改善水果香气是育种计划的主要目标之一。为此,我们需要一种可靠的技术,使我们能够测量水果中的挥发性成分。该技术快速且半自动化,每天最多可测量22个样品。
此外,它相对便宜,需要最少的样品处理。这种方法可以很容易地应用于所有水果品种,例如具有重要经济意义的浆果作物。此外,检测化合物的库大小可以很容易地增加。
首先,将一毫升氯化钠溶液加入含有涉水冷冻样品的五毫升管中。摇动试管,直到样品完全解冻并匀浆。然后在室温下以5, 000次g离心五分钟。
切下1, 000微升移液器吸头的末端,并用它来转移到含有顶空的氯化钠的上清液中。向每个含有顶空文件的样品中加入五微升内标。将封闭的顶部空间文件置于室温下的GC-MS自动采样器中,以进行自动HS-SPME / GC-MS运行,确保生物重复不会放置在自动采样器中的连续位置。
在52摄氏度下预孵育顶空锉育10分钟,以17倍G的搅拌将SPME装置插入小瓶中,将纤维暴露在顶空,并在50摄氏度下进行30分钟的VOC提取,以17倍G的搅拌进行VOC提取.将纤维以无分裂模式在250摄氏度下将纤维引入注射口一分钟以进行挥发性解吸。然后在SPME清洁站中用氮气在250摄氏度下清洁纤维五分钟。使用与离子阱质谱仪耦合的气相色谱仪分析VOC,如检测手稿中所述。
打开原始 GC-MS 配置文件。为了鉴定化合物,请将保留时间、质谱和Kovats线性保留指数与从真实标准品中获得的保留指数进行比较。对于每个商业标准,注释最丰富的质量中的保留时间以对离子进行充电。
然后为每个VOC选择一个特定的M×Z离子。计算每个VOC相对于内标的峰面积,以最大限度地减少仪器变化和强度漂移。对于批量效应校正,将每个样品的VOC峰面积归一化为同一运行中分析的对照样品中的相应峰面积。
通过HS-SPME/GC-MS获得的成熟黑醋栗果实挥发性总离子色谱图谱鉴定了属于酯类、醛类、醇类、酮类、萜烯和呋喃的63种VOCs,该库是为分析浆果果实种类而开发的。观察到的一些最丰富的峰对应于两种单萜,芳樟醇和松油醇,以及两种C6化合物,2-己烯醛和3-己烯醛。从黑色电流剖面获得的质谱与纯商业标准品的光谱进行比较,显示了2-己烯醛和松油醇。
4种不同黑流品种VOC剖面的PCA表明,PC1根据其位置分离样品,因此环境对挥发性含量有强烈影响。使用PC2可以观察到有效的基因型,因为Ben Tirran与其余品种明显分离。芳樟醇和2-己烯醛在4个评估的黑色电流品种中的相对含量证实,芳樟醇含量在波兰普遍高于苏格兰,而2-己烯醛则呈现相反的趋势。
芳樟醇的比例在Ben Tirran品种中最高,在Ben Tron品种中,2-Hexenal的比例最高。重要的是从冷冻材料开始,研磨成细粉,以确保适当的挥发性提取。提取后,应尽快将样品放入自动取样器中。
该方法可以与其他代谢平台相结合,鉴定其它重要的代谢,对于食品的味道或营养价值,培育出具有增强感官特性的品种。