فهم طريقة عمل المركبات المضادة للبكتيريا جديدة مهمة هامة ولكنها صعبة. توفر هذه الطريقة رؤى حول هذه الآليات ومن السهل تنفيذها. هذه التقنية تسمح لمراقبة في الوقت الحقيقي من الآثار المضادة للبكتيريا بطريقة غير الباضعة مما يتيح مزيد من تحليل العينة.
على الرغم من أن ممارسة التقنيات الميكروبيولوجية هو شرط مسبق، التجربة سهلة الأداء. أخذ وقتك مع تحليل البيانات مهم جدا عند إجراء القياس الدقيق للمرة الأولى. ابدأ باستخدام مقياس طيفي عند طول موجة من 600 نانومتر لقياس الكثافة البصرية لثقافة الليل.
تخفيف الثقافة إلى 5 مرات 10 إلى 5 مستعمرة تشكيل وحدات لكل ملليلتر من تركيز MHB المتوسطة الطازجة وإضافة 150 ميكرولترات من الخلايا إلى كل 1.5 ملليلتر أنبوب من المضادات الحيوية في تركيز الفائدة. ثم اخلط المركب مع الخلايا عن طريق الدوامة. لإعداد إدراج، إضافة 120 ميكرولترات من كل خليط المضادات الحيوية البكتيريا في إدراج البلاستيك الفردية في الآبار المناسبة من لوحة 48 جيدا واستخدام ملاقط لوضع كل من قوارير التيتانيوم في أصحاب.
نقل بلطف إدراج في قارورة التيتانيوم في لوحة حامل ووضع فضفاضة أغطية التيتانيوم على جميع قوارير. عندما تم نقل جميع إدراج، ضع حامل على المنطقة المعينة على محطة العينة واستخدام وجع عزم الدوران تعيين إلى 40 centinewton متر لتشدّد كل من الأغطية. في برنامج النظام، بدء تجربة جديدة والتراجع عن ذراع الإدراج عينة من الصك.
وضع حامل الكأس على الجسر مع العمود الثامن التي تواجه فتح إدخال العينة ودفع بلطف حامل الكأس في الصك في موقف واحد. انتظر 10 دقائق حتى يستقر النظام قبل وضع العلامات على الآبار التجريبية. بعد ذلك، ادفع ذراع الإدراج العينة حتى يكون حامل الكأس في المركز الثاني.
بعد السماح للنظام بالستقر لمدة 20 دقيقة، ادفع ذراع الإدراج العينة إلى موضع ثلاثة ثم سحب ذراع الإدراج العينة حتى يكون في وضع التشغيل. تسليط الضوء على جميع الآبار في البرنامج وحدد بدء رد الفعل، ثم تشغيل التجربة حتى يقرأ الانبعاثات الحرارية هي ثابت مرة أخرى في الصفر. في نهاية التحليل، حدد إيقاف.
ثم يسأل البرنامج إذا كنت متأكدا. حدد نعم واحفظ التجربة لتحليل البيانات. ثم أدخل ذراع الإدراج العينة تماما في الصك وإشراك المغناطيس لاسترداد حامل الكأس.
لتحليل البيانات، افتح البرنامج وحدد التجربة المفتوحة. في النافذة المنبثقة، حدد تجربة الاهتمام وانقر فوق فتح. انقر فوق تحديد الكل وحدد الأساس لتسوية البيانات في كل موضع.
في النافذة المنبثقة، حدد فترة زمنية تزيد عن 30 دقيقة في مرحلة التأخر. بعد التحديد، سيظهر خط الأساس باللون الأخضر في الرسم الحراري. أغلق نافذة قسم تحديد الأساس، ثم انقر فوق حفظ وإغلاق البرنامج.
المقبل، فتح على شبكة الإنترنت تطبيق تحليل القياسات الحرارية SymCel. انقر على استعراض لتحميل الملف الذي يهمك وحدد التجربة. سيتم حساب المعلمات الأيضية تلقائيًا للعينات الـ 32.
لملاءمة بيانات تدفق الحرارة إلى نماذج نمو Gompertz و/أو Richards Growth، انقر فوق وظيفة النمو. سيتم عرض نماذج النمو في المقطع التراكمي للمقارنة مع البيانات الأولية في مقطع التدفق. لتنزيل المعلمات المحسوبة، انقر فوق مقاييس التنزيل، وحدد موقع الملف وانقر فوق حفظ.
سيتم تصدير الملف إلى جدول بيانات لمزيد من التحليل. هنا، يتم عرض الرسوم الحرارية التي تم الحصول عليها عن طريق تعريض A.baumannii DSM-30008 إلى ciprofloxacin في التخفيف التسلسلي. التركيزات بين 0.005 و 0.1 micromolar لها تأثير ضئيل على نمو A.baumannii والتمثيل الغذائي.
ومع ذلك، فإن علاج الخلايا بـ 0.5 من سيبروفلوكساسين الدقيق يؤدي إلى تحول كبير في مدة المرحلة الانتقالية وإلى انخفاض الحد الأقصى لتدفق الحرارة. هذه التغييرات اثنين معا تؤثر على الوقت إلى الذروة، مما أدى إلى زيادة حوالي ست ساعات. في هذا الرقم، يتم رسم الحرارة التراكمية الصادرة ضد الزمن مع تأثير كل تركيز ينعكس من قبل منحدر المنحدر.
يسمح القياس الكمي للميل الحراري بحساب المعدل الأيضي الأقصى لـ A.baumannii في وجود سيبروفلوكساسين مع انخفاض مصاحب في معدل الأيض الملاحظ في الخلايا المعالجة بـ 0.5 ميكرومولار سيبروفلوكساسين. العلاج ريفامبيسين له تأثير كبير على ثيرموجرامات A.baumannii DSM-30008. كما لوحظ انخفاض كبير في انبعاثات الحرارة المرتبطة بانخفاض في النشاط الأيضي.
لاحظ الزيادة في الوقت إلى الذروة لجميع التركيزات المختبرة والانخفاض في معدل الأيض الناجم عن انخفاض في المنحدر لجميع التركيزات التي تعزى عادة إلى تأثير مبيد للجراثيم. لضمان النتائج المثلى، استخدم الخفقان العكسي ومنع السوائل الإضافية على جانبي الإدراج عند نقل العينة، وتأكد أيضًا من أن الأغطية مغلقة بشكل صحيح.
