ACE 是最佳成像景点。它支持在小岛细胞的长期体内成像中重复，以研究其在移植情况下的功能和生存能力。也可以推广到生理和病理条件下的其他方面进行实时研究。
ACE 技术的优点在于，相同的人类胰腺小岛可以在较长一段时间内以亚细胞分辨率无创地跟随。贝塔细胞替代疗法的成功率继续提高。然而，评估小岛嫁接和体内生存的效率仍然具有挑战性。
这种方法可以帮助评估和优化小岛移植的结果。此方法不仅限于胰岛。它也非常适合研究受影响的组织。
例如，在糖尿病并发症，如肾球或肝脏片，只是举几例。要开始将鼠标放在加热垫上，请将鼠标放在头部支架上，并戴上鼻罩。使用拇指和食指稍微抬起头部。
用两侧的金属碎片固定它。确保耳片将头部直接固定到耳朵下方。皮下将丁丙诺啡溶液注射到小鼠的背面。
轻轻缩回眼睑，用钝钳移植。弹出眼睛，并松散地修复它与一对钳子覆盖聚乙烯管。将眼睑转移到带 PBS 的培养皿后，在眼角中拾取大约 20 到 30 个小岛。
使用 25 量针水平向上，小心地将尖端插入角膜，并做一个横向切口。小心地抬起角膜，用预先装上小岛的角膜，然后慢慢将小岛释放到眼睛中。慢慢缩回管，将眼凝胶涂抹在眼睛上。
10 分钟后，取出钳子，握住眼睑，将眼睛放回正常位置。对于使用两个光子显微镜对植入的人类小岛进行成像，请将头部支架平台置于显微镜下，并在角膜和透镜之间将眼凝胶作为浸入式液体施用到眼睛上。将眼睛定位在目标下，并像文本手稿中描述的植入的人类小岛图像。
要删除自动荧光，请转到图像处理选项卡，选择通道荧光和键入通道一减去通道二。这将创建一个新的通道四。重命名它 vasature。
重复此过程并键入通道三减去通道 2 以创建新通道 5 并重命名所有番茄。要手动定义小岛，请创建新曲面并在向导中手动选择编辑。将指针保持为选择模式和 3D 视图。
然后单击音量以可视化部分。在绘图选项卡中，选择轮廓并单击绘制以开始围绕小岛边框绘制轮廓，从切片位置 1 开始。然后移动到新的切片位置并重复绘制轮廓。
以小岛顶部的最后一个切片结束，然后通过单击"创建曲面"选项卡结束。下一段，小岛血管和小岛番茄荧光使用小岛掩码。选择以前定义的小岛掩码对象，转到编辑选项卡，然后单击蒙版所有选项卡，该选项卡将打开一个新窗口。
在通道选择下拉菜单中选择血管通道，并在应用蒙版之前激活选项重复通道。恒定的内、外和将体素外部表面设置为 0.000，从而创建新通道 6。重命名此通道小岛血管。
重复前面的步骤，在通道选择下拉菜单中选择番茄，以创建新通道，重命名它，小番茄。然后在场景菜单中创建新曲面，并在向导中选择自动创建。将源通道设置为以前创建的小岛血管，并选择背景减法。
可选使用筛选器。例如，选择"音量"并调整窗口中的筛选器，该筛选器可以删除选定的服务对象。完成向导并命名新的曲面对象，即小岛血管。
在小岛血管服务对象转到编辑选项卡并单击蒙版所有选项卡，该选项卡将打开一个新窗口。在通道选择下拉菜单中选择小岛番茄通道，将表面外的体素设置为 10.000，从而创建新通道。重命名此通道小岛番茄血管。
要分割番茄胶囊荧光信号，在图像处理选项卡中选择通道遥测，并键入通道七减通道八创建新通道。重命名番茄胶囊。创建前面描述的新表面，并在向导中选择源通道、小岛番茄血管或番茄胶囊。
然后执行背景减法。打开小岛反散散器文件并创建新曲面。在向导中，选择自动创建并定义感兴趣区域。
如果需要，以绝对强度调整阈值。可以单击或关闭表面对象，以与相应的通道强度进行交叉检查。完成后关闭向导。
最后，执行量化，在场景菜单中选择创建的曲面对象，然后转到统计选项卡。要检索详细的卷数据，请选择详细选项卡，并从下拉菜单中选择特定值和卷。要检索总体积值，请转到详细选项卡并选择平均值。
该协议用于将无标记的人类小岛移植到八周大雌性红荧光接受小鼠眼睛的内室。然后使用交互式成像软件从图像中提取定量数据。在活体荧光成像中，人类小岛移植受到组织自身荧光的显著干扰，而小鼠小岛移植中未观察到这种干扰。
为了提高信噪比，减小了自荧光通道。然后手动定义称为小岛掩码和相应通道的小岛边界。最后，利用番茄信号分割到眼睑血管和眼睑胶囊，最后表面渲染用于提取定量数据。
这里作为代表性的纵向成像会议的同一人类小岛移植在两个星期，两个月，五个月和八个月的移植后。显示最初记录的原始数据的 MIP 图像、小岛自荧光去除后处理的图像和分段的小岛对象。执行眼睑注射时，请确保以小体积预装小岛，并在立体显微镜上使用灵活的双轻臂，以突出显示眼室空间，以便成功地将小岛注入 ACE 中。
在体内成像后，眼睛可以固定，并进一步调查抗体染色和常规组织学。该技术对于人类个体小岛在实时和生理条件下的功能研究非常有用，特别是在血管化、生存能力和代谢研究的背景下。
