16小时的光，8小时的黑暗周期。

在室内种植幼苗十天，此时它们通常会显示完全出现和扩大的长生，并出现第一个真正的叶子。用扁平的无菌牙签将新鲜细菌带到适当的 KB 阿加上。对于 PstT1，在洪水实验中使用细菌之前，在 28 摄氏度下孵育板 48 小时。

为了准备注射液，无菌地将无菌的细菌重新灌装，将十毫摩尔氯化镁重新灌装到光学密度为0.1。然后进行两次连续稀释，以获得 OD600 0075 的工作浓度。还要在十毫摩尔氯化镁中准备一至十种稀释非离子有机体体表面活性剂共量体。

漩涡它，并添加到细菌，旋转的管子混合。将带十天幼苗的盘子从生长室转移到生物安全柜，取出手术胶带。然后将六毫升的 inoculum 转移到每个盘子中。

用移液器尖端轻轻将幼苗推入幼苗中，然后启动一个计时器三分钟。在每只手拿着一个盘子，向下倾斜盘子的前部，将幼苗的长子和叶子淹没。将幼崽侧向侧五到七次，然后将盘子倒回，用黄种素覆盖根部。

再次向下倾斜板，并重复循环共三分钟。将浇注从盘子上倒下来，放在平坦的表面上，然后第二次倒掉任何残留的浇注。重新包装板，并放回生长室。

赚钱者-PtoR和赚钱者-PtoS品种被洪水淹没的PSTDC3000和表型7至10天后洪水。赚钱者-PtoR幼苗携带PtoPRF基因簇，对PSTDC3000具有抗药性。虽然接近同源的造金人-PtoS幼苗，无法识别PSTDC3000效应器VRPto或VRPto-B在洪水后七天内迅速死亡。

十天大的幼苗被PstT1淹没，在洪水发生至少十天后，表型被。易感的加入是死的，有棕色的脂肪，缺乏新的增长。相比之下，抗性幼苗表现出高水平的绿色生长，并幸存下来感染PstT1。

进行细菌生长测定，以定量确认PstT1耐药性和索拉努姆NeoRici LA1329。耐药和易感LA1329和耐药LA1329和 Moneymaker-PtoS之间有1.7个日志的生长差异，这与表型结果相关。执行此检测时，要记住的最重要的事情是在整个协议中密切关注无菌技术，并确保板上的所有幼苗都彻底被淹没。

一定要按照有关规定对受感染的植物组织和细菌进行核用处理，并处理材料。