Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood

Neutrophils play an essential role in protection against infections and their numbers in the blood are frequently measured in the clinic. Higher ...

Massachusetts General Hospital

Harvard Medical School

Shriners Burns Hospital

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&#x6355;&#x83B7;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x5F81;&#x5FAE;&#x578B;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;

Given the clinical and diagnostic importance of blood analysis, there is considerable interest in developing novel miniature devices for rapid characterization of blood constituents. The present paper describes development of a miniature cytometry platform aimed at analysis of T-lymphocytes from peripheral human blood. Microarrays of T-cell-specific antibodies (Abs), including anti-CD3, -CD4, -CD8 and mouse IgG (negative control) were robotically printed onto glass slides coated with a non-fouling poly(ethylene glycol) (PEG) hydrogel. The glass substrates containing Ab arrays were incubated with 100 microL of red blood cell (RBC)-depleted whole human blood for 15 min and then exposed to a controlled shear of approximately 2 dyncm(-2) for additional 10 min. This process led to the removal of non-specific leukocytes and "development" of patterns of T-cells captured on the Ab spots. The immunofluorescent staining of the surface-bound cells revealed the presence of purified CD4(+) and CD8(+) T-cells (purity >94%) on their respective Ab spots. Importantly, the proportions of CD4(+) and CD8(+) T-cells captured on the Ab spots correlated closely (R(2) -0.9) with flow cytometry analysis of T-cell subsets in blood. Overall, this cytometry platform allowed to rapidly (under 30 min) capture pure T-cell subsets from minimally processed human blood. Significantly, our device provided quantitative information about subset abundance solely based on the location of cells within the microarray. This cytometry platform is envisioned as a miniature immunology tool for determination of T-cell phenotype and will have immediate applications in HIV diagnostics and research.

A miniature cytometry platform for capture and characterization of T-lymphocytes from human blood.

Compte tenu de l&#x26;#39;importance clinique et diagnostique de l&#x26;#39;analyse du sang, il ya un int&#xE9;r&#xEA;t consid&#xE9;rable dans le d&#xE9;veloppement de nouveaux dispositifs miniatures pour la caract&#xE9;risation rapide de constituants du sang. Le pr&#xE9;sent document d&#xE9;crit le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;une plate-forme cytom&#xE9;trie en miniature destin&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;analyse des lymphocytes T du sang p&#xE9;riph&#xE9;rique humain. Micro&#xE9;chantillons de cellules T sp&#xE9;cifiques anticorps (Ac), y compris les anti-CD3,-CD4, CD8 et-IgG de souris (contr&#xF4;le n&#xE9;gatif) ont &#xE9;t&#xE9; robot imprim&#xE9; sur des lames de verre rev&#xEA;tu d&#x26;#39;un poly non-fouling (&#xE9;thyl&#xE8;ne glycol) (PEG) hydrogel . Les substrats de verre contenant des tableaux Ab ont &#xE9;t&#xE9; incub&#xE9;es avec 100 microL de globules rouges (RBC) appauvri en sang humain total pendant 15 min, puis expos&#xE9; &#xE0; un cisaillement contr&#xF4;l&#xE9; d&#x26;#39;environ 2 dyncm (-2) pour 10 min de plus. Ce processus a abouti &#xE0; la suppression de la non-sp&#xE9;cifiques des leucocytes et le &#xAB;d&#xE9;veloppement&#xBB; des mod&#xE8;les de T-cellules captur&#xE9;es sur les taches Ab. La coloration par immunofluorescence des cellules li&#xE9; &#xE0; la surface ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; la pr&#xE9;sence de CD4 purifi&#xE9;s (+) et CD8 (+) des cellules T (puret&#xE9;&#x26;gt; 94%) sur leurs taches respectives Ab. Surtout, les proportions de CD4 (+) et CD8 (+) T-cellules captur&#xE9;es sur le Ab rep&#xE8;re en &#xE9;troite corr&#xE9;lation (R (2) -0,9) avec l&#x26;#39;analyse par cytom&#xE9;trie en flux de sous-ensembles de cellules T dans le sang. Dans l&#x26;#39;ensemble, cette plate-forme cytom&#xE9;trie a permis de rapidement (moins de 30 min) la capture pure sous-ensembles des cellules T du sang humain minimalement transform&#xE9;s. De mani&#xE8;re significative, notre dispositif a fourni des informations quantitatives sur l&#x26;#39;abondance sous-ensemble uniquement bas&#xE9;e sur la localisation des cellules au sein de la puce. Cette plate-forme cytom&#xE9;trie est con&#xE7;u comme un outil miniature immunologie pour la d&#xE9;termination des cellules T du ph&#xE9;notype et auront des applications imm&#xE9;diates dans le diagnostic du VIH et de la recherche.

Une plate-forme cytom&#xE9;trie miniature pour la capture et la caract&#xE9;risation des lymphocytes T du sang humain

Angesichts der klinische und diagnostische Bedeutung der Blutanalyse, gibt es gro&szlig;es Interesse an der Entwicklung neuartiger Kleinstger&auml;ten f&uuml;r schnelle Charakterisierung von Blut Bestandteile. Das vorliegende Dokument beschreibt die Entwicklung einer Miniatur Cytometry Plattform zur Analyse von T-Lymphozyten aus peripheren menschlichem Blut. Microarrays T-Zelle-spezifische Antik&ouml;rper (Abs), einschlie&szlig;lich Anti-CD3-CD4 - CD8 und Maus IgG (Negativkontrolle) wurden auf Objekttr&auml;ger beschichtet mit einer nicht-fouling Poly(ethylene glycol) (PEG)-Hydrogel robotically gedruckt. Mit Ab-Arrays mit Glassubstrate wurden mit 100 MicroL der roten Blutzelle (RBC) inkubiert-ersch&ouml;pft menschliches Vollblut f&uuml;r 15 min und dann eine kontrollierte Verzerrung von ca. 2 dyncm(-2) f&uuml;r zus&auml;tzliche 10 Minuten ausgesetzt. Dieser Prozess f&uuml;hrte zu die Entfernung von unspezifischen Leukozyten und &quot;Entwicklung&quot; von Mustern von T-Zellen auf die Ab-Spots aufgenommen wurden. Die Immunfluoreszenz-F&auml;rbung der Oberfl&auml;che gebundene Zellen ergab das Vorhandensein von gereinigten CD4(+) und CD8(+) T-Zellen (Reinheit &gt; 94 %) auf ihre jeweiligen Ab-Spots. Wichtig ist, die Proportionen der CD4(+) und CD8(+) T-Zellen auf die Ab Flecken eng korreliert (Optionsbildschirm 0,9) mit Flow Cytometry Analyse der Untergruppen der T-Zellen im Blut erfasst. Insgesamt erfassen diese Cytometry-Plattform erlaubt, schnell (unter 30 min) reine T-Zell-Teilmengen aus minimal verarbeiteten Menschenblut. Unser Ger&auml;t gesorgt deutlich, quantitative Informationen &uuml;ber Teilmenge F&uuml;lle ausschlie&szlig;lich basierend auf dem Speicherort der Zellen in der Microarray. Diese Plattform Cytometry ist wie ein Miniatur-Immunologie-Tool zur Bestimmung des T-Zell-Ph&auml;notyp vorgestellt und haben unmittelbare Anwendungen in der HIV-Diagnostik und Forschung.

Eine Miniatur-Cytometry-Plattform f&uuml;r die Erfassung und Charakterisierung von T-Lymphozyten aus menschlichem Blut.

Data l&#39;importanza clinica e diagnostica delle analisi del sangue, c&#39;&egrave; notevole interesse nello sviluppo di dispositivi di romanzo in miniatura per la rapida caratterizzazione dei costituenti del sangue. Il presente documento descrive lo sviluppo di una piattaforma di citometria in miniatura mirato all&#39;analisi dei T-linfociti da sangue periferico umano. Microarrays di anticorpi specifici per T-cell (Abs), tra cui anti-CD3-CD4-CD8 e mouse IgG (controllo negativo) erano robotizzato stampate su vetrini ricoperti con un idrogel poly(ethylene glycol) (PEG) non-incrostazione. I substrati di vetro contenenti matrici Ab sono stati incubati con 100 microL di globuli rossi (RBC)-impoverito sangue umano intero per 15 min e poi esposta per un taglio controllato di circa 2 dyncm(-2) per altri 10 min. Questo processo ha portato alla rimozione dei leucociti non specifici e &quot;sviluppo&quot; dei modelli di T-cellule catturato le macchie Ab. L&#39;immunofluorescenza colorazione delle cellule associato a superficie ha rivelato la presenza di cellule T-cellule e CD4(+) purificato (purezza &amp;gt; 94%) sui loro rispettivi punti di Ab. Soprattutto, le proporzioni di CD4(+) e di cellule T-cellule catturate l&#39;Ab macchie strettamente correlato (R(2) -0,9) con analisi di citometria a flusso dei sottoinsiemi della T-cellula nel sangue. Nel complesso, questa piattaforma di citometria consentita rapidamente (sotto 30 min) catturare puro subset di cellule T da sangue umano minimamente trasformati. Significativamente, il nostro dispositivo fornito informazioni quantitative sull&#39;abbondanza di sottoinsieme basata esclusivamente sulla posizione di cellule all&#39;interno del microarray. Questa piattaforma cytometry &egrave; immaginata come uno strumento di immunologia in miniatura per la determinazione del fenotipo delle cellule T e avr&agrave; applicazioni immediate in HIV diagnostica e ricerca.

Una piattaforma di citometria in miniatura per la cattura e la caratterizzazione dei T-linfociti da sangue umano.

&#x8840;&#x6DB2;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8A3A;&#x65AD;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x8840;&#x6DB2;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5C0F;&#x578B;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x95A2;&#x5FC3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x8AD6;&#x6587;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;&#x30D2;&#x30C8;&#x8840;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;T-&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x30DF;&#x30CB;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A2;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;CD3&#x3092;&#x542B;&#x3080;T&#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#xFF08;ABS&#xFF09;&#x3001;&#x6297;CD4&#x3001;&#x6297;CD8&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;IgG&#xFF08;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF09;&#x3092;&#x30ED;&#x30DC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x975E;&#x6C5A;&#x67D3;&#x30DD;&#x30EA;&#xFF08;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF09;&#xFF08;PEG&#xFF09;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x3067;&#x88AB;&#x8986;&#x3057;&#x305F;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x4E0A;&#x306B;&#x5370;&#x5237;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x57FA;&#x677F;&#x306F;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;100 microL&#xFF08;RBC&#xFF09;&#x304C;&#x67AF;&#x6E07;&#x3057;&#x3001;15&#x5206;&#x9593;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x5168;&#x8840;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3055;&#x3089;&#x306B;10&#x5206;&#x9593;&#x3001;&#x7D04;2 dyncm&#xFF08;-2&#xFF09;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x305B;&#x3093;&#x65AD;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6297;&#x4F53;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x6355;&#x6349;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E; &#x26;quot;&#x958B;&#x767A;&#x26;quot;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x306F;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CD4&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;CD8&#xFF08;+&#xFF09;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;T&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x7D14;&#x5EA6;&#x26;gt; 94&#xFF05;&#xFF09;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;CD4&#xFF08;+&#xFF09;&#x3068;CD8&#xFF08;+&#xFF09;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306F;&#x3001;AB&#x3067;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#xFF08;R&#xFF08;2&#xFF09;-0.9&#xFF09;&#x306F;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x30B9;&#x200B;&#x200B;&#x30DD;&#x200B;&#x200B;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#xFF08;30&#x5206;&#x672A;&#x6E80;&#xFF09;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x30D2;&#x30C8;&#x8840;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;T&#x7D30;&#x80DE;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x5185;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x91CF;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DF;&#x30CB;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A2;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x60F3;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;HIV&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3084;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x8840;&#x6DB2;&#x304B;&#x3089;T-&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3068;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DF;&#x30CB;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A2;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;

&#xD608;&#xC561; &#xC131;&#xBD84;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC18C;&#xD615; &#xC7A5;&#xCE58; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4; &#xD608;&#xC561; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1;&#xACFC; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC885;&#xC774; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; T &#xB9BC;&#xD504; &#xD1A8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xACA8;&#xB0E5; &#xD55C; &#xC18C;&#xD615; cytometry &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. T &#xC138;&#xD3EC; &#xAD00;&#xB828; &#xD56D; &#xCCB4; (Abs) &#xB4F1; &#xC548;&#xD2F0;-CD3 Microarrays-CD4,-CD8 &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; IgG (&#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4;) robotically &#xD30C;&#xC6B8;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; poly(ethylene glycol) (&#xB098;&#xBB34; &#xBABB;) hydrogel &#xCF54;&#xD305; &#xC720;&#xB9AC; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC778;&#xC1C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; (RBC)&#xC758; 100 Microl&#xC640; Ab &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xB9AC; &#xAE30;&#xD310; incubated &#xD588;&#xB2E4;-15 &#xBD84; &#xB3D9;&#xC548; &#xC804;&#xCCB4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD53C;&#xB97C; &#xC18C;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC74C; &#xCD94;&#xAC00; 10 &#xBD84; &#xC57D; 2 dyncm(-2)&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC804;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xC544;&#xB2CC; &#xD2B9;&#xC815; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xC81C;&#xAC70; &#xBC0F; &quot;&#xAC1C;&#xBC1C;&quot; &#xD328;&#xD134;&#xC758; T-&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; Ab &#xBA85;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEA1;&#xCC98;&#xD55C;. &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; CD4(+)&#xC640; CD8(+) T-&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD600; &#xD45C;&#xBA74; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC140;&#xC758; immunofluorescent &#xC5BC;&#xB8E9; (&#xC21C;&#xB3C4; &amp;gt; 94%)&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC01;&#xAC01; Ab &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, CD4(+) &#xBC0F; CD8(+) T-&#xC138;&#xD3EC; &#xCEA1;&#xCC98;&#xD55C; Ab &#xBC18;&#xC810;&#xC5D0; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0C1;&#xAD00; (R(2)-0.9) &#xD750;&#xB984; cytometry &#xBD84;&#xC11D; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;,&#xC774; cytometry &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xD5C8;&#xC6A9; (30 &#xBD84;&#xC774; &#xD558;) &#xC21C;&#xC218; T-&#xC140; &#xD558;&#xC704; &#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEA1;&#xCC98;. &#xD06C;&#xAC8C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; microarray &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569; &#xD48D;&#xBD80;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xC778; &#xC815;&#xBCF4; &#xC81C;&#xACF5;. Cytometry &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC774; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC758; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xCC98; &#xBA74;&#xC5ED;&#xD559; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC0C1; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC989;&#xAC01;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCEA1;&#xCC98; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; T-&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xCC98; cytometry &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;.

