Makale, gelişmiş bir kemotaksi tahlil kullanılarak kök eksüdalarında rizobakteri kemoattraktantının tanımlamasını bildirmektedir. Kemotaksi implant kök aktüatları, bitki büyümesi için kök kolonizasyonu, rizobiyel bakterileri teşvik etmek ve bitki-mikrop etkileşimlerinin yararlı fraksiyonlarını sağlamak için önemlidir. Bakteriyel kemotaksi analizi için birçok yöntem kullanılmıştır.
Örneğin, yüzme plakası yöntemi, Cappilary gibi yöntem, mikroakışkan slipchip cihazı. Yüzme plakası yönteminin deney döngüsü uzundu. Cappilary'nin deneysel hatası gibi yöntem başlatıldı, mikroakışkan slipchip cihazının deneyi pahalıdır.
Karmaşık adımlar olmadan steril cam kaydıraklar kullanarak rizosfer büyümesini teşvik eden bakterilerin kemotaktik hareketini teşvik edebilecek kemoattratantı hızlı bir şekilde tanımlamak için basit bir yöntem belirledik. Yöntem, plaka sayımının hatasını azalttı ve deney döngüsünü kısalttı. Kemoattratant bir maddenin tanımlanmasıyla ilgili olarak, yeni yöntem 2-3 gün tasarruf edebilir ve ayrıca deneysel malzemelerin maliyetini azaltabilir.
Pirinç tohumlarını yetişen oda kültüründe rastgele dağıtmak bir hafta boyunca ortaya çıkar ve iki kez steril su ekler. Benzer büyüklükteki pirinç fidelerini seçin ve 50 mililitre ms sıvı ortamda bitki. 22 santigrat derecede ve septik koşullarda 48 saat kuluçkaya yatır.
Pirinç kökü eksüdaları Ms ortamına salınacak. UHPLC sistemi kullanılarak Sıvı Kromatografi Kütle Spektrometresi Analizi yapıldı. Kemoattractant sulu çözelti hazırlayın steril olduğundan emin olun.
Kemoattratant çözeltisini 0,22 mikrometre bakteri filtresi ile filtreleyin. Kemoattraktant sulu çözelti, suda çözünen LCMS çalışmalarından elde edilen tek maddeydi. Örnek olarak sitroksik asit çözeltisi kullanılmıştır.
Tüm eylemler lambanın yanında yapılmalıdır. Cam kaydırağın orta konumunu 1 santimetre aralıklarla işaretleyin. Cam kaydırağın alev üzerinde birkaç kez sterilize olduğundan emin olun.
Cam kaydırağın solundaki 30 mikroliter kemoattraktant çözeltisinde bakterilerin logaritmik aşamaya kültürlenerek kültüre edildiğinden emin olun. Cam kaydırağın sağındaki 30 mikroliter bakteri çözeltisini ekleyin. Kemoattraktant sulu çözeltiyi bakteri çözeltisine bağlamak ve temiz bir tezgahta 20 dakika oda sıcaklığında tutmak için aşılama döngüsünü kullanarak alev üzerinde birkaç kez sterilize edin.
20 dakika sonra bağlantı hattını filtre kağıdıyla çıkarın. 1,5 mililitre santrifüjlü tüpün steril olduğundan emin olun. Cam slaydın solundaki kemoattractant sulu çözeltiyi toplayın.
Çözeltiyi 1,5 mililitre steril santrifüjlü tüpe aktarın. Hücre ön boyasının uygun hacmini santrifüjlü tüpe ekleyin. 2 dakika sonra, bakteri sayımı ve mikroskobik gözlem için yanlış sıvıları bir kan sayma odası ile toplayın.
Aşağıdaki denklemi kullanarak çekilen canlı mikroorganizmaların sayısını belirleyin. Daha yüksek bir RCI kemoattraktant için güçlü bir reaksiyon gösterir. Sonuçlar sitrik asit ve Caffeik asidin en yüksek kemotaksi indekslerine sahip olduğunu gösterdi.
Yeni kemotaksi tahlil yöntemi sonuçları, bakteriyel olarak Sitrik asit, Caffeik asit ve Galaktoz deneylerinin konsantrasyonunun kontrol grubundan ve pozitif kontrolden önemli ölçüde daha yüksek olduğunu yazdı. Sitrik asit en güçlü kemotaksiyi yazdı. Deneysel sonuçlar geleneksel yöntemlerin sonuçlarıyla uyumludu.
Bu video protokolü, bitki-mikrop etkileşimlerinin açıklığa kavuşması için değerli bir kaynak olarak sunulabilir.
