优化的骨采样方案，用于从考古遗迹中提取古代DNA

这些协议可作为骨粉生成的最佳实践指南，用于一系列骨骼元件的下游DNA提取。有一些已发表的古代DNA采样协议，用于牙本质和岩金字塔以外的位置。今天，我们将展示三种备选方案的详细采样方法。

这些方法也显示出用于降解法医遗骸的巨大潜力，但也作为开发非人类标本类似技术的基线。在配备紫外线的PCR罩或生物安全柜下的专用洁净室中进行所有采样。关闭气流并将无菌铝箔铺在工作台上，以捕捉任何散落的骨粉或碎片。

将一张秤纸放入无菌称量托盘中。使用手持夹子将去污的磨牙与牙釉质握住，根部朝下放在称重托盘上。为牙钻配备金刚石边圆形切割轮。

将钻头设置为中速设置后，以大约 20 度的角度轻轻接触钻头的边缘到根部。将样品向下刮入托盘中，从根部收集黄色的最外层材料。一旦牙本质的较轻材料变得可见，就停止收集。

将粉末转移到两毫升LoBind Safe-Lock管中，并使用精度至少为0.01毫克的封闭天平记录收集的粉末质量。将粉末从称重纸转移到两毫升的LoBind 安全锁定管中进行提取。将此管存放在 20 摄氏度。

确保恢复所有骨头碎片和尽可能多的粉末。在每次采样之间更换箔片，将用过的箔纸丢弃在可高压灭菌的生物危害袋中。对工作区域进行净化，并在每次移动到下一块骨头之前将无菌铝箔铺在台面上。

将一小张秤纸放入标准称量托盘中。使用牙钻去除并丢弃上椎弓皮质骨的最外层。然后，将椎骨固定在手夹中，棘突向外，上侧向下。

握住椎骨的同时，向上钻入V形凹口的中心，该凹口由棘突与薄片融合而成，具有低速和高扭矩。当阻力明显下降时停止钻孔。稍微改变钻孔位置，然后重复直到收集50至100毫克的骨粉。

将骨粉从秤纸转移到两毫升的LoBind管中进行提取，并将其储存在20摄氏度。在处理箔纸之前，确保回收所有骨头碎片和尽可能多的粉末。如前所述，对工作区域进行净化并准备样品采集。

将一小张称量纸放入标准称量托盘中。将距骨圆顶向上握住，内侧表面朝向收集器，在称量托盘上方。使用低轨钻头设置为低速和高扭矩的牙钻将皮质骨从距骨颈部刮到大约 1 毫米的深度。

改变钻孔位置并重复此操作，直到收集大约 50 至 100 毫克的骨粉。将该骨粉从秤纸转移到两毫升LoBind管中进行提取。将粉末无限期地储存在 20 摄氏度。

将剩余的骨头和多余的粉末储存在25摄氏度的干燥，温度受控的无菌环境中。将所有废物丢弃在高压灭菌器生物危害袋或容器中。对所有可重复使用的设备进行消毒或净化，并在每次采样之间将其暴露在紫外线下。

Pars petrosa产生的内源性DNA高于所调查的其他23个解剖采样位置。该协议中提出的七个额外的解剖采样位置产生了第二高的产量。替代位置始终如一地产生足以进行标准群体遗传学分析的DNA产量。

来自所有解剖采样位置的库中的重复率都很低，表明复杂性很高。牙齿以及胸椎显示出足够的分子恢复。骨取样最具挑战性的方面之一是钻孔过程，例如如何握住钻头、在哪里钻孔以及何时停止钻孔。