小尺度等离子体膜分离协议和mGFPHis双标签，提供了一个经济，快速，可靠，简单的方法来描述膜蛋白在真核模型生物体，糖体切口。这项技术的最大优点是膜蛋白表达水平、ATP的活动和洗涤剂最适合其纯化的易用性和速度。这项技术非常方便用户使用。
然而，需要记住的一个重要点是将细胞收获为OD 600的2，这确保了低线粒体污染和尽可能高的ATPase活动。首先，在30摄氏度的10毫升YPD介质中预先培育一个酵母菌群，每分钟200次旋转7至8小时。使用 10 毫升预培养物为 40 毫升新鲜 YPD 介质接种疫苗。
然后以每分钟200次旋转的速度在30摄氏度的夜间孵育细胞，直到细胞密度达到1到3的OD 600。第二天，通过在摄氏4度下以每5分钟4200次G的离心离心方式，收获40个对数面细胞的光学密度单位（ODU）。用40毫升冰冷无菌双蒸馏水重新悬浮和清洗细胞。
使用一毫升冰冷水重复清洗，在洗涤步骤之间离心。将颗粒重新悬挂在一毫升冰冷无菌水中，并将细胞悬浮液转移到冰上预冷的 1.5 毫升微型离心机管中。在摄氏4度下，在3，300倍G下采集细胞，3分钟。
吸气超纳坦，并重新悬浮细胞颗粒在500微升同质化缓冲器新鲜补充一毫摩尔芬纳甲基硫化物，或PMSF。将电池悬架存放在零下 80 摄氏度，直到进一步使用。将冰上的细胞解冻约一小时。
然后在细胞悬浮物的500微升中加入直径为0.5毫米的冰冷硅珠，达到1毫升的总体积。要打破细胞，将细胞以最大震动强度涡流悬浮一分钟，持续六个周期，每个周期后在冰上冷却三分钟。旋转后，用加热的手术刀刀片在管子底部打一个薄孔，将破碎的细胞同质化为另一个冰冷的1.5毫升微型离心机管，低速旋转10秒。
将收集的细胞同质化为 5，156 倍 G，在 4 摄氏度下进行 5 分钟，以清除细胞碎片。将450微升超高离群值转移到冰冷1.5毫升微离心机管中，并加入1毫升冰冷同质化缓冲器，辅以1毫升新鲜PMSF。要收获等离子膜，在摄氏17，968次时将细胞悬浮离心，在4摄氏度下一小时。
取出超高分子，加入100微升同质缓冲器，新鲜补充一毫摩尔PMSF。然后用 100 微升移液器尖端搅拌松开等离子膜颗粒，然后通过上下重复管道重新悬挂颗粒。用与含有还降剂和洗涤剂的缓冲剂相容的蛋白质检测试剂盒测量等离子膜制剂的蛋白质浓度。
将等离子膜储存在零下80摄氏度，或将其保存在冰上立即使用。将四到五毫升分离的凝胶倒入组装的凝胶装置中，从顶部向下倒两厘米。小心地将 0.1% SDS 的 1 到 2 毫升层放在上面，让聚丙烯酰胺凝胶在室温下固定 60 分钟。
一小时后，从聚合分离凝胶中取出 0.1% SDS 层，用双蒸馏水冲洗凝胶，以去除 SDS 的痕迹。将堆叠凝胶混合到分离凝胶上。将梳子放入堆叠凝胶中，并从梳子周围去除任何气泡。
然后让堆叠凝胶在室温下固定 60 分钟。取下梳子，然后用水冲洗凝胶槽。将凝胶放入凝胶罐中，用运行缓冲器将凝胶罐填充到顶部。
将等离子膜样品的5至10微升混合，其体积相当于蛋白质加载染料的2倍，并立即将样品混合物装入单独的凝胶槽中，浸入运行缓冲中。将蛋白质分子量标记在 10 到 245 Kilodalton 之间加载到单独的插槽中，以便对单个蛋白质片段进行大小估计。在 200 伏特下执行凝胶电泳，直到蓝色装载染料到达凝胶底部。
使用凝胶成像系统检查凝胶内 GFP 荧光。荧光成像后，通过在室温下轻轻搅拌凝胶15分钟，将蛋白质固定在10至20毫升的蛋白质凝胶固定溶液中。然后用10毫升双蒸馏水冲洗两次10分钟，并将凝胶放入10毫升胶体Kumasi染色液中，在室温下轻轻摇晃1小时，使蛋白质带可视化。
为了改善蛋白质带的可视化，在用凝胶成像系统记录图像之前，在20毫升双蒸馏水中去污一到两次凝胶一小时。通过正控质粒PS2实现了对甲三角洲的高频率转化。没有获得欧洲细胞原体变压剂的负控制。
在CSM减去URA板上孵育转化的AD三角洲细胞三天后，获得了约50个URA细胞原体CDR1-mGFPHis变压剂。不能在 YPG 茄板上生长的娇小变压剂被淘汰。不同浓度的 CDR1-mGHPHis 样品通过凝胶内荧光进行量化。
mGFP 荧光强度在整个浓度范围内是线性的，背景荧光最小。改变细胞密度表明，打破40 ODU的细胞产生最高质量的等离子体膜与最高的CDR1 ATPase活性。然而，等离子体膜的产量随着细胞密度的增加而增加。
使用 SDS 页面测试了 31 种具有各种特性的洗涤剂从 AD Delta Delta 的粗等离子膜、CDR1-mGHPHis 细胞中溶化 CDR1-mGHPHis 的能力。贝塔和阿尔法 Ddm 和福斯胆碱 13 是最好的洗涤剂， 以溶化 Cdr1 - mghphis 。然而，福斯胆碱13导致CDR1-mGHPHis的部分水解。
粗等离子膜蛋白溶化与1%洗涤剂分离使用suos六增加10 300GL大小排除列。马尔托赛德和LMNG提取蛋白质的色谱图显示，大多数CDR1-mGHPHis在15.5毫米CDR1-mGHPHis的优美形状的高斯峰中躲避，其含葡萄糖的洗涤剂被暗示为聚合或广泛聚集的峰值。DDM 的较高峰值表明，DMN G 溶化 CDR1-mGHPHis 的很大一部分可能已变性。
在FSCC色谱中，只有Digitoin和两种非离子洗涤剂的色谱，并且给DDM一个类似的色谱。Fos-choline 13 给出了一个对称的锐利形状的峰值，但它暗示的逃生量明显低于 DDM。优化的双标签还提高了纯化率，并有助于确定膜蛋白的本地化、贩运和热稳定性。
异质表达技术也可用于高通量药物筛选，以及许多其他膜蛋白的详细表征。
