使用等温微计算法确定新天然产物的杀菌或杀菌作用的代谢分析

了解新型抗菌化合物的用法是一项重要但艰巨的任务。此方法提供了对此类机制的见解，并且易于实现。该技术允许以非侵入性的方式实时观察抗菌效果，从而进一步进行样品分析。

虽然用微生物技术练习是一个先决条件，但实验很容易进行。首次执行微计算时，花时间进行数据分析非常重要。首先使用波长为 600 纳米的分光光度计来测量过夜培养的光密度。

稀释培养物至每毫升新鲜MHB培养基浓度的5倍至第5菌落形成单位，并在感兴趣的浓度下，在每1.5毫升抗生素管中加入150微升的细胞。然后通过涡旋将化合物与细胞混合。要准备插入物，将每种细菌抗生素混合物的120微升加入48孔板的适当孔中的个别塑料插入物中，并使用钳子将所有钛小瓶放入支架中。

轻轻将刀片转移到支架板中的钛瓶中，并松散地将钛盖放在所有小瓶上。当所有刀片都已转移后，将支架放在样品站上的指定区域，并使用设置为 40 百分米的扭矩扳手拧紧所有盖子。在系统软件中，开始新的实验，然后从仪器中收回样品插入臂。

将杯架放在桥面上，第 8 列朝向样品插入开口，然后轻轻地将杯架推入位置 1 的仪器中。在给实验井贴上标签之前，请等待 10 分钟，让系统稳定下来。接下来，将样品插入臂推入杯架位于位置 2。

让系统稳定 20 分钟后，将样品插入臂推入位置 3，并缩回样品插入臂，直到其处于运行位置。突出显示软件中的所有孔并选择反应开始，然后运行实验，直到热发射读取稳定地回到零。在分析结束时，选择停止。

然后，该软件将询问您是否确定。选择"是"并保存实验以进行数据分析。然后将样品插入臂完全插入仪器，并接合磁铁以取回杯架。

要分析数据，请打开软件并选择打开实验。在弹出窗口中，选择感兴趣的实验，然后单击"打开"。单击"全部选择"并定义基线以规范化每个位置中的数据。

在弹出窗口中，选择滞后阶段内超过 30 分钟的时间段。选择后，基线将在热图中显示为绿色。关闭定义的基线剖面窗口，然后单击"保存"并关闭软件。

接下来，打开基于 Web 的 SymCel 热量分析应用程序。单击"浏览"以上载感兴趣的文件并选择实验。代谢参数将自动计算为32个样本。

要将热流量数据与 Gompertz 和/或理查兹增长模型配合使用，请单击"增长函数"。增长模型将显示在累积部分中，以便与流部分中的原始数据进行比较。要下载计算的参数，请单击下载度量值，选择文件位置，然后单击"保存"。

该文件将导出到电子表格中作进一步分析。在这里，显示通过暴露A.baumannii DSM-30008获得的连续稀释中丙丙沙星获得的热图。浓度在0.005和0.1微摩尔之间对 A.baumannii 生长和新陈代谢的影响最小。

然而，用0.5微摩尔齐丙沙星治疗细胞会导致滞后阶段持续时间的显著变化，并导致最大热流量降低。这两个变化一起影响峰值时间，导致大约 6 小时。在此图中，累积释放的热量与时间相绘制，每个浓度的影响由坡度倾斜反映。

热图倾斜的定量允许计算A.baumannii在丙丙沙星存在的情况下的最大代谢率，同时在用0.5微摩尔红素治疗的细胞中观察到的代谢率降低。利福平治疗对 A.baumannii DSM-30008 的热图有显著影响。观察到热排放与代谢活性减少相关的显著减少。

请注意所有测试浓度达到峰值的时间增加，以及通常归因于杀菌作用的所有浓度的斜率下降导致的代谢率下降。为确保最佳效果，在转移样品时，使用反向移液，防止刀片侧面出现额外的液体，同时确保盖子正确关闭。