Dada la importancia cl&#xED;nica y diagn&#xF3;stica de los an&#xE1;lisis de sangre, existe un inter&#xE9;s considerable en el desarrollo de nuevos dispositivos en miniatura para la caracterizaci&#xF3;n r&#xE1;pida de los componentes sangu&#xED;neos. El presente trabajo describe el desarrollo de una plataforma de citometr&#xED;a de miniatura dirigido al an&#xE1;lisis de los linfocitos T de sangre perif&#xE9;rica humana. Microarrays de c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas de anticuerpos (ABS), incluyendo anti-CD3,-CD4, CD8 y-rat&#xF3;n IgG (control negativo) se imprimieron rob&#xF3;ticamente desliza sobre vidrio recubierto con un poli no ensuciamiento (etileno glicol) (PEG) de hidrogel . Los sustratos de vidrio que contienen matrices Ab se incubaron con 100 microlitros de gl&#xF3;bulos rojos (RBC)-empobrecido sangre entera humana durante 15 minutos y luego se expusieron a un cizallamiento controlada de aproximadamente 2 dyncm (-2) para 10 min adicionales. Este proceso condujo a la eliminaci&#xF3;n de materias no espec&#xED;ficas de los leucocitos y el &#x26;quot;desarrollo&#x26;quot; de los patrones de las c&#xE9;lulas T capturado en los puntos Ab. La tinci&#xF3;n inmunofluorescente de las c&#xE9;lulas superficie determinada revel&#xF3; la presencia de CD4 purificado (+) y CD8 (+) de las c&#xE9;lulas T (pureza&#x26;gt; 94%) en sus puntos respectivos Ab. Es importante destacar que las proporciones de CD4 (+) y CD8 (+) las c&#xE9;lulas T que participaron en la Ab descubre una estrecha correlaci&#xF3;n (R (2) -0,9) con el an&#xE1;lisis de citometr&#xED;a de flujo de subconjuntos de c&#xE9;lulas T en sangre. En general, esta plataforma citometr&#xED;a permite r&#xE1;pidamente (en 30 min) capturar puros subconjuntos de c&#xE9;lulas T de sangre m&#xED;nimamente humano procesado. Cabe destacar que nuestro dispositivo proporcionado informaci&#xF3;n cuantitativa acerca de la abundancia subgrupo basado &#xFA;nicamente en la localizaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas dentro de los microarrays. Esta plataforma de citometr&#xED;a se concibe como un instrumento de la inmunolog&#xED;a en miniatura para la determinaci&#xF3;n del fenotipo de c&#xE9;lulas T y tendr&#xE1; aplicaciones inmediatas en el diagn&#xF3;stico del VIH y la investigaci&#xF3;n.

Una plataforma de Citometr&#xED;a en miniatura para la captura y caracterizaci&#xF3;n de los linfocitos T de la sangre humana

&#x82AF;&#x7247;&#x683C;&#x5F0F;&#x662F;&#x88AB;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7528;&#x4E8E;&#x7EC4;&#x5408;&#x7B5B;&#x9009;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6216;&#x751F;&#x7269;&#x6750;&#x6599;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x82AF;&#x7247;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x5B9E;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x589E;&#x5F3A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7EB3;&#x5165; biosensing &#x5143;&#x7D20;&#x65C1;&#x8FB9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80F6;&#x914D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x672C;&#x5730;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x5408;&#x5E76;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x548C;&#x4F20;&#x611F;&#x5143;&#x4EF6;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x82AF;&#x7247;&#x4E2D;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x7684;&#x8868;&#x73B0;&#x662F;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x8702;&#x7A9D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x673A;&#x5668;&#x4EBA; microarraying &#x7528;&#x6765;&#x6253;&#x5370;&#x6570;&#x7EC4;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x809D;&#x810F;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6297;&#x4F53; (Ab) &#x70B9;&#x65C1;&#x8FB9; 300-&#x5988;&#x5988;&#x53E3;&#x5F84;&#x80F6;&#x539F; (I) &#x70B9;&#xFF1A; &#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;-antitrypsin (1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176; AT)&#x3002;Poly(ethylene glycol) &#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x6D82;&#x5C42;&#x73BB;&#x7483;&#x5E7B;&#x706F;&#x7247;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x6D88;&#x9664;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5438;&#x9644;&#x4E0A;&#x5370;&#x5236;&#x4E86;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x82AF;&#x7247;&#x3002;&#x5F53;&#x5B75;&#x5316;&#x4E0E;&#x6253;&#x5370;&#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x4E3A;&#x57DF;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E0A;&#x80F6;&#x539F; (I)&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x9644;&#x52A0; Ab &#x70B9;&#x6216;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x9540;&#x819C;&#x73BB;&#x7483;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x5730;&#x65B9;&#x3002;&#x809D;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x7531;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x88AB;&#x4FD8; Ab &#x5728;&#x7D27;&#x90BB;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5939;&#x5FC3;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x5E76;&#x91CF;&#x5316;&#x4F7F;&#x7528;&#x82AF;&#x7247;&#x626B;&#x63CF;&#x4EEA;&#x7684;&#x57DF;&#x4E0A;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x82AF;&#x7247;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x809D;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;&#x5728;&#x751F;&#x4EA7;&#x662F;&#x9176;&#x8054;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x3002;&#x5728;&#x5C06;&#x6765;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5217;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x7684;&#x4F20;&#x611F;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6570;&#x7EC4;&#x7684; Ab &#x533A;&#x57DF;&#x5C06;&#x7279;&#x522B;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5730;&#x65B9;&#x5916;&#x89C2;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6216;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x6253;&#x5370;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;

&#x57F9;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x4EA7;&#x54C1;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x82AF;&#x7247;&#x3002;

The microarray format is being used extensively for combinatorial screening of cellular interactions with proteins, small molecules, or biomaterials. The utility of microarray-based cell cultivation approaches may be enhanced further by incorporating biosensing elements alongside the cell-adhesive ligands to enable local detection of secreted cellular products. The concept of combining cells and sensing elements in the same microarray is demonstrated in the present paper with hepatocytes serving as a model cellular system. Robotic microarraying was employed to print arrays of 300-mum-diameter collagen (I) spots alongside the antibody (Ab) spots specific to liver proteins: albumin and alpha1-antitrypsin (alpha1-AT). Protein microarrays were printed onto poly(ethylene glycol) hydrogel-coated glass slides, thus eliminating nonspecific adsorption of cells or proteins. When incubated with printed microarrays, hepatocytes became localized on collagen (I) domains but did not attach on Ab spots or elsewhere on hydrogel-coated glass substrates. Liver-specific proteins secreted by hepatocytes were captured on Ab domains in the immediate vicinity of the cells, detected with a sandwich immunofluorescent assay and quantified using a microarray scanner. Importantly, hepatic albumin and alpha1-AT production detected in the microarray was comparable to enzyme-linked immunosorbent assay measurements of these proteins. In the future, the juxtaposition of sensing Ab regions with cell arrays will be particularly useful for the detection of local appearance or loss of phenotype of cells interacting with the printed components of the cellular microenvironment.

Multifunctional protein microarrays for cultivation of cells and immunodetection of secreted cellular products.

Le format de micror&#xE9;seau est largement utilis&#xE9; pour le d&#xE9;pistage combinatoire des interactions cellulaires avec des prot&#xE9;ines, petites mol&#xE9;cules, ou des biomat&#xE9;riaux. L&#x26;#39;utilit&#xE9; de puces bas&#xE9;es sur des approches de culture de cellules peut &#xEA;tre encore am&#xE9;lior&#xE9; en incorporant des &#xE9;l&#xE9;ments de biod&#xE9;tection aux c&#xF4;t&#xE9;s des ligands des cellules adh&#xE9;sives pour permettre la d&#xE9;tection locale de produits s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;s cellulaires. Le concept de la combinaison des cellules et des &#xE9;l&#xE9;ments de d&#xE9;tection dans la puce m&#xEA;me est d&#xE9;montr&#xE9; dans le pr&#xE9;sent document avec des h&#xE9;patocytes au service en tant que syst&#xE8;me mod&#xE8;le cellulaire. Microarraying robotique a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;e pour afficher des tableaux de 300-mum de diam&#xE8;tre collag&#xE8;ne (I) des taches &#xE0; c&#xF4;t&#xE9; de la anticorps (Ac) des endroits pr&#xE9;cis &#xE0; des prot&#xE9;ines du foie: l&#x26;#39;albumine et en alpha1-antitrypsine (alpha1-AT). Puces &#xE0; prot&#xE9;ines ont &#xE9;t&#xE9; imprim&#xE9;es sur du poly (&#xE9;thyl&#xE8;ne glycol) des lames de verre enrob&#xE9;es d&#x26;#39;hydrogel-, &#xE9;liminant ainsi l&#x26;#39;adsorption non sp&#xE9;cifique de cellules ou de prot&#xE9;ines. Lorsque incub&#xE9;es avec des micror&#xE9;seaux imprim&#xE9;s, les h&#xE9;patocytes est devenu localis&#xE9; sur le collag&#xE8;ne (I) domaines, mais n&#x26;#39;a pas accord&#xE9; sur des spots Ab ou ailleurs sur des substrats de verre recouverts d&#x26;#39;hydrogel. Sp&#xE9;cifiques du foie prot&#xE9;ines s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;es par les h&#xE9;patocytes sont captur&#xE9;s sur les domaines Ab dans le voisinage imm&#xE9;diat des cellules, d&#xE9;tect&#xE9;s avec un dosage en sandwich immunofluorescence et quantifi&#xE9;s en utilisant un scanner micror&#xE9;seau. Important, la production h&#xE9;patique albumine et alpha 1-A d&#xE9;tect&#xE9; dans le micror&#xE9;seau est comparable &#xE0;-enzymatique mesures de dosage immuno de ces prot&#xE9;ines. Dans l&#x26;#39;avenir, la juxtaposition de r&#xE9;gions sensibles Ab avec des tableaux de cellules sera particuli&#xE8;rement utile pour la d&#xE9;tection de l&#x26;#39;apparition locale ou de la perte du ph&#xE9;notype de cellules en interaction avec les composants imprim&#xE9;s du microenvironnement cellulaire.

Microarrays prot&#xE9;ine multifonctionnelle pour la culture de cellules et immunod&#xE9;tection de s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;s cellulaire

El formato de microarrays se est&#xE1; utilizando ampliamente para la detecci&#xF3;n combinatoria de las interacciones celulares con prote&#xED;nas, mol&#xE9;culas peque&#xF1;as, o biomateriales. La utilidad de los microarrays de los enfoques basados &#x200B;&#x200B;en c&#xE9;lulas de cultivo se puede mejorar a&#xFA;n m&#xE1;s mediante la incorporaci&#xF3;n de elementos de biosensores junto a los ligandos de las c&#xE9;lulas adhesivas para permitir la detecci&#xF3;n local de los productos secretados celulares. El concepto de la combinaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas y los elementos de detecci&#xF3;n en el microarray misma se demuestra en el presente trabajo con los hepatocitos que act&#xFA;a como un sistema modelo de celular. Microarraying rob&#xF3;tica se emplea para imprimir series de 300 de di&#xE1;metro m&#xED;nimo de col&#xE1;geno (I), junto con los puntos del anticuerpo (Ab), los puntos espec&#xED;ficos de las prote&#xED;nas del h&#xED;gado: la alb&#xFA;mina y la alfa 1-antitripsina (alfa1-AT). Micromatrices de prote&#xED;na se imprimi&#xF3; sobre poli (etileno glicol) recubiertos de hidrogel portaobjetos de vidrio, eliminando as&#xED; la adsorci&#xF3;n inespec&#xED;fica de las c&#xE9;lulas o prote&#xED;nas. Cuando se incubaron con microarrays impresos, los hepatocitos se localiza sobre el col&#xE1;geno (I) dominios pero no conect&#xF3; en los puntos Ab o en otro lugar sobre sustratos de vidrio recubiertos de hidrogel. Espec&#xED;ficas del h&#xED;gado y las prote&#xED;nas secretadas por los hepatocitos fueron capturados en los dominios de Ab en las inmediaciones de las c&#xE9;lulas, que se detect&#xF3; con un ensayo de tipo s&#xE1;ndwich de inmunofluorescencia y se cuantifica mediante un esc&#xE1;ner de microarrays. Es importante destacar que la producci&#xF3;n hep&#xE1;tica de alb&#xFA;mina y alfa-1 AT-detectado en el microarray fue comparable a la ligados a enzimas mediciones de ensayo de inmunoabsorci&#xF3;n de estas prote&#xED;nas. En el futuro, la yuxtaposici&#xF3;n de detecci&#xF3;n regiones Ab con c&#xE9;lulas matrices ser&#xE1; particularmente &#xFA;til para la detecci&#xF3;n de la aparici&#xF3;n local o p&#xE9;rdida del fenotipo de c&#xE9;lulas que interact&#xFA;an con los componentes impresos del microambiente celular.

