在 奥沃 鸡胚血管内注射

您好，我是扬州大学的Kai Jin。我将代表我们的研究小组介绍一种强大的鸡胚在发育研究中的工具。鸡胚是一种经典的发育模型，一直被用来研究发育和分化，事实上，实验室对鸡胚的无关措施是发育生物学的宝贵工具，如基因转染、转基因育种、性腺透壁制备等。

在我们的实验室中，我们已经建立了μ型注射方法，但对于许多研究人员来说，注射的细节不清楚，很难排队。因此，在本视频中，我们将展示在蛋黄鸡胚发育的早期阶段血管注射的细节。如果您对此感兴趣，请随时与我们联系。

在这里，我们展示了协议的细节。受精卵收集和制备。首先，与哺乳动物不同，鸡在单个卵巢中有数百万个卵泡，但只有少数这些卵泡成熟到足以排卵。

每个卵泡含有一个卵母细胞或生殖细胞。一旦卵泡成熟并释放其卵黄，它就会被纳入输卵管的漏斗中。当卵泡进入输卵管的颈腹部时，精液与母鸡体内的鸡蛋结合，母鸡体内的钙形成一个壳，包裹受精卵，形成体内软壳蛋。

钙壳逐渐变稠，直到产生卵子。收集受精卵，学术上称为胚胎卵，并将它们整齐地放在37.8摄氏度和60%湿度的孵化器中的架子上。胚胎在合适的条件下孵育。

经过两天的孵化，出现了称为原始心脏的小脉动红点。这个过程被称为樱桃打。在大约2.5天时，血管可见，心脏和身体部分已经形成。

针和质粒制备。我们使用玻璃毛细管作为针头。注射前准备外径为1毫米，内径为0.6毫米的玻璃毛细管。

外源性物质通常是质粒、包装慢病毒和原始生殖细胞或PGCs。在本视频中，我们使用台盼蓝来展示注射材料的痕迹。窗口。在暴露胚胎之前，我们需要对胚胎进行消毒，以防止细菌污染。

这是通过在卵子开口处用75%酒精棉球轻轻擦拭胚胎表面来完成的。消毒后，用镊子轻轻敲击蛋壳的钝端，并用镊子小心地在蛋壳表面夹一个0.5厘米×0.5厘米的孔，露出胚胎。卵内血管内注射。

在显微镜下观察视图，调整显微镜的焦点，首先定位胚胎，然后找到准备注射的鸡胚胎的血管。将带有外源物质的针头对准血管，注意针头与注射的血管平行。将针头轻轻插入血管，然后打开空气泵。

此时，异物进入动脉并随着心脏的跳动，通过动脉循环回胚胎，然后循环到静脉。有两种类型的血管注射。一种是头部注射，其中异物从胚胎头部的静脉注射并流回心脏。

另一种是背主动脉注射，其中异物随着心脏的跳动而循环到胚胎。随着胚胎心脏的跳动和血液的循环，我们可以清楚地看到，异物被动脉末端的毛细血管接收，进入静脉，然后从静脉返回胚胎，表明注射的异物有效地输送到胚胎的每个部分。注射后，从立体显微镜中取出卵子，用小剪刀剪下一块三厘米长的医用胶带，然后将胶带贴在开口处。

用剪刀轻轻刮拭胶带以挤出任何气泡，然后切开另一块胶带以将开口密封成十字架。密封开口后，将注射的胚胎小心地放回培养箱中。在这里，我们展示了注射后鸡胚的代表性图像。

第一张图像显示了慢病毒质粒注射的结果。立体荧光显微镜下的绿色荧光表明注射的质粒在胚胎中成功表达。这表明血管内将质粒注射到鸡胚中的可行性。

第二张图显示了PGC注射的结果。PGC被标记为RFP。在这张图片中，我们可以看到注射的PGC，它们是这里的红点，位于受体的性腺中。

这表明供体PGC能够有效地进入受体的性腺并定植。总之，该协议介绍了卵内血管内外源物质，质粒或PGCs注射到鸡胚中的过程。这里展示的方法易于遵循和学习，值得在许多领域应用。

这就是我想与大家分享的全部内容。我希望这种方法能够促进您作为设置鸡胚和发育生物学的强大研究工具的工作。感谢您观看此视频，祝您研究顺利。