我们的方案描述了在左心病引起的肺动脉高压大鼠模型中去除升主动脉瓣带的外科手术,这导致肺动脉高压的逆转。该技术为研究肺循环和右心室中生理反向重塑的机制提供了有价值的工具。它可以帮助制定治疗肺动脉高压的策略。
准备好手术器械后,将麻醉的大鼠置于绝育手术台上的仰卧位。然后,用胶带固定动物的腹部和四肢,并用聚维酮碘/碘伏溶液对动物皮肤进行消毒。注意初级手术主动脉带或AoB手术的疤痕和缝合线。
在通过捏脚趾确保足够的麻醉深度后,从初级AoB手术中取出缝合线。然后,用细剪刀做一个7至10毫米长的宫颈中线切口,进行气管切开术。在一对钝镊子的帮助下,解剖颈椎软组织以暴露舌骨下肌肉。
然后,通过分裂中线的肌肉,可视化气管。完成后,使用倾斜的Noyes弹簧剪刀在两个软骨环之间做一个两毫米的气管切口,将外径两毫米的气管插管插入气管。然后,用4-0丝缝合线固定套管。
将气管插管的另一端连接到机械呼吸机,同时保持最小的死区。保持围手术期肺通气,呼吸频率为每分钟90次呼吸,潮气量为每公斤体重8.5毫升。对于主动脉去条带,使用细剪刀在第二肋和第三肋骨之间做一个20毫米长的皮肤切口。
在较小的手术剪刀的帮助下,逐层铺开并切割肌肉,然后沿着第二肋和第三肋骨之间的肋间间隙做一个10毫米的侧切口。使用肋骨吊具扩大第二肋和第三肋骨之间的肋间空间,以创建手术窗口。在钝镊子的帮助下,将胸腺与心脏和导管动脉分开,以用夹子可视化主动脉。
在镊子的帮助下握住夹子,然后取出夹子周围的结缔组织以暴露主动脉。用针架打开夹子,然后从胸腔中取出夹子。在闭合胸部之前,打开肺肺不张,确保足够的肺募集,机械通气不会过度膨胀,潮气量为每公斤体重9.5毫升,持续10分钟,并恢复到每公斤体重8.5毫升的潮气量。
之后,使用4-0丝通过简单的中断缝合来闭合深部肌肉,并用简单的连续缝合连接上部肌肉。然后,用简单的连续缝合线关闭皮肤。断开气管插管与通气机的连接,同时观察大鼠的自主呼吸。
如果动物在断开连接后未能自主呼吸,请重新连接呼吸机并继续通气五分钟,然后再重复该过程。重新建立自主呼吸后,从气管中取出套管,并用海绵点清洁气管周围的液体。使用6-0 Prolene用简单的缝合线闭合气管,并使用4-0丝在简单的中断缝合中关闭舌下肌肉。
以简单的连续缝合线连接皮肤,然后在此过程中用聚维酮碘/碘伏溶液清洁和消毒肌肉和皮肤。完成外科手术后,将一只动物移动到带有补充氧气和红外灯的恢复笼中,并将氧气面罩放在靠近大鼠鼻子的地方。在这项研究中,AoB动物中上链主动脉夹的位置以及它在去条带或Deb手术后的缺失被可视化。
此外,在Deb手术后,通过AoB动物夹子之前和之后的夹子和相应的主动脉段的脉冲波多普勒成像来评估主动脉血流量。结果显示血流梯度明显衰减,与功能性脱条一致。在第五周,Deb大鼠以与假动物相当的水平表达了脑利钠肽或BNP,表明左心室或左心室的逆转,主动脉剥离失败。
经胸超声心动图对左心室功能评估显示,与AoB大鼠相比,Deb动物的左心室射血分数和左心室体积增加。与AoB动物相比,在AoB后第三周进行的去条带手术导致左心室收缩压和左心室肥厚显着降低。与第三周和第五周的AoB大鼠相比,Deb动物也显示出右心室收缩压和右心室肥厚的显着降低,表明左心病引起的肺动脉高压的成功逆转。
该手术中最关键的步骤是去除夹子并在主动脉剥离后招募肺。如果正确执行这些步骤,可以提高动物的存活率。