细胞细胞成像的微管细胞和微机械操作的 阿拉比多普西斯拍摄 阿皮克·梅里斯特姆

该协议，它帮助我们了解微管细胞骨骼行为是如何发生在植物。同时，它还帮助我们了解这些影响细胞和器官形状的结构成分如何响应机械力的变化。虽然，这种方法要求很少复杂，它提供了强大的，定量的读取后，不同基因型和条件之间的机械响应差异。

首先种植阿拉伯多普西斯种子，表达微管结合域与绿色荧光蛋白融合在土壤中，在20至6摄氏度的长日条件下一个星期。发芽后，将幼苗转移到具有足够生长空间的新盆中，使植物生长强劲，并在短日条件下将植物温度在20至16摄氏度。三到五周后，将植物在相同的温度下转移到长日条件下，直到植物螺栓，使花序长到两到五厘米长。

对于拍摄阿皮克·梅里斯特姆解剖，放花序，并使用锋利的钳子剥落花底的花，直到很难看到用肉眼去除旧花蕾的花瓣。使用钳子在解剖盘中在农产品中创建一个缝隙，并在厚厚的奥古尔中种植花序底座。将盘子放在解剖显微镜下。

从最古老的花蕾开始，用钳子推掉植物的花蕾。当第六至第七阶段的花被移走时，通常会露出来。并使用钳子推下每个花蕾， 直到拍摄阿普蒂克梅里斯特姆是可见的。

一旦射光暴露，让新鲜解剖的样品在生长介质中，在乙醇消毒的矩形塑料铰链培养盒与拍摄阿普利斯特姆刚刚暴露在介质表面之上。在培养盒边缘加入几滴无菌去ion化水，并合上盖子以保持包装盒内的湿度。用微孔胶带包裹包装盒子，并在 22 摄氏度的长时间或连续的日条件下放置生长盒 12 至 24 小时。

当植物从解剖程序中恢复后，用无菌去维化水覆盖样品，并在解剖显微镜下检查气泡。将培养盒转移到直立共体显微镜阶段，然后选择 40 或 60 倍浸水镜头。将目标下到水中，并检查物体前透镜上的气泡。

要去除气泡，请降低舞台，用光学组织轻轻擦拭镜头。然后使用巴斯德移液器将少量水添加到目标的前镜头中，然后再将镜头重新浸入水中。接下来，使用共合显微镜的 GFP 过滤器和光显光模块调整 XY 控制器以定位样品。

调整眼部的位置，将射射镜直接放在光源下，沿 Z 轴对焦，直到顶点定位。使用能够刺激的 GFP 的激光照亮样品，并调整显微镜的光学变焦，使整个拍摄阿皮克里斯特姆和舞台一花卉原始在视野中。然后，调整激光输出的功率和增益设置，以获得最佳的噪声比。

在允许样品沉淀两到五分钟后，以 0.25 至 0.5 微米 Z 切片间隔获取样品的共合 Z 堆栈，增加约 0.3 微米像素大小分辨率。在采集结束时，立即取出水，将培养盒调回生长室。对于微机械拍摄Apical Meristem扰动，获得皮质微管组织的预消融图像堆栈，正如刚才展示的，并脱雾水从文化盒成文化菜。

在解剖显微镜下转移射枪，用干净的0.4乘20毫米注射器针慢慢接近射枪。用针尖短暂接触射针圆顶的外围，确认消融已完成。用无菌的去ion化水重新填充培养皿。

然后每毫升碘化丙胺加入10微克，并立即获得图像堆栈，如每两小时演示6小时，返回培养皿到每个时间点之间的孵育。对于数据分析，使用适当的图像分析软件程序生成图像堆栈的表面投影，并使用斐济的 Fibril 工具宏执行皮质微管各向异性的提取。在这里，从微管结合域GP线获得的典型投影图像，在圆顶的中心包含杂乱无章的皮质微管的细胞，在外围的细胞，具有圆周分布和边界域细胞包含皮质微管平行于细胞的长轴对齐。

延时成像显示皮质微管对齐方式在消融后六小时内从高度无序的阵列向更有条理的阵列转变。张子可以叠加在皮质微管图像上，提取的信息可以通过绘制一段时间的均等各向异性来表示。在调整激光输出功率和增益设置时，应确保对灯丝进行清晰观察，并尽量避免过度暴露，因为过度饱和信号可能会使拉伸方向在以后的分析中偏向。

原子力显微镜也可以进行，以评估机械力的变化实际上如何影响细胞壁的物理状态。