Microarrays de prote&#xED;nas multifuncionales para el cultivo de c&#xE9;lulas y la inmunodetecci&#xF3;n de productos celulares secretados

Das Microarray-Format wird ausgiebig f&uuml;r kombinatorische Screening von zellul&auml;ren Interaktionen mit Proteinen, kleine Molek&uuml;le oder Biomaterialien verwendet. Das Dienstprogramm Microarray-basierte Zelle Anbau Ans&auml;tze kann verbessert werden durch die Einbeziehung Biosensing Elemente neben der Zelle-Kleber-Liganden lokalen Erkennung von sekretierten Zellprodukten weiter. Das Konzept der Kombination Zellen und Sensorik Elemente in der gleichen Microarray wird in dem vorliegenden Papier mit Hepatozyten dienen als zellul&auml;re Modellsystem demonstriert. Robot Microarraying wurde eingesetzt, um Arrays von 300-Mum-Durchmesser-Kollagen (I) Flecken neben den Antik&ouml;rper (Ab)-Spots f&uuml;r Leber Proteine spezifisch drucken: Albumin und alpha1-Antitrypsin (alpha1-AT). ProteinMicroarrays wurden auf Poly(ethylene glycol) Hydrogel-beschichtete Objekttr&auml;ger, so dass keine unspezifische Adsorption von Zellen oder Proteine gedruckt. Mit gedruckten Microarrays inkubiert, Hepatozyten wurde auf lokalisierte Kollagen (I) Dom&auml;nen aber nicht anh&auml;ngen, auf Ab Flecken oder anderswo Hydrogel-beschichtete Glassubstrate. Leber-spezifische Proteine abgesondert von Hepatozyten wurden auf Ab Domains in unmittelbarer N&auml;he der Zellen, mit einem Sandwich-Immunfluoreszenz erkannt und quantifiziert mit einem Microarray Scanner erfasst. Wichtig ist, war die Leber Albumin und alpha1-AT-Produktion in der Microarray erkannt vergleichbar mit Enzyme-linked Immunosorbent Assay Messungen dieser Proteine. Das Nebeneinander von Sensorik Ab Regionen mit Zelle Arrays werden in Zukunft besonders f&uuml;r die Erkennung von lokalen aussehen oder Verlust der Ph&auml;notyp der Zellen, die Interaktion mit den gedruckten Komponenten der zellul&auml;ren Mikromilieu.

Multifunktionelles Protein-Microarrays f&uuml;r die Kultivierung von Zellen und Immunodetection der sezernierte Zellprodukten.

Il formato microarray &egrave; utilizzato ampiamente per screening combinatorio del cellulare interazioni con proteine, piccole molecole o biomateriali. L&#39;utilit&agrave; di approcci coltura cellulare basata su microarray pu&ograve; essere rafforzata ulteriormente incorporando elementi di biosensori a fianco i ligandi cellulari-adesivo per attivare il rilevamento locale di prodotti cellulari secrete. Il concetto di combinare le celle e sensing elements in microarray del stesso &egrave; dimostrato nel presente documento con epatociti che serve come un modello del sistema cellulare. Microarraying robotica &egrave; stato impiegato a matrici di punti 300-mamma-diametro collagene (I) a fianco le macchie di anticorpo (Ab) alle proteine epatiche specifiche di stampa: albumina e Alfa1-antitripsina (alfa1-AT). Microarrays della proteina sono state stampate su poly(ethylene glycol) rivestito in idrogel vetrini, eliminando cos&igrave; l&#39;adsorbimento non specifico di cellule o di proteine. Quando incubati con microarrays stampato, epatociti divennero localizzata sul collagene (I) domini ma non ha fatto attaccare su macchie Ab o altrove su substrati di vetro rivestite di idrogel. Fegato-specifiche proteine secernute dagli epatociti sono state catturate su domini Ab nelle immediate vicinanze delle cellule, rilevata con un test di immunofluorescenza sandwich e quantificati utilizzando uno scanner per microarray. Soprattutto, produzione di albumina e alfa1-AT epatica rilevata in microarray del era paragonabile a misurazioni analisi enzima-collegata dell&#39;immunosorbente di queste proteine. In futuro, la giustapposizione di rilevamento regioni Ab con matrici di cella sar&agrave; particolarmente utile per la rilevazione dell&#39;aspetto locale o perdita del fenotipo delle cellule interagisce con i componenti stampati del microambiente cellulare.

Microarrays della proteina multifunzionale per la coltivazione delle cellule e immunodetection di prodotti cellulari secrete.

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x751F;&#x4F53;&#x6750;&#x6599;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5E83;&#x304F;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x306F;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x73FE;&#x5730;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x6027;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x7D20;&#x5B50;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30D7;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x672C;&#x8AD6;&#x6587;&#x3067;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068;&#x3B1;1-&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;&#x3B1;1-AT&#xFF09;&#xFF1A;&#x30ED;&#x30DC;&#x30C3;&#x30C8;microarraying 300-MUM&#x5F84;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x6297;&#x4F53;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#xFF08;&#x79C1;&#x306F;&#xFF09;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;Ab&#xFF09;&#x306E;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x5370;&#x5237;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x975E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5438;&#x7740;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#xFF08;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF09;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x88AB;&#x8986;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x4E0A;&#x306B;&#x5370;&#x5237;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5370;&#x5237;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3067;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#xFF08;I&#xFF09;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30A2;&#x30D6;&#xB7;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x88AB;&#x8986;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x57FA;&#x677F;&#x4E0A;&#x306B;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x809D;&#x81D3;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x514D;&#x75AB;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30CA;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5468;&#x8FBA;&#x306B;&#x306F;&#x6297;&#x4F53;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x6355;&#x7372;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068;&#x3B1;1-AT&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x514D;&#x75AB;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5024;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5C06;&#x6765;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x914D;&#x5217;&#x3067;Ab&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x4E26;&#x7F6E;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x5370;&#x5237;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x5916;&#x89B3;&#x3084;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3002;

&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x88FD;&#x54C1;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x683D;&#x57F9;&#x7528;&#x306E;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;

Microarray &#xD615;&#xC2DD;&#xC774; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xB610;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC870;&#xD569; &#xC2EC;&#xC0AC;. Microarray &#xAE30;&#xBC18; &#xC140; &#xC7AC;&#xBC30; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC758; &#xC720;&#xD2F8;&#xB9AC;&#xD2F0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB85C;&#xCEEC; &#xAC80;&#xC0C9; &#xBE44; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC140; &#xC811;&#xCC29;&#xC81C; ligands &#xD568;&#xAED8; biosensing &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD94;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC694;&#xC18C; &#xAC19;&#xC740; microarray&#xC5D0; &#xAC1C;&#xB150; hepatocytes &#xBAA8;&#xB378; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD09;&#xC0AC;&#xC640; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC885;&#xC774;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB85C;&#xBD07; microarraying &#xC778;&#xC1C4; &#xAC04; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xD56D; &#xCCB4; (Ab) &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; (I) 300-&#xC5C4;&#xB9C8;-&#xC9C1;&#xACBD; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xBA85;&#xC18C;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;: &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xBC0F; alpha1-antitrypsin (alpha1-AT). &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarrays poly(ethylene glycol) hydrogel &#xCF54;&#xD305; &#xC720;&#xB9AC; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC;, &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774; &#xD604;&#xC0C1;&#xC774; &#xD761;&#xCC29; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC778;&#xC1C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC778;&#xC1C4; microarrays&#xB97C; incubated hepatocytes &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (I)&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xC774; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; Ab &#xBC18;&#xC810; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; hydrogel &#xCF54;&#xD305; &#xC720;&#xB9AC; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xAC04; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; hepatocytes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84; &#xBE44; &#xC0CC;&#xB4DC;&#xC704;&#xCE58; immunofluorescent &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xAC80;&#xC0C9; &#xBC0F; &#xACC4;&#xB7C9; microarray &#xC2A4;&#xCE90;&#xB108;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140;&#xC758; &#xBC14;&#xB85C; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; Ab &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xCEA1;&#xCC98;&#xB41C;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xAC04;&#xC7A5; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xBC0F; alpha1 AT &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; microarray&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; immunosorbent &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xCE21;&#xC815; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xB798;&#xC5D0; &#xC140; &#xBC30;&#xC5F4; &#xD558;&#xB294; Ab &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB098;&#xB780;&#xD788; &#xB85C;&#xCEEC; &#xC678;&#xAD00;&#xC758; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; microenvironment&#xC758; &#xC778;&#xC1C4; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC30;&#xC591; &#xBC0F; &#xBE44; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; immunodetection &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarrays.

&#x589E;&#x957F;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x5F62;&#x5F0F;&#x4F53;&#x5916;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x671F;&#x95F4;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3001; &#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x56FA;&#x76F8;&#x6CD5;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (HGF) &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x809D;&#x810F;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28; (ECM) &#x86CB;&#x767D;&#x82AF;&#x7247;&#x4E0A;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6F14;&#x793A;&#x6587;&#x7A3F;&#x3002;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6DF7;&#x5408;&#x4E0E; ECM &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D; &#xFF08;&#x80F6;&#x539F; (I) (IV) &#x6216;&#x5C42;&#x7C98;&#x8FDE;&#x86CB;&#x767D;&#xFF09; &#x548C;&#x7F06;&#x7EF3;&#x5370;&#x5237;&#x5230;&#x7845;&#x70F7;&#x6539;&#x6027;&#x7684;&#x73BB;&#x7483;&#x7247;&#x4E0A;&#x3002;&#x539F;&#x4EE3;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x690D;&#x5165;&#x5230;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;/ECM &#x86CB;&#x767D;&#x82AF;&#x7247;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x8702;&#x7A9D;&#x7FA4;&#x96C6;&#x4E2D;&#x4E2A;&#x522B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x70B9; &#xFF08;500 microm &#x76F4;&#x5F84;&#xFF09; &#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5E94;&#x7684;&#x3002;&#x809D;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3001; &#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#x53CA;&#x5176;-antitrypsin&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x51E0;&#x6298;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;/ECM &#x82AF;&#x7247;&#x76F8;&#x6BD4;&#x8015;&#x5730;&#x4EC5; ECM &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;/ECM &#x86CB;&#x767D;&#x70B9;&#x5BFC;&#x81F4;&#x81EA;&#x53D1;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C07;&#x4ECE;&#x5355;&#x5C42;&#x5230;&#x4E09;&#x7EF4;&#x7403;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8C03;&#x67E5;&#x5BF9; co-cultivated &#x57FA;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6813;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x66F4;&#x9AD8;&#x5C42;&#x6B21;&#x7684;&#x83CC;&#x7FA4;&#x53D8;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;/ECM &#x666F;&#x70B9;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5728; ECM &#x6CA1;&#x6709;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7FA4;&#x5C9B;&#x4E0A;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x83CC;&#x7FA4;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; ECM &#x86CB;&#x767D;&#x82AF;&#x7247;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7EB3;&#x5165;&#x6DF1;&#x523B;&#x548C;&#x6301;&#x4E45;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x5C06;&#x6765;&#xFF0C;&#x5C06;&#x6269;&#x5927;&#x6253;&#x5370;&#x5728; ECM &#x82AF;&#x7247;&#x4E0A;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x591A;&#x8DEF;&#x590D;&#x7528;&#x548C;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x6216;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x7B5B;&#x9009;&#x3002;

&#x57F9;&#x517B;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x5370;&#x5237;&#x9635;&#x5217;&#x4E0A;&#x3002;

Growth factors are commonly present in soluble form during in vitro cell cultivation experiments in order to provide signals for cellular proliferation or differentiation. In contrast to these traditional experiments, we investigated solid-phase presentation of a hepatocyte growth factor (HGF), a protein important in liver development and regeneration, on microarrays of extracellular matrix (ECM) proteins. In our experiments, HGF was mixed in solution with ECM proteins (collagen (I), (IV) or laminin) and robotically printed onto silane-modified glass slides. Primary rat hepatocytes were seeded onto HGF/ECM protein microarrays and formed cellular clusters that corresponded in size to the dimensions of individual protein spots (500 microm diameter). Analysis of liver-specific products, albumin and alpha1-antitrypsin, revealed several fold higher levels of expression of these proteins in hepatocytes cultured on HGF/ECM microarrays compared to cells cultivated on ECM proteins alone. In addition, cultivation of hepatocytes on HGF/ECM protein spots led to spontaneous reorganization of cellular clusters from a monolayer into three-dimensional spheroids. We also investigated the effects of surface-tethered HGF on hepatocytes co-cultivated with stromal cells and observed a significantly higher level of albumin in co-cultures where hepatocytes were stimulated by HGF/ECM spots compared to co-cultures created on ECM protein islands without the growth factor. In summary, our study suggests that incorporation of HGF into ECM protein microarrays has a profound and long-lasting effect on the morphology and phenotype of primary hepatocytes. In the future, the number of growth factors printed on ECM microarrays will be expanded to enable multiplexed and combinatorial screening of inducers of cellular differentiation or proliferation.

