一种用于快速鉴定根系分泌物中根细菌化学引诱剂的改进趋化性测定

该论文报道了使用改进的趋化性测定法鉴定根系分泌物中根际细菌的化学引诱剂。趋化性植入物根驱动剂对于植物生长的根定植，促进根瘤菌和提供植物 - 微生物相互作用的有益派系具有重要意义。许多方法用于分析细菌趋化性。

例如，游泳板法，Cappilary类法，微流体滑片装置。游泳板法的实验周期较长。卡皮拉里式方法的实验误差被推出，微流体滑片装置的实验成本很高。

我们建立了一种简单的方法来快速鉴定化学引诱剂，该引血剂可以使用无菌载玻片诱导根际生长促进细菌的趋化运动，而无需复杂的步骤。该方法降低了板计数的误差，缩短了实验周期。在鉴定化学引诱物质方面，新方法可以节省2-3天，还可以降低实验材料的成本。

在生长室中随机分配水稻种子，培养一周，并加入无菌水两次。选择大小相似的水稻幼苗，在50毫升的Ms液体培养基中种植。在22摄氏度和化粪池条件下孵育48小时。

水稻根系分泌物将释放到MS培养基中。液相色谱质谱分析使用UHPLC系统进行。制备化学引诱剂水溶液，确保其无菌。

用0.22微米细菌过滤器过滤化学吸引剂溶液。化学引诱剂水溶液是从LCMS研究中获得的溶解在水中的单一物质。以柠檬酸溶液为例。

所有操作都必须由灯的侧面执行。以1厘米的间隔标记载玻片的中间位置。确保载玻片在火焰上灭菌多次。

在载玻片左侧的30微升化学吸引剂溶液中，确保细菌培养到对数阶段。在载玻片的右侧加入30微升细菌溶液。使用接种回路将引化疗剂水溶液连接到细菌溶液，并在干净的工作台上将其在室温下保持20分钟，在火焰上灭菌循环几次。

20 分钟后，用滤纸断开连接线。确保1.5毫升离心管无菌。收集载玻片左侧的化学引诱剂水溶液。

将溶液转移到1.5毫升无菌离心管中。将适当体积的细胞前染料加入离心管中。2分钟后，收集可打误的液体，用血液计数室进行细菌计数和显微镜观察。

使用以下等式确定吸引的活微生物的数量。较高的RCI表明对化学引诱剂有强烈的反应。结果表明，柠檬酸和咖啡酸的趋化性指数最高。

新的趋化性测定方法结果表明，细菌罐中柠檬酸、咖啡酸和半乳糖的浓度显著高于对照组和阳性对照组。柠檬酸写下了最强的趋化性。实验结果与传统方法的结果一致。

该视频协议可以作为澄清植物 - 微生物相互作用的宝贵资源。