В статье сообщалось об идентификации хемоаттрактанта ризобактерий в корневых экссудатах с использованием улучшенного анализа хемотаксиса. Хемотаксис имплантат корневой активации имеет важное значение для колонизации корней для роста растений, стимулирования бактерий ризобии и для обеспечения полезных фракций взаимодействия растений и микробов. Многие методы использовались для анализа бактериального хемотаксиса.
Например, метод плавательной пластины, метод Cappilary, микрофлюидное устройство slipchip. Цикл эксперимента методом плавательной пластины был длительным. Запущена экспериментальная погрешность метода Cappilary, микрофлюидное устройство slipchip дорого экспериментировать.
Мы создали простой метод для быстрой идентификации хемоаттрактанта, который может индуцировать хемотаксическое движение бактерий, способствующих росту ризосферы, с помощью стерильных стеклянных слайдов без сложных шагов. Метод уменьшил погрешность подсчета пластин и сократил цикл эксперимента. Что касается выявления химиоаттрактантного вещества, то новый метод может сэкономить 2-3 дня, а также снизить стоимость экспериментальных материалов.
Случайным образом распределите семена риса в камере выращивания культуры, возникающей в течение недели и дважды добавьте стерильную воду. Выберите рассаду риса аналогичного размера и посадите в жидкую среду объемом 50 миллилитров Ms. Инкубировать в течение 48 часов при 22 градусах Цельсия и септических условиях.
Экссудаты корня риса будут выпущены в ms medium. Масс-спектрометрический анализ жидкостной хроматографии проводился с использованием системы UHPLC. Приготовьте химиоаттрактант водным раствором, убедитесь, что он стерилен.
Отфильтруйте раствор химиоаттрактанта бактериальным фильтром 0,22 мкм. Водный раствор химиоаттрактанта представлял собой единственное вещество, полученное из исследований LCMS, растворенное в воде. В качестве примера был использован раствор кислоты Citrix.
Все действия необходимо выполнять сбоку от фонаря. Отметьте среднее положение стекла с интервалом в 1 сантиметр. Убедитесь, что стеклянная горка стерилизована несколько раз на пламени.
На 30 микролитрах раствора хемоаттрактанта слева от стеклянного слайда убедитесь, что бактерии культивировали до логарифмической стадии. Добавьте 30 микролитровый раствор бактерий справа от стеклянного слайда. Стерилизуйте инокуляционную петлю несколько раз на пламени с помощью инокуляционной петли, чтобы соединить водный раствор химиоаттрактанта с раствором бактерий и держать его при комнатной температуре в течение 20 минут на чистой скамье.
Через 20 минут отсоедините соединительную линию фильтровальной бумагой. Убедитесь, что 1,5-миллилитровая центрифужированная трубка стерильна. Соберите водный раствор химиоаттрактанта слева от стеклянной горки.
Переложите раствор в 1,5 миллилитра стерильной центрифугированной трубки. Добавьте соответствующий объем клеточного переднего красителя в центрифугированную трубку. Через 2 минуты соберите пропускаемые жидкости для подсчета бактерий и микроскопического наблюдения с помощью камеры для подсчета крови.
Определите количество привлеченных жизнеспособных микроорганизмов с помощью следующего уравнения. Более высокий RCI указывает на сильную реакцию на хемоаттрактантант. Результаты показали, что лимонная кислота и кофейная кислота имеют самые высокие показатели хемотаксиса.
Результаты нового метода анализа хемотаксиса показали, что бактериальная концентрация лимонной кислоты, кофейной кислоты и галактозы была значительно выше, чем у контрольной группы и положительного контроля. Лимонная кислота выписывает сильнейший хемотаксис. Результаты эксперимента согласовывались с результатами традиционных методов.
Этот видеопротокол может быть представлен как ценный ресурс для прояснения взаимодействий растений и микробов.
