使用比色皿型快速重复率荧光计测量 Colacium sp.附着阶段的光生理学

该协议测量附着藻类的光合活性，而它们仍然附着在浮游生物上，就像在自然界中一样。这种技术的主要优点是光生理学的测量可以实时完成，而不会干扰样品。为了检查浮游动物个体对基线荧光的影响，从没有任何附着生物体的培养物中制备成年粘液性肩胛。

现在，在FLW中将个体在20摄氏度下饿死至少90分钟，以避免肠道内容物发出荧光。将1.5毫升FWL倒入比色皿中。拾取所需的 s 数。

粘液体个体在光学显微镜下以100倍放大倍率使用移液器，并将其转移到比色皿中。添加FLW可使样品体积达到2毫升，并允许其在20摄氏度的低光下适应15分钟，然后快速重复率荧光计测量。然后单击"执行运行"以开始测量，并为每个样品重复测量三次以上。

从生成的图中读取 F0 值。在100倍放大倍率的光学显微镜下使用移液器用蜕皮甲壳拾取可乐菌，并用FLW洗涤它们。无菌地将AF-6培养基中的可乐菌种接种在干净的工作台上的10毫升玻璃管中。

在生长室中将培养物保持在NC2温度，每天至少用手轻轻摇动玻璃管一次以防止细胞沉降。为了检查浮游动物个体对来自可乐菌物种的叶绿素和荧光的影响，使用没有任何附着生物的成年s. mucronata。

为了避免肠道内容物发出荧光，请使FLW中的个体挨饿至少90分钟。设置比色皿式快速重复率荧光计。现在将预培养的可乐菌种的1.5毫升子样品倒入比色皿中。

然后将所需数量的粘液链球菌个体转移到这些比色皿中，并用过滤的培养基使样品体积达到2毫升。在进行快速重复率荧光计测量之前，使个体在20摄氏度的低光下适应15分钟。

单击"运行"以开始测量，每个样品重复测量三次以上。从生成的图中读取 F0 和 FM 值。为了校正基线荧光，使用0.2微米倒入大小的滤光片过滤培养基并测量荧光。

从可乐菌种类的 F0 和 FM 中减去基线样品的 F0，或在选项选项卡的设置中修改空白校正值。使用移液器在光学显微镜下分离具有可乐菌属的粘液体个体。

然后使用FLW洗涤s. mucronata。转移 s.

粘液成100毫升的FLW，并在NC2温度下的黑暗条件下保存90分钟以使其饥饿。将1.5毫升FLW倒入比色皿中。转移大约十秒。

将具有可乐菌种的粘液体放入比色皿中，并加入FLW以使样品达到2毫升。如文本手稿中所述，在N2C温度下使个体在低光下适应15分钟，并测量叶绿素a荧光。为了枚举附着的细胞的数量，在进行快速重复率荧光计测量后，用2%戊二醛固定样品。

然后在光学显微镜下在s. mucronata的几个焦点深度和位置拍照。对基线荧光或叶绿素a荧光没有显著影响。

mucronata高达每毫升5个人。然而，当粘液密度为每毫升7.5个体时，最大光化学效率和非光化学猝灭受到显着影响。

AF-6培养基中固定期和浮游期可乐菌属植物生理学的季节变化与非光化学猝灭的平均最大光化学效率相似。对于黑暗条件下可乐菌种附着阶段，光生理参数差异不显著，但3小时后锰的非光化学淬火高于钙，21小时光强低。在浮游阶段，3小时时锰中PS2吸收截面明显低于钙处理。

锰处理的有效光化学效率显著较高，但21小时非光化学淬灭低于对照。在光照增加的情况下，锰在3小时时PS2吸收截面趋于降低，在21小时的非光化学淬火中，同时在3小时时增加有效光化学效率。钙在增加光照下非光化学淬火略有改善。

然而，它在三小时时降低了有效光化学效率。最重要的是底物生物的影响。如果藻类附着在不同的物种或材料上，效果可能会有所不同。

除了该协议之外，碳固定或氧生产率的测量对于澄清钙生产率对实验操作的反应也很有用。该协议使我们能够阐明附着藻类的光合活性如何响应环境变化。