Cultivating liver cells on printed arrays of hepatocyte growth factor.

Les facteurs de croissance sont couramment pr&#xE9;sente sous forme soluble dans des essais in vitro de culture de cellules afin de fournir des signaux de prolif&#xE9;ration cellulaire ou la diff&#xE9;renciation. Contrairement &#xE0; ces exp&#xE9;riences traditionnelles, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; en phase solide pr&#xE9;sentation d&#x26;#39;un facteur de croissance des h&#xE9;patocytes (HGF), une prot&#xE9;ine importante dans le d&#xE9;veloppement du foie et de la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration, sur les puces de la matrice extracellulaire (ECM) des prot&#xE9;ines. Dans nos exp&#xE9;riences, HGF a &#xE9;t&#xE9; m&#xE9;lang&#xE9; dans une solution avec des prot&#xE9;ines ECM (collag&#xE8;ne (I), (IV) ou de la laminine) et robotique imprim&#xE9;s sur des lames de verre silyl&#xE9;s. H&#xE9;patocytes primaires de rat ont &#xE9;t&#xE9; ensemenc&#xE9;es sur des puces &#xE0; prot&#xE9;ines HGF / ECM et formaient des grappes cellulaires qui correspondaient en taille aux dimensions de spots prot&#xE9;iques individuels (diam&#xE8;tre 500 microm). Analyse des produits sp&#xE9;cifiques du foie, l&#x26;#39;albumine et en alpha1-antitrypsine, ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; plusieurs plis niveaux plus &#xE9;lev&#xE9;s d&#x26;#39;expression de ces prot&#xE9;ines dans les h&#xE9;patocytes cultiv&#xE9;s sur HGF / ECM puces par rapport &#xE0; des cellules cultiv&#xE9;es sur des prot&#xE9;ines ECM seul. En outre, la culture des h&#xE9;patocytes sur des spots de prot&#xE9;ines HGF / ECM a conduit &#xE0; une r&#xE9;organisation spontan&#xE9;e de groupes cellulaires &#xE0; partir d&#x26;#39;une monocouche en trois dimensions sph&#xE9;ro&#xEF;des. Nous avons &#xE9;galement &#xE9;tudi&#xE9; les effets de surface sur des h&#xE9;patocytes HGF captif co-cultiv&#xE9;es avec des cellules stromales et observ&#xE9; un niveau significativement plus &#xE9;lev&#xE9; d&#x26;#39;albumine dans les co-cultures o&#xF9; les h&#xE9;patocytes ont &#xE9;t&#xE9; stimul&#xE9;es par HGF / ECM rep&#xE8;re par rapport &#xE0; des co-cultures cr&#xE9;&#xE9;es sur les &#xEE;les de prot&#xE9;ines ECM sans le facteur de croissance. En r&#xE9;sum&#xE9;, notre &#xE9;tude sugg&#xE8;re que l&#x26;#39;incorporation de HGF dans des puces &#xE0; prot&#xE9;ines ECM a un effet profond et durable sur la morphologie et le ph&#xE9;notype des h&#xE9;patocytes primaires. Dans l&#x26;#39;avenir, le nombre de facteurs de croissance imprim&#xE9;s sur des micror&#xE9;seaux d&#x26;#39;ECM sera &#xE9;largi pour permettre le d&#xE9;pistage multiplex&#xE9;s et combinatoire des inducteurs de la diff&#xE9;renciation cellulaire ou la prolif&#xE9;ration.

Cellules h&#xE9;patiques Cultiver sur les tableaux imprim&#xE9;s du facteur de croissance des h&#xE9;patocytes

Wachstumsfaktoren sind h&auml;ufig in l&ouml;sliche Form anwesend w&auml;hrend in vitro Zell Kultivierung Experimente, um Signale f&uuml;r zellul&auml;re Proliferation und Differenzierung zu bieten. Im Gegensatz zu diesen traditionellen Experimenten untersuchten wir Festphasen-Pr&auml;sentation von einem Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGF), ein Protein, das in Leber Entwicklung und Regeneration auf Microarrays Proteine der extrazellul&auml;ren Matrix (ECM) wichtig. In unseren Experimenten, HGF wurde gemischt in L&ouml;sung mit ECM-Proteine (Kollagen i, (IV) oder Laminin) und robotically gedruckten auf Silan-modifizierte Objekttr&auml;ger. Prim&auml;re Ratte Hepatozyten wurden auf HGF/ECM-Protein-Microarrays entkernt und gebildet zellul&auml;re Clustern, die in der Gr&ouml;&szlig;e auf die Abmessungen der einzelnen Protein-Spots (500 Microm Durchmesser) entsprach. Analyse der Leber-spezifische Produkte, Albumin und alpha1-Antitrypsin, ergab mehrere Falten h&ouml;here Ebenen des Ausdrucks dieser Proteine in Hepatozyten kultiviert auf HGF/ECM-Microarrays, die im Vergleich zu Zellen kultiviert auf ECM-Proteinen allein. Dar&uuml;ber hinaus f&uuml;hrte Anbau von Hepatozyten auf HGF/ECM-Protein-Spots zu spontanen Reorganisation der zellul&auml;ren Cluster aus einer Monolage in dreidimensionale Sph&auml;roide. Wir untersuchten die Wirkungen von Oberfl&auml;che-gefesselte HGF auf Hepatozyten co-cultivated mit stromal Zellen und ein deutlich h&ouml;heres von Albumin in Co-cultures wo Hepatozyten durch HGF/ECM-Spots, die im Vergleich zu Co-cultures, erstellt am ECM Protein Inseln ohne den Wachstumsfaktor stimuliert wurden beobachtet. Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen zufolge unsere Studie Einbeziehung der HGF in ECM-Protein-Microarrays eine tiefgreifende und lang anhaltende Wirkung auf die Morphologie und Ph&auml;notyp der prim&auml;re Hepatozyten hat. In Zukunft wird die Anzahl der Wachstumsfaktoren gedruckt auf ECM-Microarrays ausgebaut, Multiplex und kombinatorische screening von Induktoren der Verbreitung oder zellul&auml;re Differenzierung erm&ouml;glichen.

Anbau von Leberzellen auf gedruckten Arrays von Hepatozyten-Wachstumsfaktor.

Fattori di crescita sono comunemente presente in forma solubile durante gli esperimenti di coltura cellulare in vitro al fine di fornire segnali di proliferazione cellulare o differenziazione. In contrasto con questi esperimenti tradizionali, abbiamo studiato la fase solida presentazione di un fattore di crescita degli epatociti (HGF), una proteina importante nel fegato sviluppo e rigenerazione, su microarray di proteine della matrice extracellulare (ECM). Nei nostri esperimenti, HGF &egrave; stato miscelato in soluzione con proteine ECM (collagene (I), (IV) o laminina) e robotizzato stampate su vetrini silano modificato. Epatociti di ratto primario sono stati seminati su microarrays della proteina HGF/ECM e formano ammassi cellulari che corrispondevano in dimensione per le dimensioni delle macchie singole proteine (500 microm di diametro). Analisi di prodotti specifici del fegato, l&#39;albumina e Alfa1-antitripsina, ha rivelato diversi piega pi&ugrave; alti livelli di espressione di queste proteine in epatociti coltivati su microarrays HGF/ECM rispetto alle cellule coltivate su proteine ECM da solo. Inoltre, coltivazione di epatociti su macchie proteiche HGF/ECM port&ograve; alla riorganizzazione spontanea degli ammassi cellulari da un monostrato in sferoidi tridimensionale. Abbiamo anche studiato gli effetti di superficie-tethered HGF su epatociti co-cultivated con cellule stromali e osservato un livello significativamente pi&ugrave; alto di albumina in co-cultures dove gli epatociti sono stati stimolati da macchie HGF/ECM rispetto al co-cultures creato sulle isole della proteina ECM senza il fattore di crescita. In sintesi, il nostro studio suggerisce che l&#39;incorporazione di HGF ECM microarrays della proteina ha un effetto profondo e duraturo sulla morfologia e fenotipo di epatociti primari. In futuro, sar&agrave; ampliato il numero di fattori di crescita stampato su ECM microarrays per abilitare multiplex e combinatoria di induttori di differenziazione cellulare o proliferazione di screening.

Coltivazione di cellule epatiche su matrici stampate del fattore di crescita degli epatociti.

&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3084;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x4E00;&#x822C;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;ECM&#xFF09;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3067;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;HGF&#xFF09;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3084;&#x518D;&#x751F;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x56FA;&#x76F8;&#x306E;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;HGF&#x304C;ECM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#xFF08;I&#xFF09;&#x3001;&#xFF08;IV&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30E9;&#x30DF;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF09;&#x3068;&#x30ED;&#x30DC;&#x30C3;&#x30C8;&#x5236;&#x5FA1;&#x30B7;&#x30E9;&#x30F3;&#x5909;&#x6027;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x4E0A;&#x306B;&#x5370;&#x5237;&#x3057;&#x305F;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;&#x6DF7;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x521D;&#x4EE3;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;HGF / ECM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x4E0A;&#x306B;&#x64AD;&#x7A2E;&#x3057;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;500&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x5F84;&#xFF09;&#x306E;&#x5BF8;&#x6CD5;&#x306B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x809D;&#x81D3;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x88FD;&#x54C1;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068;&#x3B1;1-&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306F;ECM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;HGF / ECM&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x4E0A;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6570;&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x56DE;&#x8EE2;&#x6955;&#x5186;&#x4F53;&#x306B;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x518D;&#x7DE8;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;HGF / ECM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x3068;&#x305B;&#x305A;&#x306B;ECM&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5CF6;&#x3067;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;HGF / ECM&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x523A;&#x6FC0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x9762;&#x30C6;&#x30B6;&#x30FC;HGF&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ECM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;HGF&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x4EE3;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3068;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5C06;&#x6765;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;ECM&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x5370;&#x5237;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3084;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x591A;&#x91CD;&#x5316;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5C55;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5370;&#x5237;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x683D;&#x57F9;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;

&#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD655;&#xC0B0; &#xB610;&#xB294; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCCB4; &#xC678; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB2EC;&#xB9AC; hepatocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (HGF) &#xAC04; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; (ECM) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarrays&#xC5D0; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACE0;&#xCCB4; &#xC0C1; &#xD504;&#xB808; &#xC820; &#xD14C;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; HGF &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; ECM &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0; &#xD63C;&#xD569; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; (&#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; (I), (IV) &#xB610;&#xB294; laminin) robotically silane &#xC218;&#xC815; &#xC720;&#xB9AC; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC778;&#xC1C4; &#xB41C;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xC950; hepatocytes HGF/ECM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarrays&#xC5D0; &#xC2DC;&#xB4DC; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC18;&#xC810; (500 microm &#xC9C1;&#xACBD;)&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xB97C; &#xD06C;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xD615;&#xC131;. &#xAC04; &#xAD00;&#xB828; &#xC81C;&#xD488;, &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xBC0F; alpha1-antitrypsin &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC140; &#xD63C;&#xC790; ECM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; HGF/ECM microarrays&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591; hepatocytes&#xC5D0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBC30; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;. &#xB610;&#xD55C;, HGF/ECM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC18;&#xC810;&#xC5D0; hepatocytes&#xC758; &#xC7AC;&#xBC30; &#xC138;&#xD3EC; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xC9C1; &#xAC1C;&#xD3B8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xB2E8;&#xCE35; 3 &#xCC28;&#xC6D0; spheroids&#xC5D0;. &#xB610;&#xD55C; hepatocytes stromal &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; co-cultivated&#xC5D0; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2FF;&#xB294; HGF&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xAD00;&#xCC30; hepatocytes ECM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC5C6;&#xC774; &#xC12C;&#xC5D0; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC9C4; co-cultures&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; HGF/ECM &#xBA85;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9; &#xD588;&#xB2E4; co-cultures&#xC5D0;&#xC11C; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC5C6;&#xC774; HGF &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarrays ECM&#xC5D0; &#xD615;&#xD0DC;&#xC640; &#xAE30;&#xBCF8; hepatocytes&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC5D0; &#xC911; &#xD6C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC624;&#xB798; &#xC9C0;&#xC18D; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xB798;&#xC5D0; ECM microarrays&#xC5D0; &#xC778;&#xC1C4; &#xB41C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218; &#xB2E4;&#xC911;&#xD654; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xB098; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC758; inducers&#xC758; &#xC0C1;&#xC601; &#xC870;&#xD569; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD655;&#xC7A5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hepatocyte &#xC99D;&#xAC00;&#xC728;&#xC758; &#xC778;&#xC1C4; &#xB41C; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xAC04;&#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC721;&#xC131;.

