DC-ERG技术可用于视网膜色素上皮功能的非回避评估,以监测与年龄相关的变化或疾病进展,并评估药理干预作用。该技术通过简化毛细管电极制备,提高了DC-ERG的再现能力和易用性。它还可以补充一个标准的欧姆软件应用程序,以方便分析。
首先,小心地将 25 规格的注射器针头通过硅橡胶垫片滑到电极支架的后壁上。用脱气的HSS填充电极支架的底座,同时慢慢缩回针头,注意不要冒泡,在不拧紧的情况下更换螺纹盖。重新插入注射器针头,用 HBSS 填充间隙内的空间,并在填充时水平握住毛细管,以防止溶液从另一端逸出。
抓住弯曲端的填充毛细管,通过松开的盖缓慢插入另一端,并将螺钉盖拧紧到位。倾斜电极支架,使毛细管电极朝上,让任何气泡流出,并在真空室中解气 5 到 10 分钟。然后,慢慢释放真空并重新填充电极支架和玻璃毛细管,如所证明的。
要为微型电子支架制作一个定制支架,请从数字 8 T 形夹的一侧拆下黑色聚乙酰剪辑,并使用带磁球接头的气缸底座进行加工以调整高度。将经过修改的 T 形夹子固定到带 M3 尺寸螺母的磁性球安装螺钉上,并在大约一英寸锥形木手柄中滑动,从棉尖清洁棒修改,以一定角度将微型电子支架固定到定制的 T 形夹磁性球接头支架中。然后,使用稀土磁铁缸底座将定制的电极支架牢固地固定在舞台的金属板上,从而在 180 度轴上实现 360 度旋转。
要执行电极测试,首先,将完全组装的 HBSS 填充毛细管微电极轻轻降低为 HBSS 的小容器中。将针接地电极和银、氯化银中心颗粒参考电极放在同一 HBSS 中,以完成电路并选择或创建适当的标识符来描述要测试的鼠标。要选择要执行的直接耦合电retinogram协议,请单击协议并选择DC-ERG。
单击"运行"。将弹出一个对话框,显示患者信息。如果信息正确,请单击"是",然后继续执行六个步骤之一。
关闭法拉第笼的门,然后单击阻抗以显示阻抗模式。验证嘴参考、尾接地和记录电极的值是否可接受,然后单击步长以继续执行步骤,以执行第 6 步中的 4 步以测试基线稳定性。要开始查看跟踪,请单击预览。
跟踪应为低噪声,峰值振幅小于 200 微伏。要放置小鼠和电极进行实验,对静种小鼠的角膜进行麻醉,在将角膜扩张至2.5%苯丙胺HCL和5%热带酰胺之前,先对角膜进行麻醉。在 ERG 系统软件中,验证是否选择了正确的患者。
单击协议。在协议说明下,选择 DC-ERG 并单击"运行"。单击"是"以验证是否执行了正确的测试。
使用六步中的第一步打开圆顶内昏暗的红灯,然后将鼠标放在加热的录音桌上。使用钳子小心地帐篷后腿的皮肤。用一只手牢牢握住针电极,用另一只手将电极皮下插入后腿,将电极固定到位。
将参考银、氯化银电极放入动物的嘴里,使中心颗粒沿着后脸颊放置,并固定在牙齿后面。在将毛细管电极放在眼睛上之前,将电极支架与玻璃毛细管垂直方向放置,然后用食指轻拂电极支架,以去除可能引入的任何气泡。使用 25 量针用 HBSS 填充毛细管尖端,并检查毛细管,以确保尖端中没有气泡。
放置电极支架,使充满 HBSS 填充毛细血管的打开尖端与角膜温和接触。并注意避免引入气泡,倒置润滑剂眼凝胶分配器丢弃初始滴。然后,将一滴润滑剂眼凝胶放在每只眼睛上,以保持导电性并防止在录制过程中干燥。
要记录 DC-ERG,请单击步骤以选择六个步骤中的第五步,然后单击阻抗以使用阻抗检查屏幕检查左右眼的电阻。每只眼睛的记录电极的阻抗值应相似。接地和参考电极的阻抗值应小于 10 千赫。
单击预览以查看左右眼睛的轨迹,并等待长达 10 分钟才能实现稳定的基线。然后,单击"停止"退出跟踪预览,然后单击"运行"以开始录制。此处显示了来自条件挖空和野生类型鼠标的示例数据集。
在此分析中,微量受到电极中微小气泡的损害。它增加了跟踪中的峰到峰噪声。在另外一项分析中,在将微电极在电极支架内组装之前,使用真空室消除了气泡。
可以计算初始 25 秒的最佳拟合线,从而可以重新分配漂移校正响应,并识别 DC-ERG 元件的振幅。如预期的那样,RPE中固化7.1钾通道的表达减少大大衰减c波和快速振荡,表明视网膜色素上皮电性能有显著损伤。在这里,显示直流-ERG分量的相对振幅,这些分量被规范化为野生型,并针对相对两个最大的光唤起的波幅绘制。
这种形式的分析可以确定,光感受器活动本身的减少是否可解释RPE的电响应降低。或者,如果存在源自 RPE 的潜在缺陷。请记住,在移动到鼠标记录之前,要获得稳定的基线,并定期重新检查电极,以发现可能引入的气泡。
在 DC-ERG 之前可以记录深色适应 ERG,以测量锥形驱动的视网膜功能。在DC-ERG之后,还可以进行光适应ERG,以评估锥形驱动的视网膜反应。