血栓成形术和浊度测定是血栓表征的两种简单而独特的方法。这些技术共同提供了对凝血变量如何影响血块特征的更全面理解。这两种测定方法不仅提供端点血块分析,而且能吸引纤维蛋白凝块形成,不像许多其他凝块表征工具,这些技术可以帮助开发一个生理相关的合成凝块平台,可以提供可靠的诊断血栓患者纤维化状态监测凝块浊化随着时间的推移,使用任何市售的光谱仪,其吸收范围为350至700纳米。
打开光谱仪并打开相应的分析软件。然后选择板一并打开板设置选项卡。单击 ABS 和动能来监视一段时间的动态吸光。
在波长选项卡中选择 550 纳米,然后切换到计时选项卡,以 30 秒的间隔将总运行时间调整为 60 分钟,通过突出显示它们来选择感兴趣的井。将 PBS 的 140 微升移液放入一个 UV 透明 96 井板的井中。然后加入10微升的血栓和混合,立即启动凝固,通过添加50微升纤维蛋白原到井和移液器上下五次使用移液器的第一站照顾,以避免产生气泡。
将板放在板架中,然后单击软件中的读数以开始浊度读数。当读取完成检索浊度数据并通过绘制吸收度随着时间变化获得浊度跟踪曲线时,通过获取曲线在一段时间中的最大吸收度值来获取最大浊度,然后通过将最大浊度乘以 0.9 来计算 90% 的最大浊度。通过计算从血块启动到 90% 最大浊度的时间,得出最大浊度的时间。
打开血栓成形术或 TEG 分析仪,等待温度稳定在 37 摄氏度,然后打开 TEG 软件并在 ID 部分下创建实验名称。单击 TEG 选项卡,然后按照屏幕上的提示对所有通道执行电子测试。然后,在所有检查完成后,将操纵杆放回负载位置。
单击信息页中完成,并输入要使用的通道的示例信息。将透明未涂覆的 TEG 杯放在相应的通道中。将托架滑到顶部,将杯底压五次,将销固定在齿轮杆上,然后降低托架,然后向下将托架向下压入底座,直到其咔嗒一声。
将20微升血栓溶液放入TEG杯中,然后通过将340微升纤维蛋白原加入杯中获得360微升凝固液,开始凝固。通过上下移液五次混合杯子的内容。向上滑动杯装托架将操纵杆移动到读取位置,然后单击软件中的启动以启动 TEG 读数。
读数完成后,检索参数,通过绘制一段时间的振幅获得 TEG 跟踪曲线。选择 MA 作为最大振幅,表示块应变和 TMA 作为软件的最大振幅时间。此处显示了不同纤维蛋白水平的代表性浊度和牛纤维蛋白血块的 TEG 跟踪曲线。
跟踪曲线表明,在血块启动后一段滞后期后,血块浊度或血块振幅会随着时间的推移而增加,并在血块形成结束时关闭水平。最大浊度和最大浊度时间是从浊度派生的两个参数,而最大振幅和最大振幅的时间则派生自 TEG。在凝血溶液中的纤维蛋白原水平较高时,所有四个值都增加。
最大浊度是血块结构的光学测量,表示纤维纤维厚度和纤维蛋白网络密度。虽然最大振幅是反映绝对血块应变的机械测量,但两个值一起提供了有关血块微结构的互补见解。此过程演示了一个简化的凝血模型,用于检查主要影响纤维蛋白聚合的变量。
此模型可以通过包含其他凝血因子来研究其他参数进行定制。凝血模型可以很容易地修改使用临床血浆样本监测凝血的形成和幻灭存在抗血栓药物。研究结果可以指导患者的治疗管理。