Los factores de crecimiento est&#xE1;n com&#xFA;nmente presentes en forma soluble durante experimentos in vitro en cultivo de c&#xE9;lulas con el fin de proporcionar se&#xF1;ales para la proliferaci&#xF3;n celular o la diferenciaci&#xF3;n. En contraste con estos experimentos tradicionales, se investig&#xF3; en fase s&#xF3;lida presentaci&#xF3;n de un factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), una prote&#xED;na importante en el desarrollo del h&#xED;gado y la regeneraci&#xF3;n, en microarrays de la matriz extracelular (ECM) de prote&#xED;nas. En nuestros experimentos, el HGF se mezcl&#xF3; en una soluci&#xF3;n con las prote&#xED;nas ECM (col&#xE1;geno (I), (IV) o laminina) y rob&#xF3;ticamente impreso en portaobjetos de vidrio silano-modificado. Hepatocitos primarios de rata fueron sembradas en microarrays de prote&#xED;nas HGF / ECM y formado grupos celulares que correspond&#xED;an en tama&#xF1;o a las dimensiones de manchas de prote&#xED;nas individuales (500 micras de di&#xE1;metro). An&#xE1;lisis de productos espec&#xED;ficos del h&#xED;gado, alb&#xFA;mina y alfa-1-antitripsina, revel&#xF3; varias veces m&#xE1;s altos niveles de expresi&#xF3;n de estas prote&#xED;nas en los hepatocitos cultivados en HGF / ECM micromatrices comparaci&#xF3;n con las c&#xE9;lulas cultivadas en prote&#xED;nas ECM solo. Adem&#xE1;s, el cultivo de hepatocitos sobre manchas de prote&#xED;nas HGF / ECM condujeron a la reorganizaci&#xF3;n espont&#xE1;nea de grupos celulares de una monocapa en tres dimensiones esferoides. Tambi&#xE9;n se investigaron los efectos de superficie anclada HGF en hepatocitos co-cultivadas con c&#xE9;lulas del estroma y se observa un mayor nivel de alb&#xFA;mina en co-cultivos en los hepatocitos fueron estimuladas por HGF / ECM descubre en comparaci&#xF3;n con los compa&#xF1;eros de las culturas creadas en las islas de prote&#xED;nas ECM, sin el factor de crecimiento. En resumen, nuestro estudio sugiere que la incorporaci&#xF3;n de HGF en microarrays de prote&#xED;nas ECM tiene un efecto profundo y duradero sobre la morfolog&#xED;a y el fenotipo de los hepatocitos primarios. En el futuro, el n&#xFA;mero de factores de crecimiento impresas en microarrays de ECM se ampliar&#xE1; para permitir detecci&#xF3;n multiplexada y la combinatoria de los inductores de la diferenciaci&#xF3;n celular o proliferaci&#xF3;n.

Cultivo de c&#xE9;lulas hep&#xE1;ticas en matrices impresas del factor de crecimiento de hepatocitos

&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x533B;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6765;&#x6E90;&#x6301;&#x6709;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x7684;&#x5E0C;&#x671B;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E00;&#x627F;&#x8BFA;&#x9700;&#x8981;&#x65B0;&#x578B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6307;&#x5BFC;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7279;&#x5B9A;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x8BA2;&#x4E86;&#x523A;&#x6FC0;&#x809D;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (mESCs) micropatterned &#x8054;&#x5408;&#x57F9;&#x517B;&#x5E73;&#x53F0;&#x3002;&#x5353;&#x548C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x504F;&#x597D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x6240;&#x9700;&#x7684; mESCs &#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9;&#x9644;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE; (HepG2) &#x9996;&#x9009; (I) &#x7684;&#x80F6;&#x539F;&#x57FA;&#x8D28;&#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x6CA1;&#x6709;&#x9075;&#x5B88;&#x3002;&#x6253;&#x5370;&#x5217; (I) &#x7684;&#x80F6;&#x539F;&#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x70B9; (300 microm &#x76F4;&#x5F84;&#xFF09;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#x8FDE;&#x7EED;&#x76F4;&#x64AD;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x96C6;&#x7FA4; mESCs &#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x7EC4;&#x5728;&#x540C;&#x4E00;&#x82AF;&#x7247;&#x5185;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; micropatterned &#x83CC;&#x7FA4;&#x53D8;&#x5316;&#x4FDD;&#x6301;&#x5728;&#x8865;&#x5145;&#x809D;&#x5206;&#x5316;&#x5A92;&#x4F53;&#x8FBE;&#x4E24;&#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x68C0;&#x67E5;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;mESCs &#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x4ECE;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x5171;&#x57F9;&#x517B;&#x4F7F;&#x7528;&#x6FC0;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x5207;&#x5272;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9176; (RT) &#x5206;&#x6790;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (PCR)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A; mESCs &#x4E0E; HepG2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5171;&#x57F9;&#x517B;&#x8868;&#x660E;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x5C11;&#x4F34;&#x80DA;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5171;&#x80B2;&#x683C;&#x5F0F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x76F8;&#x6BD4; mESCs &#x5355;&#x72EC;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x809D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;micropatterned mESCs &#x548C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x83CC;&#x7FA4;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x9A7E;&#x9A76;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x809D;&#x8868;&#x578B;&#x91CD;&#x5927;&#x627F;&#x8BFA;&#x3002;&#x4ECA;&#x540E;&#xFF0C;&#x5C06;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6B64;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6587;&#x5316;&#x5E73;&#x53F0;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x8F6C;&#x6362;&#x3002;

&#x6307;&#x5BFC;&#x809D;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x82AF;&#x7247;&#x83CC;&#x7FA4;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

Embryonic stem cells hold considerable promise in tissue engineering and regenerative medicine as a source of tissue-specific cells. However, realizing this promise requires novel methods for guiding lineage-specific differentiation of stem cells. In this study, we developed a micropatterned co-culture platform for stimulating hepatic differentiation of mouse embryonic stem cells (mESCs). Studies of mESC and hepatic cell adhesion preferences revealed that mESCs required fibronectin for attachment, while hepatic cells (HepG2) preferred collagen (I) substrate and did not adhere to fibronectin. Printing columns of collagen (I) and fibronectin spots (300 microm diameter), followed by sequential seeding of the two cell types, allowed the positioning of clusters of mESCs adjacent to groups of hepatic cells within the same microarray. These micropatterned co-cultures were maintained for up to two weeks in hepatic differentiation media supplemented. To examine the differentiation, mESCs were selectively extracted from the co-culture using laser microdissection and analyzed using real-time reverse transcriptase (RT)-polymerase chain reaction (PCR). These analyses revealed that mESCs co-cultured with HepG2 cells showed a decrease in pluripotency gene expression concomitant with up-regulation of endodermal genes. In addition, the co-culture format induced a significant increase in the expression of liver genes compared to mESCs cultured alone. In conclusion, micropatterned co-cultures of mESCs and hepatic cells showed a significant promise in driving stem cell differentiation towards hepatic phenotype. In the future, this cell culture platform will be further enhanced to enable efficient conversion of mouse and human ESCs to hepatocytes.

Directing hepatic differentiation of embryonic stem cells with protein microarray-based co-cultures.

Les cellules souches embryonnaires sont tr&#xE8;s prometteurs dans l&#x26;#39;ing&#xE9;nierie tissulaire et la m&#xE9;decine r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rative comme une source de tissu-sp&#xE9;cifiques les cellules. Toutefois, la r&#xE9;alisation de cette promesse n&#xE9;cessite de nouvelles m&#xE9;thodes pour guider la lign&#xE9;e sp&#xE9;cifique diff&#xE9;renciation des cellules souches. Dans cette &#xE9;tude, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une co-culture micro&#xE9;lectrodes plate-forme pour stimuler la diff&#xE9;renciation h&#xE9;patique des cellules souches embryonnaires de souris (mESCs). Les &#xE9;tudes de MESC et les pr&#xE9;f&#xE9;rences h&#xE9;patiques adh&#xE9;sion cellulaire a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la fibronectine mESCs n&#xE9;cessaire pour la fixation, tandis que les cellules h&#xE9;patiques (HepG2) collag&#xE8;ne pr&#xE9;f&#xE9;r&#xE9; (I) du substrat et ne pas adh&#xE9;rer &#xE0; la fibronectine. Colonnes d&#x26;#39;impression de collag&#xE8;ne (I) et des taches (300 fibronectine diam&#xE8;tre microm&#xE8;tre), suivie par ensemencement s&#xE9;quentielle des deux types cellulaires, des permis de positionnement de grappes de mESCs adjacentes &#xE0; des groupes de cellules h&#xE9;patiques dans le m&#xEA;me puce. Ces micro&#xE9;lectrodes co-cultures ont &#xE9;t&#xE9; maintenues pour un maximum de deux semaines dans les m&#xE9;dias diff&#xE9;renciation h&#xE9;patique compl&#xE9;t&#xE9;es. Pour examiner la diff&#xE9;renciation, mESCs ont &#xE9;t&#xE9; s&#xE9;lectivement extraite de la microdissection laser co-culture avec et analys&#xE9;es en utilisant la transcriptase inverse en temps r&#xE9;el (RT)-polym&#xE9;rase en cha&#xEE;ne (PCR). Ces analyses ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que mESCs co-cultiv&#xE9;es avec des cellules HepG2 ont montr&#xE9; une diminution concomitante expression du g&#xE8;ne pluripotence avec up-r&#xE9;gulation de g&#xE8;nes endodermiques. En outre, le format de co-culture a induit une augmentation significative de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes du foie par rapport &#xE0; mESCs cultiv&#xE9;es seul. En conclusion, micro&#xE9;lectrodes co-cultures de cellules h&#xE9;patiques et mESCs montr&#xE9; une promesse importante dans la conduite diff&#xE9;renciation des cellules souches vers ph&#xE9;notype h&#xE9;patique. Dans l&#x26;#39;avenir, cette plate-forme de culture cellulaire sera renforc&#xE9;e pour permettre une conversion efficace de la souris et les CES de l&#x26;#39;homme &#xE0; des h&#xE9;patocytes.

Diriger Diff&#xE9;renciation h&#xE9;patique des cellules souches embryonnaires avec des prot&#xE9;ines bas&#xE9; sur un micror&#xE9;seau co-cultures

Embryonaler Stammzellen halten erhebliche Versprechen als eine Quelle von Gewebe-spezifischen Zellen in Gewebe-engineering und regenerativer Medizin. Allerdings erfordert die Realisierung dieses Versprechen neuartige Methoden Anleitung Herkunfts-spezifische Differenzierung von Stammzellen f&uuml;r. In dieser Studie entwickelten wir eine Micropatterned Kokulturen Plattform f&uuml;r anregende hepatische Unterscheidung M&auml;useder embryonalen Stammzellen (mESCs). Studien mESC und hepatische Zelle Adh&auml;sion Pr&auml;ferenzen ergeben, dass mESCs erforderlich-Fibronektin zur Befestigung, w&auml;hrend hepatische Zellen (HepG2) Kollagen (I) Substrat bevorzugt und Fibronektin nicht einzuhalten. Spalten von Kollagen (I) und Fibronektin-Spots (300 Microm Durchmesser), gefolgt von sequenziellen Aussaat der zwei Zelltypen Drucken erlaubt die Positionierung von mESCs angrenzend an Gruppen von hepatischen Zellen innerhalb der gleichen Microarray-Clustern. Bis zu zwei Wochen in Leber Differenzierung Medien erg&auml;nzt wurden diese Micropatterned Co-cultures gepflegt. Um die Differenzierung zu untersuchen, wurden die mESCs selektiv extrahiert vom Kokulturen mit laser Microdissection und mit Echtzeit-Reverse Transkriptase (RT) analysiert-Polymerase-Kettenreaktion (PCR). Diese Analysen ergaben, dass mESCs co-cultured mit HepG2-Zellen eine Abnahme der Pluripotenz Genexpression gleichzeitige mit bis-Verordnung endodermalen Gene zeigten. Dar&uuml;ber hinaus induzierte Kokulturen Format eine deutliche Zunahme der Ausdruck der Leber Gene im Vergleich zu mESCs allein kultiviert. Micropatterned Co-cultures von mESCs und hepatischen Zellen zeigte abschlie&szlig;end ein bedeutende Versprechen fahren Stammzell-Differenzierung in Richtung Leber Ph&auml;notyp. In Zukunft wird diese Zelle-Kultur-Plattform weiter verbessert werden, um die effiziente Umwandlung von Maus und Mensch WSR in Hepatozyten zu aktivieren.

Regie Leber Differenzierung von embryonalen Stammzellen mit Protein Microarray-basierte Co-cultures.

