ACE en uygun görüntüleme manzaralarıdır. Bir aşılama durumunda işlevlerini ve canlılığını incelemek için adacık hücrelerinin in vivo görüntülemesinde uzun süreli olarak tekrarlamayı destekler. Aynı zamanda gerçek zamanlı olarak fizyolojik ve patolojik koşullar altında diğer yönlerini incelemek için uzatılabilir.
ACE tekniğinin avantajı aynı bireysel insan pankreas adacıkları uzun bir süre için alt hücresel çözünürlük ile noninvaziv takip edilebilir aslında yatıyor. Beta hücre replasman tedavisinin başarı oranları artmaya devam etmektedir. Ancak, adacık greftleme ve in vivo hayatta kalma verimliliğini değerlendirmek, hala zor olmaya devam etmektedir.
Bu yöntem adacık transplantasyonlarının sonuçlarının değerlendirilmesine ve optimize edilebilebilir. Bu yaklaşım sadece pankreas adacıkları ile sınırlı değildir. Ayrıca etkilenen dokuları incelemek için de uygundur.
Örneğin, diyabetik komplikasyonlar, böbrek glomeruli veya karaciğer parçaları gibi, sadece birkaç isim. Başlamak için fareyi sıcak bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin ve burun maskesini takın. Başparmağı ve işaret parmağını kullanarak başı hafifçe kaldırın.
Yanlarında metalik parçalar ile sabitle. Kulak parçalarının başın doğrudan kulakların altından düzeltdiğinden emin olmak. Subkutan farenin arkasına buprenorfin çözeltisi enjekte edin.
Künt forceps kullanılarak nakledilecek gözün göz kapaklarını hafifçe geri çekin. Göz dışarı pop ve gevşek bir polietilen tüp ile kaplı cımbız bir çift ile düzeltmek. Göz kapaklarını PBS içeren bir Petri kabına aktardıktan sonra, göz kannularında yaklaşık 20-30 adacık toplayın.
Yukarı doğru 25 gauge iğne seviyesi kullanarak, dikkatle kornea içine ucu takın ve tek bir yanal kesi yapmak. Adacıklarla önceden yüklenmiş kanülle korneayı dikkatlice kaldırın ve adacıkları yavaşça göze bırakın. Yavaş yavaş kanül geri çekmek ve göze göz jeli uygulayın.
10 dakika sonra, göz kapağını tutarak ve gözü normal konumuna geri koyarak, forcep'leri çıkarın. İki foton mikroskoplu implante edilmiş insan adacıklarının görüntülenmesi için, baş tutucu platformu mikroskop altına yerleştirin ve kornea ile lens arasında bir daldırma sıvısı olarak göz jelini göze uygulayın. Gözü hedefin altına yerleştirin ve metin el yazmasında açıklandığı gibi implante edilmiş insan adacıklarını görüntüleyin.
Otomatik floresan'ı kaldırmak için görüntü işleme sekmesine gidin, kanal aritmetiklerini seçin ve kanal 1 eksi kanal iki yazın. Bu yeni bir kanal dört oluşturur. Adını vaskülatür olarak yeniden adlandır.
Bu işlemi tekrarlayın ve yeni bir kanal beş oluşturmak ve tüm domates yeniden adlandırmak için kanal üç eksi kanal iki yazın. Adacık'ı tanımlamak için el ile yeni bir yüzey oluşturun ve sihirbazda el ile edin'i seçin. İşaretçiyi seçme modunda ve 3B görünümde tutun.
Bölümleri görselleştirmek için ses seviyesini tıklatın. Çizim sekmesinde kontur seçin ve dilim konumu bir başlayarak, adacık kenarlığı etrafında konturları çizmeye başlamak için çiz'i tıklatın. Ardından yeni bir dilim konumuna geçin ve çizim hatlarını tekrarlayın.
Adacık üstündeki son dilimle bitirin ve yüzey oluştur sekmesini tıklatarak sona erdirin. Sonraki segment, adacık vaskülatür ve adacık domates floresan kullanarak adacık maskesi. Önceden tanımlanmış adacık maskesi nesnesini seçin, düzenleme sekmesine gidin ve yeni bir pencere açan tüm maske sekmesini tıklatın.
Kanal seçimi açılır menüsündeki vaskülature kanalını seçin ve maskeyi uygulamadan önce seçenekleri yinelenen kanalı etkinleştirin. Sabit içinde, dışında ve yeni bir kanal altı oluşturur 0.000 dış voxels ayarlayın. Bu kanal adacık vasculature yeniden adlandırın.
