Este método mede mudanças na transmissão de luz das folhas como um proxy para o movimento do cloroplasto que influencia a absorção de luz de folhas em diferentes graus, dependendo de espécies, ambiente e mutações. Este dispositivo caseiro acessível torna possível quantificar as mudanças dinâmicas no movimento do cloroplasto de forma simples e semi-automatizada. Os dados complementam os estudos de microscopia.
É importante seguir de perto as instruções e tratar o instrumento com cuidado. Para começar, conecte o dispositivo de transmissão a uma fonte de alimentação estável e pressione o interruptor de alimentação do dispositivo para reiniciar o instrumento. Em seguida, conecte o iPad a uma fonte de energia estável.
Pressione o botão da tela inicial para ativar a tela e digite a senha para fazer login. Pressione o ícone de configurações, seguido pelo ícone de exibição e brilho. Em seguida, pressione o bloqueio automático e selecione nunca para garantir que a tela permaneça permanentemente para que o programa seja executado sem qualquer interrupção.
Em seguida, pressione o botão da tela inicial para retornar à tela principal. Depois de fechar todos os aplicativos, encontre e abra o aplicativo LeafSensor e insira as informações na tela verde que mostra texto e campos brancos. Certifique-se de que a palavra conectada seja vista na parte inferior da tela, indicando que o aplicativo está se comunicando com o dispositivo de transmissão.
Se a mensagem Adafruit NÃO Encontrada aparecer, verifique se o dispositivo está conectado e pressione novamente o botão de partida no dispositivo. Preencha os quatro primeiros campos na página do aplicativo para configurar as condições para um breve teste com clipes de folha abertos sem folhas. Comece nomeando o experimento no campo chamado nome do experimento, então escolha quantas intensidades diferentes de luz azul serão usadas no experimento digitando o número no campo chamado número de intensidades de luz, em seguida, digite as intensidades de luz azul para serem usadas selecionando um inteiro entre 0 e 3.000 e separe cada intensidade do próximo com uma círia no campo chamado intensidade azul.
Digite o tempo de cada intensidade de luz azul no campo chamado duração azul. Pressione o Experimento iniciar na seção intermediária da tela. Na parte inferior da tela, oito hífens com a mensagem Iniciar Experimento aparecerão.
Deixe o experimento funcionar até que os primeiros dados apareçam. Depois de garantir que nenhuma luz seja emitida do LED durante os primeiros dois minutos, observe a emissão de luz azul fraca por dois minutos e, em seguida, a emissão de luz azul forte por mais dois minutos. Observe também a luz vermelha intensa emitindo brevemente do LED uma vez por minuto durante esta sequência.
Verifique o status do Experimento Concluído indicado pela mensagem Experimento Terminado no inferior esquerdo da página do aplicativo e pressione o botão da tela inicial duas vezes. Deslize para fora do aplicativo e abra-o novamente. Reinicie o instrumento pressionando o botão liga/desliga para preparar o instrumento para uma corrida com folhas.
No escuro, usando apenas luz branca ou verde muito baixa, escolha uma folha larga da planta adaptada ao escuro para cobrir o LED. Prepare a tira de papel do filtro sobre o comprimento de um clipe de folha. Em seguida, faça um furo na parte superior da tira de papel do filtro para evitar cobrir o LED.
Coloque um papel de filtro umedecido na parte do clipe da folha que contém o LED. Remova o clipe de folha adaptado à escuridão da placa de Petri e, em seguida, coloque a folha na parte superior do papel filtro molhado de seu clipe de folha, garantindo que a superfície da folha adaxial esteja voltada para o LED. Em seguida, coloque a outra parte do clipe da folha com um transistor de foto na parte superior.
Se necessário, use um elástico para segurar duas partes de clipe de folha juntas. Coloque o clipe da folha no respectivo barco e usando uma pipeta, encha os reservatórios com água, garantindo que a folha ou pelo menos o papel filtro toque a água para evitar a desidratação das folhas durante a corrida. Configure o aplicativo LeafSensor no iPad e digite EXPLORA1 no campo chamado nome do experimento.
Tipo 10 no campo chamado número de intensidades de luz. Em seguida, digite os números no campo chamado intensidade azul e duração azul. Pressione o Experimento de Início de Imprensa.
Após o primeiro minuto, observe os valores de saída apresentados. Se os valores estiverem distantes, verifique se as folhas foram colocadas corretamente nos clipes de folha. Quando a execução for concluída, os dados serão salvos automaticamente.
Depois de girar a tela na posição vertical, duas opções, salvamento e utilitários, aparecerão na tela. Pressione utilitários e, em seguida, a partir da lista dos arquivos salvos, selecione o arquivo EXPLORA1. Abaixo da lista de arquivos, o EXPLORA1 agora aparecerá em experimento selecionado.
Em seguida, pressione e-mail. Digite um endereço de e-mail e o arquivo EXPLORA1 será automaticamente anexado à mensagem e, em seguida, pressione Enviar. Os dados de transmissão percentual foram plotados contra o tempo que mostram que a transmissão de Arabidopsis thaliana diminuiu em baixas intensidades de luz, enquanto uma resposta de evasão foi induzida quando as intensidades de luz aumentaram ainda mais.
Os valores médios de transmissão percentual do tipo selvagem e mutante Arabidopsis thaliana folhas durante 19 horas de duração são mostrados. Quando as folhas foram expostas à luz azul baixa tanto em mutantes do tipo selvagem quanto de phot2, a queda rápida inicial na transmissão foi seguida por uma diminuição lenta, indicando que os cloroplastos estavam se movendo para a resposta de acumulação. Comparado ao tipo selvagem, phot1 mostrou uma resposta de acumulação reduzida.
Quando a intensidade da luz azul é aumentada stepwise após 11 horas, a transmissão percentual aumenta e os cloroplastos se movem para a resposta de evasão. Os graus de mudança na transmissão percentual em relação ao valor escuro, também chamado delta T, dependiam das intensidades exatas da luz azul. Os valores negativos indicam que as folhas apresentaram uma resposta de acumulação, enquanto os valores positivos indicam uma resposta de evasão.
A velocidade de mudança na transmissão é calculada como a inclinação da mudança na transmissão quando a luz é aumentada. No exemplo representativo, a velocidade de transmissão mudou durante as respostas iniciais quando a evasão foi acionada à medida que a intensidade da luz azul aumentava. Ao investigar as mudanças de transmissão em um mutante ou espécie não caracterizada, confirme como os valores de transmissão e as posições de cloroplasto se correlacionam com um estudo de microscopia.