Le cellule staminali embrionali promettono considerevoli nella medicina rigenerativa e ingegneria dei tessuti come fonte di cellule tessuto-specifiche. Tuttavia, rendendosi conto di questa promessa richiede nuovi metodi per guidare lineage-specifici di differenziazione delle cellule staminali. In questo studio, abbiamo sviluppato una piattaforma di co-culture micropatterned stimolante epatica differenziazione delle cellule staminali embrionali di topo (mESCs). Studi di mescita ed epatiche preferenze di adesione delle cellule ha rivelato che la fibronectina mESCs necessaria per il fissaggio, mentre le cellule epatiche (HepG2) preferivano substrato collagene (I) e non ader&igrave; alla fibronectina. Stampa colonne di collagene (I) e macchie di fibronectina (300 microm di diametro), seguite da semina sequenziale dei due tipi di cellule, ha permesso il posizionamento dei cluster di mESCs adiacenti a gruppi di cellule epatiche all&#39;interno della stessa microarray. Questi co-cultures micropatterned sono stati effettuati per fino a due settimane in media di differenziazione epatica completato. Per esaminare la differenziazione, mESCs sono stati estratti selettivamente dalla co-culture mediante laser microdissection e analizzati mediante Real-Time reverse transcriptase (RT)-reazione a catena della polimerasi (PCR). Queste analisi hanno rivelato che mESCs co-cultured con cellule HepG2 ha mostrato una diminuzione nell&#39;espressione genica pluripotenza concomitante con up-regulation dei geni endodermico. Inoltre, il formato di co-culture indotta da un aumento significativo nell&#39;espressione dei geni fegati rispetto al mESCs coltivate da solo. In conclusione, micropatterned co-cultures di mESCs e di cellule epatiche hanno mostrato una significativa promessa nella differenziazione delle cellule staminali verso fenotipo epatico di guida. In futuro, questa piattaforma di cultura cellulare sar&agrave; ulteriormente rafforzata per consentire la conversione efficiente di mouse e CES umane di epatociti.

Dirigendo epatica differenziazione delle cellule staminali embrionali con co-cultures basata su microarray di proteine.

&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4F9B;&#x7D66;&#x6E90;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7D44;&#x7E54;&#x5DE5;&#x5B66;&#x3068;&#x518D;&#x751F;&#x533B;&#x7642;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;mESCs&#xFF09;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x306A;&#x809D;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MESC&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;HepG2&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x512A;&#x5148;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#xFF08;I&#xFF09;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x4ED8;&#x7740;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;mESCs&#x306F;&#x3001;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 2&#x3064;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306E;&#x9806;&#x6B21;&#x64AD;&#x7A2E;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5370;&#x5237;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E;&#x5217;&#xFF08;I&#xFF09;&#x53CA;&#x3073;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x89B3;&#x5149;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF08;300&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x76F4;&#x5F84;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x5185;&#x3067;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;mESCs&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x3092;&#x88DC;&#x8DB3;&#x809D;&#x5206;&#x5316;&#x57F9;&#x5730;&#x3067;2&#x9031;&#x9593;&#x307E;&#x3067;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;mESCs&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BB;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x304B;&#x3089;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;RT&#xFF09; - &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC;&#xFF08;PCR&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;mESCs HepG2&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x306F;&#x5185;&#x80DA;&#x8449;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x4ED8;&#x968F;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;mESCs&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;mESCs&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x306F;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x63A8;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C06;&#x6765;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;ESC&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x63DB;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x809D;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;

&#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140;&#xC758; &#xC18C;&#xC2A4;&#xB85C; &#xC870;&#xC9C1; &#xACF5;&#xD559; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC758;&#xD559;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xC7A1;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654; &#xACC4;&#xBCF4; &#xAD00;&#xB828; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xC774; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xC2E4;&#xD604;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (mESCs)&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xAC04;&#xC7A5; &#xCC28;&#xBCC4; &#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; micropatterned co-culture &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C; Mesc&#xC640; &#xD0A4; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xD658;&#xACBD; &#xC124;&#xC815;&#xC758; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC; (HepG2) &#xC120;&#xD638; &#xD558;&#xB294; (I) &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xAE30;&#xD310; fibronectin &#xC900;&#xC218; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; mESCs fibronectin&#xB294; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. (I) &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xACFC; fibronectin &#xBA85;&#xC18C; (&#xC9C1;&#xACBD; 300 microm), &#xB450; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC21C;&#xCC28; &#xC2DC;&#xB4DC; &#xB4A4;&#xC758; &#xC5F4; &#xC778;&#xC1C4; &#xD5C8;&#xC6A9; mESCs &#xAC19;&#xC740; microarray &#xB0B4; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC140; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; micropatterned co-cultures &#xBCF4;&#xCDA9; &#xAC04;&#xC7A5; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xB300; 2 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xC720;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC;&#xD560; mESCs &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; co-culture&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xB41C; &#xC778; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; (RT)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D;-&#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR). &#xC774;&#xB4E4;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; HepG2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; co-cultured mESCs endodermal &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCD5C;&#xB300; &#xB808; &#xADE4; &#xC218; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; pluripotency &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, co-culture &#xD615;&#xC2DD; mESCs &#xD63C;&#xC790; &#xACBD;&#xC791;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC04; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC720;&#xBC1C;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, mESCs &#xBC0F; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; micropatterned co-cultures &#xAC04;&#xC7A5; &#xD615;&#xC73C;&#xB85C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xB798;&#xC5D0;&#xC774; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC; hepatocytes&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; ESCs &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD658; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xB354;&#xC6B1; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; microarray&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; co-cultures&#xC758; &#xAC04;&#xC7A5; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xAC10;&#xB3C5;.

Las c&#xE9;lulas madre embrionarias son promisorias en la ingenier&#xED;a de tejidos y medicina regenerativa como fuente de tejidos espec&#xED;ficos de las c&#xE9;lulas. Sin embargo, la realizaci&#xF3;n de esta promesa requiere nuevos m&#xE9;todos para guiar el linaje espec&#xED;fico de diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre. En este estudio, hemos desarrollado una micropatterned co-cultivo de plataforma para estimular la diferenciaci&#xF3;n hep&#xE1;tica de c&#xE9;lulas madre embrionarias de rat&#xF3;n (mESCs). Los estudios de MESC y las preferencias de c&#xE9;lulas hep&#xE1;ticas de adhesi&#xF3;n revel&#xF3; que la fibronectina mESCs requiere para la uni&#xF3;n, mientras que las c&#xE9;lulas hep&#xE1;ticas (HepG2) col&#xE1;geno preferido (I) del sustrato y no se adhieren a la fibronectina. Columnas de impresi&#xF3;n de col&#xE1;geno (I) y fibronectina (manchas 300 micras de di&#xE1;metro), seguido por la siembra secuencial de los dos tipos de c&#xE9;lulas, permite el posicionamiento de los conglomerados de mESCs adyacentes a los grupos de c&#xE9;lulas hep&#xE1;ticas en la micromatriz mismo. Estos micropatterned co-cultivos se mantuvieron durante un m&#xE1;ximo de dos semanas en los medios de diferenciaci&#xF3;n hep&#xE1;tica suplementados. Para examinar la diferenciaci&#xF3;n, mESCs se extrajeron de forma selectiva de la microdisecci&#xF3;n l&#xE1;ser co-cultivo con y analizados utilizando en tiempo real de la transcriptasa inversa (RT)-reacci&#xF3;n de polimerasa en cadena (PCR). Estos an&#xE1;lisis revelaron que mESCs co-cultivadas con c&#xE9;lulas HepG2 mostraron una disminuci&#xF3;n en la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica pluripotencia concomitante con la regulaci&#xF3;n de los genes endod&#xE9;rmico. Adem&#xE1;s, el formato de co-cultivo indujo un aumento significativo en la expresi&#xF3;n de los genes del h&#xED;gado en comparaci&#xF3;n con mESCs cultivadas solo. En conclusi&#xF3;n, micropatterned co-cultivos de c&#xE9;lulas hep&#xE1;ticas mESCs y mostr&#xF3; una promesa importante en el impulso de diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre hacia el fenotipo hep&#xE1;tico. En el futuro, esta plataforma de cultivo celular, se reforzar&#xE1; para permitir la conversi&#xF3;n eficiente de rat&#xF3;n y humanos CES a los hepatocitos.

Directivo diferenciaci&#xF3;n hep&#xE1;tica de c&#xE9;lulas madre embrionarias con el micro series de prote&#xED;nas a base de Co-culturas

Les strat&#xE9;gies traditionnelles d&#x26;#39;affinit&#xE9; &#xE0; base d&#x26;#39;anticorps de d&#xE9;tection utilisent des r&#xE9;actifs multiples et les &#xE9;tapes de lavage et sont impropres &#xE0; la d&#xE9;tection en temps r&#xE9;el de la liaison d&#x26;#39;analytes. Les aptam&#xE8;res, d&#x26;#39;autre part, peuvent &#xEA;tre con&#xE7;us pour surveiller les &#xE9;v&#xE9;nements de liaison directe, en temps r&#xE9;el, sans la n&#xE9;cessit&#xE9; pour les &#xE9;tiquettes secondaires. L&#x26;#39;objectif de la pr&#xE9;sente &#xE9;tude &#xE9;tait de concevoir un aptam&#xE8;re phare pour le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence (FRET) bas&#xE9; sur la d&#xE9;tection de l&#x26;#39;interf&#xE9;ron-gamma (IFN-gamma) - une cytokine inflammatoire important. Variantes de aptam&#xE8;re d&#x26;#39;ADN modifi&#xE9;s avec des fractions de biotine et les entretoises ont &#xE9;t&#xE9; immobilis&#xE9;es sur les surfaces rev&#xEA;tues avidine et caract&#xE9;ris&#xE9; par r&#xE9;sonance plasmonique de surface (SPR). Les &#xE9;tudes ont montr&#xE9; que l&#x26;#39;immobilisation SPR d&#x26;#39;aptam&#xE8;re par l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; 3 &#x26;#39;a abouti &#xE0; la meilleure liaison de l&#x26;#39;IFN-gamma (K (d) = 3,44 nM). Cette variante aptam&#xE8;re optimale a &#xE9;t&#xE9; ensuite utilis&#xE9;e pour construire un phare en hybridant fluorophore marqu&#xE9; aptam&#xE8;re avec un brin d&#x26;#39;oligonucl&#xE9;otide antisens porteur d&#x26;#39;un extincteur. Des &#xE9;tudes ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la SPR l&#x26;#39;IFN-gamma liaison avec une balise aptam&#xE8;re a eu lieu dans les 15 minutes d&#x26;#39;introduction analyte - sugg&#xE9;rant le remplacement dynamique du brin compl&#xE9;mentaire par quencher-IFN-gamma mol&#xE9;cules. Pour mettre davantage en valeur les applications de biod&#xE9;tection, les mol&#xE9;cules de balises aptam&#xE8;res ont &#xE9;t&#xE9; immobilis&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur des canaux microfluidiques et a contest&#xE9; avec plus ou moins la concentration de l&#x26;#39;analyte. Microscopie &#xE0; fluorescence r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; par fluorescence faible en l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;analyte et de la fluorescence &#xE9;lev&#xE9;e apr&#xE8;s l&#x26;#39;introduction de l&#x26;#39;IFN-gamma. Surtout, contrairement traditionnels &#xE0; base d&#x26;#39;anticorps immuno-essais, le signal a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; directement lors de la liaison de l&#x26;#39;analyte sans avoir besoin de plusieurs &#xE9;tapes de lavage. La surface immobilis&#xE9;e aptam&#xE8;re balise avait une plage lin&#xE9;aire de 5 &#xE0; 100 nM et une limite inf&#xE9;rieure de d&#xE9;tection de 5 nM IFN-gamma. En conclusion, nous avons con&#xE7;u une balise aptam&#xE8;re FRET bas&#xE9;e sur la surveillance d&#x26;#39;un cytokine inflammatoire-IFN-gamma. Dans l&#x26;#39;avenir, cette strat&#xE9;gie biod&#xE9;tection seront utilis&#xE9;s pour surveiller la dynamique de la production de cytokines par les cellules immunitaires.

D&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un Beacon aptam&#xE8;res pour la d&#xE9;tection de l&#x26;#39;interf&#xE9;ron-gamma

Traditionelle Antik&ouml;rper-basierte Affinit&auml;t Fernerkundung Strategien besch&auml;ftigen mehrere Reagenzien und waschen Schritte und sind ungeeignet f&uuml;r Echtzeit-Erkennung von Analyten binden. Aptamere, auf der anderen Seite kann gestaltet werden verbindliche Ereignisse direkt zu &uuml;berwachen, in Echtzeit, ohne die Notwendigkeit f&uuml;r sekund&auml;re Bezeichnungen. Ziel der vorliegenden Studie war es, ein Aptamer-Leuchtturm f&uuml;r Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) entwerfen - basierte Erkennung von Interferon-Gamma (IFN-Gamma)--eine wichtige entz&uuml;ndliche Cytokine. Varianten der DNA Aptamer mit Biotin Adsorptionseigenschaften und Abstandshalter modifiziert wurden auf Avidin beschichtete Oberfl&auml;chen immobilisiert und Surface Plasmon Resonance (SPR) gepr&auml;gt. Die SPR-Studien haben ergeben, dass Immobilisierung von Aptamer &uuml;ber die 3&#39; Ende f&uuml;hrte zu das beste Bindung IFN-Gamma (K(d) = 3,44 nM). Diese optimale Aptamer-Variante wurde dann verwendet, um ein Leuchtfeuer durch Hybridisierung Aptamer Fluorophore beschriftet mit einem antisense-Oligonukleotid-Strang tragen ein Quencher zu konstruieren. SPR-Studien belegten, dass die IFN-Gamma-Bindung mit ein Aptamer-Beacon innerhalb 15 min von Analyten Einf&uuml;hrung--vorschlagen dynamische Ersatz des Quencher-komplement&auml;ren Stranges von IFN-Gamma Molek&uuml;le aufgetreten. Um weitere Biosensing Anwendungen hervorzuheben, wurden Aptamer Leuchtfeuer Molek&uuml;le immobilisiert innen mikrofluidische Kan&auml;le und mit unterschiedlicher Konzentration des Analyten in Frage gestellt. Fluoreszenzmikroskopie ergab geringe Fluoreszenz in Ermangelung des Analyten und hohe Fluoreszenz nach Einf&uuml;hrung des IFN-Gamma. Wichtig ist, im Gegensatz zu herk&ouml;mmlichen Antik&ouml;rper-basierten Immunoassays, wurde das Signal direkt nach Bindung des Analyten ohne die Notwendigkeit f&uuml;r mehrere waschen Schritte beobachtet. Die Oberfl&auml;che immobilisierte Aptamer-Leuchte hatte einen linearen Bereich von 5 bis 100 nM und eine untere Nachweisgrenze von 5 nM IFN-Gamma. Abschlie&szlig;end haben wir ein Aptamer FRET-basierte Leuchtfeuer f&uuml;r die &Uuml;berwachung eine entz&uuml;ndliche Cytokine-IFN-Gamma entwickelt. In Zukunft wird diese Biosensing-Strategie eingesetzt werden, um die Dynamik der Zytokin-Produktion durch die Immunzellen zu &uuml;berwachen.

