这种方法为研究人员提供了一种为元素成像技术准备水生植物根部、周围岩石圈和散装土壤的新方法。这种方法的主要优点是,它相对快速和负担得起,同时也准确地保留了利益元素的分布和规格。该技术可用于回答有关许多元素和植物系统的问题,从农业系统的营养物质到束缚系统中污染物的命运和运输。
请务必快速工作,同时注意取样根系统所需的区域或区域。并每个根系统采集多个样本。为了准备实验的冷冻设备,将二、五乘五乘五乘15厘米的铜块水平放入一个能够容纳液氮的清洁冷却器中。
穿着适当的PPPE,将足够的液氮倒入冷却器中,以淹没方块。一旦冒泡消退,在一个铜块的两端放置一个隔音器。然后,使用钳子和低温手套,站在其末端的另一个铜博客,使检索更容易,当样品到位。
要收集样品,要么使用盆栽植物,要么使用铲子开始从潮湿的土壤中提取所需的植物和岩石圈,注意挖洞比所需的根体积大得多。使用钢刀片切割多余的土壤,注意不要打扰所需区域内的土壤。当所需的区域到达时,将大约三乘三乘三乘二厘米的根立方体切开,并立即将立方体放置在水平铜块的两个隔板之间。
对于样品的冷冻,使用低温手套将垂直铜块放置在垫片上约五分钟。当冒泡消退时,将冷冻的岩石圈立方体样品转移到一块预先标记的铝箔方块中。要冷冻干燥土壤立方体,当冷冻干燥机达到适当的真空压力和温度时,放置一个冷冻的岩石圈立方体样品,用于清洁和酸洗 50 毫升管或直接进入冷冻干燥机,并使用干净的一次性湿巾防止灰尘进入真空泵。
将样品放入冷冻干燥容器中至少几天,直到干燥。当组织被冻结干燥时,使用钢刀片将土壤立方体干燥到适当的大小进行分析,然后将立方体放入真空干燥器内的标记形式中。根据制造商的说明准备环氧树脂后,使用滴滴器在土壤的一侧慢慢添加环氧树脂,直到环氧树脂完全覆盖样品。
当环氧树脂弄脏土壤时,土壤会变暗。一旦表格中装满了环氧树脂,关闭干燥器并打开真空。前一到四小时每 30 到 90 分钟检查一次环氧树脂水平,必要时添加额外的环氧树脂。
环氧树脂硬化后,取出样品。嵌入后,使用钻石刀片精密湿锯切割样品。如果在上一个切口中未获得根部,则将样品切成不同的方向。
修剪后,手动用逐渐细化的砂纸将每个样品的切面擦去,每次砂砾大小为 30 秒。在这个数字中,在土壤基质中可以观察到几个根直径作为横截面。根部可能表现出不同的质量水平。
例如,在这张图片中,可以观察到保存完好的根部、被冻结干燥过程扭曲的根和在薄分割过程中拔出的根。通过同步加速器 X 射线荧光成像分析此根横向部分,通过纵向纵向部分进行分析,可以检测铁、锰和砷。在光显微图图像中也可以看到土壤内和铁斑块根部周围的铁的存在。
锰在横向根部皮层内独一无二,但在铁斑块内的某些区域也与铁作为绿蓝色色调共同定位。砷主要存在于横向根合并到原根的血管内。化学规格成像揭示了砷物种本地化的变异性。
正如在这种三色情节中观察到的,砷酸盐和砷酸谷胱甘肽在血管中密切相关,而砷酸盐主要在根部外部局部化,与铁斑块相关联。在采集样本之前,确定元素成像根系统所需的部分。这将决定删除的根键的位置方向。
根据此协议,样品可以使用各种技术以微米级或粗糙度成像,具体取决于具体的研究问题、感兴趣的元素或可用的仪器。