该方法测量叶片透光率的变化,作为叶绿体运动的代表,叶绿体运动根据物种,环境和突变的不同程度影响叶片的光吸收。这种经济实惠的自制设备可以以直接和半自动的方式量化叶绿体运动的动态变化。这些数据补充了显微镜研究。
重要的是要严格遵循说明并小心对待仪器。首先,将传输设备连接到稳定的电源,然后按设备的电源开关重置仪器。接下来,将iPad连接到稳定的电源。
按主屏幕按钮激活屏幕并输入密码登录。按设置图标,然后按显示和亮度图标。接下来,按自动锁定并选择"从不"以确保屏幕永久保持打开状态,以便程序将运行而不会中断。
然后按主屏幕按钮返回主屏幕。关闭所有应用程序后,找到并打开LeafSensor应用程序,然后在显示文本和白色字段的绿屏中输入信息。确保在屏幕的下半部分看到"已连接"字样,表示应用正在与传输设备通信。
如果出现"找不到 Adafruit"消息,请检查设备是否已接通电源,然后再次按设备上的"开始"按钮。填写应用页面上的前四个字段,为使用没有任何叶子的开放叶剪辑进行简短测试运行设置条件。首先将实验命名为名为"实验名称"的字段中,然后通过在名为"光强度数"的字段中键入数字来选择实验中将使用的不同蓝光强度的数量,然后通过选择一个介于 0 和 3, 000 之间的整数来键入要使用的蓝光强度,并在名为"蓝色强度"的字段中用逗号将每个强度与下一个强度分开。
在名为"蓝色持续时间"的字段中键入每个蓝光强度的时间长度。按屏幕中间部分的"开始实验"。在屏幕的下半部分,将显示八个带有"开始实验"消息的连字符。
让实验运行,直到出现第一个数据。在确保前两分钟没有从LED发出光后,观察弱蓝光的发射两分钟,然后再发射强蓝光两分钟。在整个序列中,还要观察LED每分钟短暂发射一次强烈的红光。
检查应用页面左下角的"实验已完成"消息所指示的"已完成实验"状态,然后按主屏幕按钮两次。轻扫出应用,然后再次打开。通过按下开/关按钮重置仪器,使仪器为带叶片的运行做好准备。
在黑暗中,仅使用非常低的白光或绿光,从适合黑暗的植物中挑选一片宽阔的叶子来覆盖LED。准备大约一个叶夹长度的滤纸条。然后在滤纸条顶部打一个孔,以防止覆盖LED。
将润湿的滤纸放在固定 LED 的叶夹部分。从培养皿中取出适合深色的叶片夹,然后将叶片放在叶片夹的湿滤纸顶部,确保轴向叶片表面朝向LED。然后将另一个叶夹部分与照片晶体管放在顶部。
如果需要,请使用橡皮筋将两个叶夹部件固定在一起。将叶夹放在相应的船上,并使用移液器将水瓶装满水箱,确保叶子或至少滤纸接触水,以避免在运行过程中叶子脱水。在 iPad 上设置 LeafSensor 应用程序,然后在名为"实验名称"的字段中键入 EXPLORA1。
在名为"光强度数"的字段中键入 10。然后在名为蓝色强度和蓝色持续时间的字段中输入数字。按开始实验。
第一分钟后,观察出现的输出值。如果值相差很远,请检查叶子是否正确放入叶片剪辑中。运行完成后,将自动保存数据。
在直立位置旋转屏幕后,屏幕上将出现两个选项,保存和实用程序。按"实用工具",然后从已保存文件的列表中选择 EXPLORA1 文件。在文件列表下方,EXPLORA1 现在将显示在选定的实验中。
接下来,按电子邮件。输入电子邮件地址,EXPLORA1 文件将自动附加到邮件中,然后按发送。将透射率数据与时间进行对比,结果表明,在低光强下,拟南芥的透射率降低,而当光强进一步增加时,则诱导了回避响应。
图中显示了野生型和突变拟南芥叶子在19小时长跑中的平均传播百分比值。当野生型和phot2突变体的叶子都暴露在低蓝光下时,最初传播的快速减少随后缓慢减少,表明叶绿体正在进入积累反应。与野生型相比,phot1显示出较低的积累反应。
当蓝光强度在11小时后逐步增加时,透射百分比增加,叶绿体进入回避反应。相对于暗值(也称为Delta T)的透射百分比的变化程度取决于确切的蓝光强度。负值表示叶子显示累积响应,而正值表示回避响应。
透射速度的变化计算为光增加时透射率的变化斜率。在具有代表性的示例中,当随着蓝光强度的增加而触发回避时,传输速度在初始响应期间发生变化。在研究未表征突变体或物种的传播变化时,请通过显微镜研究确认透射值和叶绿体位置的相关性。