Entwicklung ein Aptamer-Leuchte f&uuml;r die Erkennung von Interferon-Gamma.

&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x9065;&#x611F;&#x6218;&#x7565;&#x96C7;&#x7528;&#x591A;&#x4E2A;&#x8BD5;&#x5242;&#x548C;&#x6D17;&#x6DA4;&#x6B65;&#x9AA4;&#x548C;&#x4E0D;&#x9002;&#x5408;&#x4E8E;&#x5B9E;&#x65F6;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x76D1;&#x89C6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x76F4;&#x63A5;&#xFF0C;&#x5728;&#x5B9E;&#x65F6;&#x3001; &#x65E0;&#x9700;&#x4E8C;&#x6B21;&#x6807;&#x7B7E;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x9002;&#x914D;&#x4FE1;&#x6807;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; (&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma;&#xFF09; &#x68C0;&#x6D4B; &mdash; &mdash; &#x91CD;&#x8981;&#x708E;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x53D8;&#x79CD; DNA &#x9644;&#x7740;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x5076;&#x4E0E;&#x6491;&#x6761;&#x4FEE;&#x6539;&#x4E86;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x4EB2;&#x548C;&#x7D20;&#x6D82;&#x5C42;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F; (SPR) &#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;SPR &#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x9644;&#x7740;&#x901A;&#x8FC7; 3&#39; &#x6700;&#x7EC8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6700;&#x597D;&#x7684;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; (K(d) = 3.44 nM&#xFF09;&#x3002;&#x6B64;&#x4F18;&#x5316;&#x9002;&#x914D;&#x53D8;&#x4F53;&#x7136;&#x540E;&#x7528;&#x4E8E;&#x901A;&#x8FC7;&#x6742;&#x4EA4;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x5B50;&#x4E0E;&#x643A;&#x5E26;&#x6DEC;&#x706B;&#x53CD;&#x4E49;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x94FE;&#x6784;&#x5EFA;&#x4E00;&#x5EA7;&#x706F;&#x5854;&#x3002;SPR &#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0E;&#x9644;&#x7740;&#x706F;&#x5854;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x7B80;&#x4ECB;--&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x5206;&#x5B50;&#x8868;&#x660E;&#x6DEC;&#x706B;&#x4E92;&#x8865;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x7684;&#x5F3A;&#x592F;&#x7F6E;&#x6362;&#x7684; 15 &#x5206;&#x949F;&#x5185;&#x3002;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F; biosensing&#xFF0C;&#x9002;&#x914D;&#x706F;&#x5854;&#x5206;&#x5B50;&#x88AB;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x901A;&#x9053;&#x5185;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x53D7;&#x5230;&#x8D28;&#x7591;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x53D1;&#x73B0;&#x4F4E;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x5F15;&#x5165;&#x540E;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6709;&#x4EBA;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BF9;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x591A;&#x4E2A;&#x6D17;&#x6DA4;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5206;&#x6790;&#x7269;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x7684;&#x9644;&#x7740;&#x706F;&#x5854;&#x4E86;&#x7EBF;&#x6027;&#x8303;&#x56F4;&#x4ECE; 5 &#x5230; 100 nM &#x548C;&#x4E0B;&#x9650;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684; 5 nM &#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684;&#x9002;&#x914D;&#x706F;&#x5854;&#x7684;&#x708E;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;-&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&gamma; &#x76D1;&#x6D4B;&#x3002;&#x5728;&#x5C06;&#x6765;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F1A;&#x8058;&#x8BF7;&#x8FD9; biosensing &#x6218;&#x7565;&#x4EE5;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7531;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x3002;

&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x68C0;&#x6D4B;&#x9002;&#x914D;&#x706F;&#x5854;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

Traditional antibody-based affinity sensing strategies employ multiple reagents and washing steps and are unsuitable for real-time detection of analyte binding. Aptamers, on the other hand, may be designed to monitor binding events directly, in real-time, without the need for secondary labels. The goal of the present study was to design an aptamer beacon for fluorescence resonance energy transfer (FRET)-based detection of interferon-gamma (IFN-gamma)--an important inflammatory cytokine. Variants of DNA aptamer modified with biotin moieties and spacers were immobilized on avidin-coated surfaces and characterized by surface plasmon resonance (SPR). The SPR studies showed that immobilization of aptamer via the 3' end resulted in the best binding IFN-gamma (K(d) = 3.44 nM). This optimal aptamer variant was then used to construct a beacon by hybridizing fluorophore-labeled aptamer with an antisense oligonucleotide strand carrying a quencher. SPR studies revealed that IFN-gamma binding with an aptamer beacon occurred within 15 min of analyte introduction--suggesting dynamic replacement of the quencher-complementary strand by IFN-gamma molecules. To further highlight biosensing applications, aptamer beacon molecules were immobilized inside microfluidic channels and challenged with varying concentration of analyte. Fluorescence microscopy revealed low fluorescence in the absence of analyte and high fluorescence after introduction of IFN-gamma. Importantly, unlike traditional antibody-based immunoassays, the signal was observed directly upon binding of analyte without the need for multiple washing steps. The surface immobilized aptamer beacon had a linear range from 5 to 100 nM and a lower limit of detection of 5 nM IFN-gamma. In conclusion, we designed a FRET-based aptamer beacon for monitoring of an inflammatory cytokine-IFN-gamma. In the future, this biosensing strategy will be employed to monitor dynamics of cytokine production by the immune cells.

Development of an aptamer beacon for detection of interferon-gamma.

Strategie di rilevamento tradizionale basato su anticorpo affinit&agrave; impiegano pi&ugrave; reattivi e fasi di lavaggio e sono inadatti per la rilevazione in tempo reale di associazione analita. Aptameri, d&#39;altra parte, possono essere progettato per monitorare gli eventi di associazione direttamente, in tempo reale, senza bisogno di etichette secondarie. L&#39;obiettivo del presente studio &egrave; stato quello di progettare un faro aptamer per fluorescenza resonance energy transfer (FRET) - base di rilevazione dell&#39;interferone-gamma (IFN-gamma) - un&#39;importante citochina infiammatoria. Varianti del DNA aptamer modificato con distanziali e biotina moiety erano immobilizzati su superfici rivestite con avidina e caratterizzate da risonanza plasmonica di superficie (SPR). Gli studi SPR ha mostrato quella immobilizzazione di aptamer via il 3&#39; estremit&agrave; ha portato la migliore associazione di IFN-gamma (K(d) = 3,44 nM). Questa variante ottimale aptamer quindi &egrave; stata utilizzata per costruire un faro da ibridare fluoroforo aptamer con un filo di oligonucleotide antisenso che trasportano un quencher. SPR studi hanno rivelato che si &egrave; verificato associazione IFN-gamma con un faro aptamer entro 15 min di analita introduzione--suggerendo dinamico sostituzione del filamento complementare quencher di molecole di IFN-gamma. Per evidenziare ulteriormente le applicazioni di biosensori, aptamer beacon molecole erano immobilizzati all&#39;interno di canali microfluidici e sfidati con diversa concentrazione dell&#39;analita. Microscopia di fluorescenza ha rivelato scarsa fluorescenza in assenza dell&#39;analita e alta fluorescenza dopo l&#39;introduzione di IFN-gamma. Importante, a differenza dei tradizionali basati su anticorpi immunodosaggi, il segnale &egrave; stato osservato direttamente all&#39;associazione di analita senza la necessit&agrave; di pi&ugrave; passaggi di lavaggio. Il faro di superficie immobilizzato aptamer aveva un range lineare da 5 a 100 nM e un limite inferiore di rilevamento di 5 nM IFN-gamma. In conclusione, abbiamo progettato un faro aptamer FRET-based per il monitoraggio di una citochina infiammatoria-IFN-gamma. In futuro, questa strategia di biosensori sar&agrave; impiegata per monitorare le dinamiche della produzione di citochine dalle cellule del sistema immunitarie.

Sviluppo di un faro di aptamer per il rilevamento di interferone-gamma.

&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A3;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x8A66;&#x85AC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6D17;&#x6D44;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x691C;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x306F;&#x9069;&#x3055;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E00;&#x65B9;&#x3067;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; - &#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;-&#x3B3;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#xFF08;IFN-&#x3B3;&#xFF09;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x90E8;&#x5206;&#x3068;&#x30B9;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x3067;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3057;&#x305F;DNA&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3067;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#xFF08;SPR&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002; SPR&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;3 &#x26;#39;&#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x304C;&#x6700;&#x826F;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;IFN-&#x3B3;&#xFF08;K&#xFF08;D&#xFF09;= 3.44 nM&#xFF09;&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30FC;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x9396;&#x3092;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SPR&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3068;IFN-&#x3B3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x691C;&#x4F53;&#x5C0E;&#x5165;&#x306E;15&#x5206;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F; -  IFN-&#x3B3;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6D88;&#x5149;&#x3001;&#x76F8;&#x88DC;&#x9396;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x691C;&#x4F53;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x5909;&#x3048;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;IFN-&#x3B3;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x5F8C;&#x306E;&#x691C;&#x4F53;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6709;&#x7121;&#x3067;&#x4F4E;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x6D17;&#x6D44;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x305B;&#x305A;&#x3001;&#x691C;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x76F4;&#x63A5;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x306F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x304C;5&#x304B;&#x3089;100 nM&#x304A;&#x3088;&#x3073;5 nM&#x306B;IFN-&#x3B3;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x4E0B;&#x9650;&#x5024;&#x304B;&#x3089;&#x7DDA;&#x5F62;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;IFN-&#x3B3;&#x306E;&#x76E3;&#x8996;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;FRET&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C06;&#x6765;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;

&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;-&#x3B3;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30B3;&#x30F3;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

&#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAE30;&#xBC18; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC804;&#xB7B5; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2DC; &#xC57D; &#xBC0F; &#xC138;&#xCC99; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xC2E4;&#xC815;&#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xAC10;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Aptamers, &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC124;&#xACC4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC870; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xC774; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C;. &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; aptamer &#xD45C;&#xC9C0; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC744; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294;-&#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860;-&#xAC10;&#xB9C8; (IFN-&#xAC10;&#xB9C8;)&#xC758; &#xD0D0;&#xC9C0;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine. Biotin moieties&#xC640; &#xC2A4;&#xD398;&#xC774;&#xC11C; &#xC218;&#xC815; DNA aptamer&#xC758; &#xBCC0;&#xC885; avidin &#xCF54;&#xD305; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; (SPR)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. SPR &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; 3&#39;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; aptamer&#xC758; &#xADF8; immobilization IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCD5C;&#xACE0; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4; &#xB05D; (K(d) = 3.44 nM). &#xC774; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; aptamer &#xBCC0;&#xC885;&#xC740; &#xB2E4;&#xC74C; fluorophore &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; aptamer&#xB97C; &#xB044;&#xB294; &#xB4E4;&#xACE0; &#xC13C;&#xC2A4; oligonucleotide &#xAC00;&#xB2E5;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD50;&#xBC30; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. SPR &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC1D;&#xD600; aptamer &#xD45C;&#xC9C0;&#xC640; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xC18C;&#xAC1C;-&#xB044;&#xB294; &#xBCF4;&#xC644; &#xAC00;&#xB2E5;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xAD50;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; 15 &#xBD84; &#xC774;&#xB0B4; &#xBC1C;&#xC0DD;. Biosensing &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB354;&#xC6B1; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; aptamer &#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790; &#xBBF8;&#xC138; &#xCC44;&#xB110; &#xB0B4; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xACE0; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xB3C4;&#xC804;. &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0;&#xB294; &#xB0AE;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; IFN-&#xAC10;&#xB9C8;&#xC758; &#xB3C4;&#xC785; &#xD6C4; &#xB192;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; &#xAE30;&#xBC18; immunoassays &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xCC99; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC9C1;&#xC811; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD45C;&#xBA74; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xC9C0; aptamer &#xC2E0;&#xD638; &#xD588;&#xB2E4; &#xC120;&#xD615; &#xBC94;&#xC704; 5&#xC5D0;&#xC11C; 100 Nm&#xC640; 5&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC758; &#xD558;&#xD55C;&#xAC12; nM IFN-&#xAC10;&#xB9C8;. &#xACB0;&#xB860;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; cytokine-IFN-&#xAC10;&#xB9C8;&#xC758; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xAE30;&#xBC18; aptamer &#xC2E0;&#xD638; &#xC124;&#xACC4;. &#xBBF8;&#xB798;&#xC5D0;&#xC774; biosensing &#xC804;&#xB7B5; cytokine &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xC5EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xACE0;&#xC6A9; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860;-&#xAC10;&#xB9C8;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; aptamer &#xBE44;&#xCF58;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;.

