植物细胞的生长由其细胞壁的机械性能控制。因此，了解植物不同器官和组织中的这些特性非常重要。这里介绍的方法允许对幼苗内部组织中的非固定和非脱水细胞壁进行生物力学表征。
首先准备用于振动切片的溶液和样品。在培养皿底部倒入四毫米的融化的3%琼脂糖层，使其稍微冷却以防止对样品的热损伤。将大约五毫米长的三到四块植物器官水平放在琼脂糖上。
大约 30 到 60 秒后，第一琼脂糖层顶部将出现一层薄的半固体薄膜。然后，小心地在上面倒第二层。琼脂糖完全凝固后，切出含有标本的块。
将块塑造成六边形截断的金字塔，以确保其在进一步切片过程中的稳定性。在使用颤音切片机开始样品切片之前，用氰基丙烯酸酯粘合剂将块粘在颤音机载物台上。将载物台放在颤音机中，使其中一个金字塔角朝向颤音机的刀片，然后将水倒入颤音机浴中。
设置切片参数，如切片厚度、刀片速度和振动频率并切割样品。使用细刷将水浴中的部分移动到载玻片上，并在该部分上滴一滴水以防止其变干。在光学显微镜下检查切片质量后，选择细胞壁垂直于切片平面的适当切片。
然后，通过使用移液管将一层一毫升1%熔融琼脂糖倒在培养皿盖的底部来固定原子力显微镜测量的切片。琼脂糖凝固后，通过将滤纸带到其边缘来去除切片中多余的水。使用刷子小心地将切片从载玻片转移到培养皿盖的中心。
然后使用20微升移液管小心地在该切片周围添加1%琼脂糖，并将用于原子力显微镜的水或其他溶液倒入带有固定切片的培养皿盖中。使用光学显微镜在原子力显微镜悬臂下引导样品。单击"接近"按钮，然后单击"着陆"按钮，以接触模式接近样品，设定点为一纳安。
单击"扫描"按钮，然后单击"区域"按钮。选择要扫描的 50 微米 x 50 微米的区域大小。单击"移动探头"按钮，通过将扫描仪移到扫描器上方并根据扫描仪突出的程度找到最高点来检查整个扫描区域。
打开"方法"选项卡。然后单击"删除"按钮以从样品中收回。使用最高点作为目标，单击"着陆"按钮再次接近样本。
然后通过单击"移动探头"按钮并将扫描仪移到表面上再次检查表面。将扫描速率设置为 0.5 赫兹，并将扫描大小设置为 50 微米 x 50 微米，将扫描点设置为 64 x 64。单击"运行"按钮并扫描以检查样品表面以及琼脂糖是否可能污染。
单击"开"按钮后，在程序主窗口的下拉菜单中选择HDPlus模式，并在主程序窗口中将设定点设置为0.1纳安。在HD窗口的主选项卡中，设置适合所研究样品的扫描参数。然后打开HD窗口中的噪声选项卡并输入悬臂的共振频率。
打开高清窗口的量化选项卡，输入 IOS、悬臂刚度、尖端半径和角度。选择接触模型，该模型将用于根据尖端几何形状进行计算。之后，打开 Scan 扫描 高清窗口的选项卡并选择信号以及记录信号的方向。
勾选"力体积"框以获取所有力曲线的记录，然后单击主程序窗口顶部的"关闭"按钮以打开反馈循环 单击HD主窗口中的相位核心按钮以校正光学系统的灵敏度。高清主窗口的"与时间"选项卡实时显示DFL信号与时间的功能。选择此函数中将用于基线水平确定的部分，并拟合接触模型以进行进一步计算。
现在，在程序的主窗口中将扫描点值设置为 256 x 256。然后，将扫描速率设置为 0.2 赫兹，然后单击"运行"按钮扫描样品。扫描停止后，单击主窗口顶部的"打开"按钮以关闭反馈循环。
在下拉菜单中选择接触模式，打开"方法"选项卡，然后单击"删除"按钮以从样品中收回。单击"数据"按钮打开分析软件并保存输出。在分析软件中打开保存的文件。
选择高清力度体积帧。按住 Control 键并选择在相同扫描方向上获得的一个视觉帧。单击"加载外部映射"按钮以查看细胞壁的位置。
在主选项卡中检查 InvOptSens 和悬臂刚度值。打开附加选项卡并检查吸头参数和触点模型。单击视觉框架上细胞壁上的各个点，并仅选择模型很好地描述的曲线。
模量图中的白色区域对应于由于扫描仪在Z方向上达到极限而导致的杨氏模量的错误高估。此图像不方便用作进一步选择令人满意的力曲线的外部地图。但是，右侧显示的DFL信号图更适合此处。
不同的仪器可能将DFL信号称为偏转或误差信号。扫描仪在试图到达样品底部时完全伸展可能会导致错误的测量，甚至导致扫描中断。琼脂糖的存在可以在接触模式下获得第一次扫描时检查，因为在这种扫描中可以看到细胞壁和一些细胞底部。
然而，在不准确固定的情况下，表面可能会被琼脂糖覆盖，这掩盖了样品形貌。在同一细胞壁的不同点记录的四条不同的力曲线中，记录在0.1处的曲线没有基线，这意味着悬臂尖端与细胞壁没有分离。记录在0.3处的曲线显示了接近部分的肩部，表明细胞壁弯曲。
第二点和第四点显示了模量值相似的令人满意的力曲线。样品制备和检查需要练习，但可以掌握。该协议的一个关键部分是过滤结果曲线。
不要依赖模数，这是自动计算的。同样的技术可用于测量粘附力或能量耗散。它对于描述某些材料的粘胶或粘弹性行为也很重要。
