通过电容式免疫探 针在猪 心中对神经肽动力学进行时间分辨体内测量

这是首次开发出用于体内肽递质水平的时间分辨测量的方法。我们可以通过近乎实时的分析来测量单个受试者和离散位置的肽递质水平。首先，切割25厘米长的全氟烷氧基涂层铂丝。

然后，使用手术刀，从一端剥离约五毫米的全氟烷氧基涂层，小心不要切入铂丝。现在，将剥离的铂线末端插入镀金的一毫米公连接器引脚中。然后，使用针鼻钳，将连接器针齿压接在铂线剥离端周围，并将铂线焊接到镀金连接器引脚上。

接下来，将50毫克盐酸多巴胺加入50毫升10毫摩尔PBS中，pH 6，搅拌混合，制备多巴胺溶液。完全溶解多巴胺后，将铂丝的尖端放入含有新鲜制作的多巴胺补充PBS的容器中。将氯化银盘电极连接到头台的接地通道。

然后，将氯化银圆盘放入含有多巴胺补充PBS和铂丝的容器中。在继续之前，将导线分流器连接到头级的参考通道。打开交互式数据采集软件，通过将起始电位设置为负0.6伏，结束电位设置为0.65伏，扫描速率设置为每秒0.04伏，沉积持续时间设置为420秒，设置锯齿电沉积命令电位协议。

完成聚多巴胺沉积后，从容器中取出氯化银研磨颗粒和铂丝的尖端。将电线尖端放入含有pH值为7.4的PBS的微管中两到五分钟，并确保电线尖端不会接触微管的侧面或底部。然后，通过将目标抗体与pH 7.4的PBS以1：20的比例在适当尺寸的容器中组合来制备抗体溶液。

接下来，将沉积在铂电极的聚多巴胺尖端在室温下在抗体溶液中两小时，确保铂丝尖端悬浮在溶液中并且不停留在微管的内表面上。将电容式免疫探针的功能尖端放入流动室中，注意不要以任何方式干扰电极尖端，因为这样做可能会损坏探头的感觉尖端。在第一次实验测试之前，执行TBS标准运行以调节电容式免疫探针，对于电压方案，将正阶跃电位设置为110毫伏，将负步进电位设置为负5毫伏，步长持续时间为20毫秒，采集持续时间设置为600秒。

接下来，使用相同的TBS创建感兴趣的肽溶液以维持超级富酸盐的组成。设置一个歧管系统，其中超级富集液可以在TBS和肽补充剂TBS之间切换。使用TBS标准参数，通过将采集持续时间设置为360秒来设置肽传感数据采集协议。

在聚多巴胺沉积之前，将铂丝电极的暴露尖端穿过22号皮下注射针，在针尖外留下约两毫米。使用镊子轻轻弯曲铂丝电极的尖端，形成悬挂在皮下注射针末端的倒钩。轻轻地将针头从带刺的尖端中取出，留下足够的铁丝以放置在容器中，而不会使针头接触液体，并如前所述继续进行多巴胺沉积。

现在，用PBS冲洗带刺的探针尖端并将其放入抗体溶液中。然后，轻轻地从PBS上取下功能化的尖端。将皮下注射针移至倒钩电容式免疫探针，轻轻地将其植入感兴趣的区域，然后将金连接器针插入头台。

植入后，取出皮下注射针头，将电极留在原位。命令电位中的正阶跃测量钳位探头电压所需的注入电流，并允许测量容性电流。负指令电位步骤通过静电排斥从抗体中清除结合的肽。

阶跃函数命令波形描述了肽的时间分辨迭代检测和定量。底部迹线表示TBS中探头超融合下的命令电位和产生的电流。平衡的电容式免疫探针在六分钟内显示出较小的初始衰变和稳定的基线。

神经肽Y流入流动室使电容电流超过基线。用神经肽Y抗体功能化探针测量的电容性免疫探针电流显示对低吡科莫神经肽Y敏感的浓度依赖性信号对于校准，测量所有测试浓度的标准曲线。当与负对照电容电流共绘制时，双侧星状神经节的刺激显示神经肽Y升高。

在星状刺激下测量的去甲肾上腺素释放显示与神经肽Y同步释放，与诱发的交感神经反应一致。这些技术的发展可以提供心脏活动关键调节剂的术中读数，从而提供潜在的快速治疗或介入指导。这里介绍的技术是专门针对心血管部署的，但是，该技术本身适用于其他生理环境，例如尿液，骨骼肌，肾脏，脂肪组织等。