Önceki adımları tekrarlayın ve yeni kanal oluşturmak için, yeni kanal oluşturmak için, yeniden adlandırmak, adacık domates, kanal seçimi açılır menüsünde tüm domates seçin. Ardından sahne menüsünde yeni bir yüzey oluşturun ve sihirbazda otomatik oluşturmayı seçin. Kaynak kanalı önceden oluşturulmuş adacık vaskülatürüne ayarlayın ve arka plan çıkarma nızı seçin.
İsteğe bağlı olarak filtreler kullanın. Örneğin, ses düzeyini seçin ve seçili hizmet nesnelerini kaldırabilen penceredeki filtreyi ayarlayın. Sihirbazı bitirin ve yeni yüzey nesnesi, adacık vaskülature adını.
Adacık vaskülature hizmet nesnesi düzenleme sekmesine gidin ve yeni bir pencere açar maske tüm sekmesini tıklatın. Kanal seçimi açılır menüsündeki adacık domates kanalını seçin ve yeni bir kanal oluşturan 10.000'e kadar dıştaki voxel'leri ayarlayın. Bu kanal adacık domates vasculature yeniden adlandırın.
Domates kapsülü floresan sinyalini segmente etmek için görüntü işleme sekmesinde kanal aritmetiklerini seçin ve kanal yedi eksi kanal sekiz yeni kanalı oluşturarak yazın. Domates kapsülü olarak adlandır. Daha önce açıklandığı gibi yeni bir yüzey oluşturun ve sihirbaz kaynak kanalları, adacık domates vaskülatür veya domates kapsül seçin.
Sonra arka plan çıkarma gerçekleştirin. Adacık geri dağılım dosyasını açın ve yeni bir yüzey oluşturun. Sihirbazda, otomatik oluşturmayı seçin ve ilgi çekici bölge tanımlayın.
Gerekirse, mutlak yoğunlukta eşiği ayarlayın. Yüzey nesnesi, ilgili kanal yoğunluğuyla çapraz kontrol yapmak için tıklanabilir veya kapatılabilir. Bittiğinde sihirbazı kapatın.
Son olarak, nicelik lendirme gerçekleştirin, sahne menüsünde oluşturulmuş bir yüzey nesnesi seçin ve istatistik sekmesine gidin. Ayrıntılı birim verilerini almak için ayrıntılı sekmeyi seçin ve açılır menüden belirli değerleri ve birimi seçin. Toplam birim değerini almak için ayrıntılı sekmeye gidin ve ortalama değerleri seçin.
Bu protokol, sekiz haftalık dişi kırmızı floresan alıcı farelerin göz iç odasına etiketli olmayan insan adacıkları nakli için kullanılmıştır. İnteraktif görüntüleme yazılımı daha sonra görüntülerden nicel verileri ayıklamak için kullanılmıştır. Vivo floresan görüntülemede, insan adacık greftleri, fare adacık greftlerinde gözlenmeyen doku otofloresanının önemli bir müdahalesi ile tehlikeye atıldı.
Sinyalin gürültü oranını artırmak için, otofloresans kanalı çıkarıldı. Daha sonra adacık maskesi adı verilen adacık sınırı ve ilgili kanallar el ile tanımlandı. Son olarak, domates sinyalinin göz kapağı vaskülatürü ve göz kapağı kapsülüne segmentasyonu ve son yüzey işleme sayısal verileri ayıklamak için kullanılmıştır.
Burada iki hafta, iki ay, beş ay ve sekiz ay sonrası transplantasyon da aynı insan adacık greft temsili uzunlamasına görüntüleme oturumu olarak. Başlangıçta kaydedilen ham verilerin MIP görüntüleri, adacık otofloresan kaldırma ve segmentli adacık nesneleri sonra işlenmiş görüntüler gösterilir. Göz kapağı enjeksiyonunu yaparken, adacıkları ACE'ye başarılı bir şekilde enjekte etmek için göz haznesini vurgulamak için adacıkları küçük hacimli olarak önceden yüklediğinizden ve stereo mikroskobunuzda esnek ikiz ışık kollarını kullandığınızdan emin olun.
İn vivo görüntülemeden sonra gözler antikor boyama ve konvansiyonel histoloji açısından düzeltilebilir ve daha fazla araştırılabilir. Bu teknik, özellikle vaskülarizasyon, canlılık ve metabolik çalışmalar bağlamında, gerçek zamanlı ve fizyolojik koşullar altında bireysel insan adacıklarının fonksiyonel çalışmaları için çok yararlıdır.