Tradicionales a base de anticuerpos de detecci&#xF3;n de las estrategias de afinidad emplean reactivos m&#xFA;ltiples y los pasos de lavado y no son adecuados para detecci&#xF3;n en tiempo real de la uni&#xF3;n de analitos. Apt&#xE1;meros, por otro lado, puede estar dise&#xF1;ado para controlar los eventos de uni&#xF3;n directa, en tiempo real, sin la necesidad de etiquetas secundarias. El objetivo del presente estudio fue el dise&#xF1;o de un faro apt&#xE1;mero para la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET)-basada en la detecci&#xF3;n de interfer&#xF3;n-gamma (IFN-gamma) - una citoquina inflamatoria importante. Las variantes de ADN modificados apt&#xE1;mero con restos de biotina y espaciadores fueron inmovilizados en superficies recubiertas de avidina y se caracteriza por resonancia de plasmones superficiales (SPR). Los estudios de SPR mostr&#xF3; que la inmovilizaci&#xF3;n de apt&#xE1;mero a trav&#xE9;s del extremo 3 &#x26;#39;como resultado de la mejor uni&#xF3;n de IFN-gamma (K (D) = 3,44 nM). Esta variante apt&#xE1;mero &#xF3;ptimo se utiliz&#xF3; luego para construir un faro por hibridaci&#xF3;n fluor&#xF3;foro marcado con apt&#xE1;mero con una hebra de oligonucle&#xF3;tidos antisentido llevar un extintor. Estudios SPR revel&#xF3; que el IFN-gamma de uni&#xF3;n con un faro apt&#xE1;mero ocurri&#xF3; en los 15 minutos de introducci&#xF3;n analito - sugiriendo reemplazo din&#xE1;mico de la hebra complementaria quencher-por las mol&#xE9;culas de IFN-gamma. Para resaltar a&#xFA;n m&#xE1;s las aplicaciones de los biosensores, las mol&#xE9;culas de aptamer balizas fueron inmovilizadas dentro de los canales de microfluidos y desafiado con mayor o menor concentraci&#xF3;n de analito. La microscopia de fluorescencia revel&#xF3; fluorescencia bajo en ausencia de analito y la fluorescencia de alta despu&#xE9;s de la introducci&#xF3;n de IFN-gamma. Es importante destacar que, a diferencia de tradicionales basadas en anticuerpos inmunoensayos, la se&#xF1;al se observ&#xF3; directamente tras la uni&#xF3;n del analito sin la necesidad de m&#xFA;ltiples etapas de lavado. La superficie inmovilizada apt&#xE1;mero faro ten&#xED;a un rango lineal de 5 a 100 nm y un l&#xED;mite inferior de detecci&#xF3;n de 5 nM de IFN-gamma. En conclusi&#xF3;n, hemos dise&#xF1;ado un faro apt&#xE1;mero FRET basado en el seguimiento de una citoquina inflamatoria-IFN-gamma. En el futuro, esta estrategia biosensores se emplea para controlar la din&#xE1;mica de producci&#xF3;n de citocinas por las c&#xE9;lulas inmunes.

Desarrollo de un faro apt&#xE1;mero para la detecci&#xF3;n de interfer&#xF3;n-gamma

&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x4F5C;&#x6BD2;&#x7269;&#x5B66;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x809D;&#x4EE3;&#x5B55;&#x6BCD;&#x4EB2;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x7EF4;&#x62A4;&#x529F;&#x80FD;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x8BFE;&#x9898;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x8BD5;&#x56FE;&#x4E3A;&#x4E09;&#x7EF4;&#x652F;&#x67B6;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x57FA;&#x4E8E;&#x809D;&#x7D20;&#x7684;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x3002;&#x539F;&#x4EE3;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6DF7;&#x5408;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x5DEF;&#x57FA;&#x809D;&#x7D20;&#x548C;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x916F; poly(ethylene glycol) (PEG) &#x9884;&#x805A;&#x7269;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x3002;&#x63D0;&#x9AD8; 25 &#x5EA6;&#x81F3;&#x6444;&#x6C0F; 37 &#x5EA6;&#x7684;&#x6C14;&#x6E29;&#x5F00;&#x59CB;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEF;&#x57FA;&#x548C;&#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x916F;&#x4E2D;&#x95F4;&#x76F8;&#x9694;&#x7684;&#x8FC8;&#x514B;&#x5C14;&#x52A0;&#x6210;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5305;&#x5D4C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x809D;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3001; &#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x5C3F;&#x7D20;&#x3001; &#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x809D;&#x7D20;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x662F;&#x975E;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x809D;&#x810F;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x809D;&#x7D20;&#x7684;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x5305;&#x57CB;&#x5728;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x540E;&#x4FDD;&#x6301;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x809D;&#x7D20;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x589E;&#x957F;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F1A;&#x5C06;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (HGF)-&#x91CD;&#x8981;&#x809D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5206;&#x5B50;&#x7EB3;&#x5165;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x3002;&#x4ECE;&#x809D;&#x7D20;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x57FA;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x91CA;&#x653E;&#x4E86;&#x5206;&#x6790;&#x4F7F;&#x7528;&#x94FE;&#x63A5;&#x7684;&#x9176;&#x514D;&#x75AB;&#x5206;&#x6790; (ELISA)&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x662F;&#x4EE5;&#x53D7;&#x63A7;&#x65B9;&#x5F0F;&#x4EC5;&#x6709; 40%&#x7684; GF &#x5206;&#x5B50;&#x91CA;&#x653E;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684; 30 &#x5929;&#x540E;&#x4F1A;&#x51FA;&#x73B0;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x542B;&#x6709;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x5C55;&#x51FA;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x5355;&#x76F8;&#x6BD4;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7684;&#x7EA7;&#x522B;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x809D;&#x7D20;&#x7684;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x662F;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x7684;&#x77E9;&#x9635;&#x5C01;&#x88C5;&#x548C;&#x7EF4;&#x62A4;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#x6587;&#x5316;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x5C06;&#x6765;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x60F3;&#x91C7;&#x7528;&#x57FA;&#x4E8E;&#x809D;&#x7D20;&#x7684; hyrogels &#x4F5C;&#x4E3A;&#x77E9;&#x9635;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x8F66;&#x8F86;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x3002;

&#x809D;&#x7D20;&#x57FA;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x77E9;&#x9635;&#x5C01;&#x88C5;&#x548C;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57F9;&#x517B;&#x3002;

Primary hepatocytes are commonly used as liver surrogates in toxicology and tissue engineering fields, therefore, maintenance of functional hepatocytes in vitro is an important topic of investigation. This paper sought to characterize heparin-based hydrogel as a three-dimensional scaffold for hepatocyte culture. The primary rat hepatocytes were mixed with a prepolymer solution comprised of thiolated heparin and acrylated poly(ethylene glycol) (PEG). Raising the temperature from 25 degrees to 37 degrees C initiated Michael addition reaction between the thiol and acrylated moieties and resulted in formation of hydrogel with entrapped cells. Analysis of liver-specific products, albumin and urea, revealed that the heparin hydrogel was non-cytotoxic to cells and, in fact, promoted hepatic function. Hepatocytes entrapped in the heparin-based hydrogel maintained high levels of albumin and urea synthesis after three weeks in culture. Because heparin is known to bind growth factors, we incorporated hepatocyte growth factor (HGF)-an important liver signaling molecule - into the hydrogel. HGF release from heparin hydrogel matrix was analyzed using enzyme linked immunoassay (ELISA) and was shown to occur in a controlled manner with only 40% of GF molecules released after 30 days in culture. Importantly, hepatocytes cultured within HGF-containing hydrogels exhibited significantly higher levels of albumin and urea synthesis compared to cells cultured in the hydrogel alone. Overall, heparin-based hydrogel showed to be a promising matrix for encapsulation and maintenance of difficult-to-culture primary hepatocytes. In the future, we envision employing heparin-based hyrogels as matrices for in vitro differentiation of hepatocytes or stem cells and as vehicles for transplantation of these cells.

Heparin-based hydrogel as a matrix for encapsulation and cultivation of primary hepatocytes.

H&#xE9;patocytes primaires sont couramment utilis&#xE9;s comme substituts du foie dans les domaines d&#x26;#39;ing&#xE9;nierie de la toxicologie et des tissus, par cons&#xE9;quent, l&#x26;#39;entretien des h&#xE9;patocytes fonctionnels in vitro est un sujet important de l&#x26;#39;enqu&#xEA;te. Cet article cherche &#xE0; caract&#xE9;riser &#xE0; base d&#x26;#39;h&#xE9;parine hydrogel comme un &#xE9;chafaudage tridimensionnel pour la culture des h&#xE9;patocytes. Les h&#xE9;patocytes primaires de rat ont &#xE9;t&#xE9; m&#xE9;lang&#xE9;s avec une solution de pr&#xE9;polym&#xE8;re compos&#xE9; de l&#x26;#39;h&#xE9;parine et thiol&#xE9; acryl&#xE9;e poly (&#xE9;thyl&#xE8;ne glycol) (PEG). &#xC9;lever la temp&#xE9;rature de 25 degr&#xE9;s &#xE0; 37 degr&#xE9;s C de r&#xE9;action d&#x26;#39;addition de Michael initi&#xE9;e entre les thiol et acryl&#xE9; et conduit &#xE0; la formation d&#x26;#39;un hydrogel avec des cellules pi&#xE9;g&#xE9;es. Analyse du foie des produits sp&#xE9;cifiques, de l&#x26;#39;albumine et d&#x26;#39;ur&#xE9;e, a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que l&#x26;#39;hydrogel h&#xE9;parine &#xE9;tait non cytotoxique pour les cellules et, en fait, la promotion de la fonction h&#xE9;patique. H&#xE9;patocytes pi&#xE9;g&#xE9;s dans l&#x26;#39;hydrogel &#xE0; base d&#x26;#39;h&#xE9;parine ont maintenu des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de synth&#xE8;se de l&#x26;#39;albumine et d&#x26;#39;ur&#xE9;e, apr&#xE8;s trois semaines de culture. Parce h&#xE9;parine est connu pour se lier les facteurs de croissance, on a incorpor&#xE9; un facteur de croissance des h&#xE9;patocytes (HGF)-une mol&#xE9;cule de signalisation du foie importante - dans l&#x26;#39;hydrogel. Communiqu&#xE9; de HGF de la matrice d&#x26;#39;hydrogel h&#xE9;parine a &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;e en utilisant dosage immunoenzymatique (ELISA) et a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; de se produire d&#x26;#39;une mani&#xE8;re contr&#xF4;l&#xE9;e, avec seulement 40% des mol&#xE9;cules GF lib&#xE9;r&#xE9;s apr&#xE8;s 30 jours de culture. Il est important, h&#xE9;patocytes cultiv&#xE9;s dans HGF-hydrogels contenant pr&#xE9;sentaient des niveaux significativement plus &#xE9;lev&#xE9;s de synth&#xE8;se de l&#x26;#39;albumine et d&#x26;#39;ur&#xE9;e par rapport &#xE0; des cellules cultiv&#xE9;es dans l&#x26;#39;hydrogel seul. Dans l&#x26;#39;ensemble, &#xE0; base d&#x26;#39;h&#xE9;parine hydrogel a montr&#xE9; &#xEA;tre une matrice prometteur pour l&#x26;#39;encapsulation et la maintenance de difficile-&#xE0;-culture des h&#xE9;patocytes primaires. Dans l&#x26;#39;avenir, nous envisageons d&#x26;#39;employer l&#x26;#39;h&#xE9;parine avant la hyrogels comme matrices pour la diff&#xE9;renciation in vitro des h&#xE9;patocytes ou les cellules souches et que les v&#xE9;hicules destin&#xE9;s &#xE0; la transplantation de ces cellules.

&#xC0; base d&#x26;#39;h&#xE9;parine hydrogel comme matrice pour l&#x26;#39;encapsulation et culture d&#x26;#39;h&#xE9;patocytes primaires

Prim&auml;re Hepatozyten werden h&auml;ufig als Leber Surrogate in Toxikologie und Tissue-engineering Felder, Wartung von in-vitro-funktionale Hepatozyten ist daher ein wichtiges Thema der Untersuchung. Dieses Papier wollte Heparin basierenden Hydrogel als ein dreidimensionales Ger&uuml;st f&uuml;r Hepatozyten Kultur charakterisieren. Die prim&auml;re Ratte-Hepatozyten wurden mit einer Pr&auml;polymer-L&ouml;sung bestehend aus Thiolated Heparin und acrylated Poly(ethylene glycol) (PEG) gemischt. Erh&ouml;hung der Temperatur von 25 Grad auf 37 Grad C Michael Hinzuf&uuml;gung Reaktion zwischen dem Thiol und acrylated Adsorptionseigenschaften eingeleitet und f&uuml;hrten Bildung Hydrogel mit eingeschlossenen Zellen. Analyse der Leber-spezifische Produkte, Albumin und Harnstoff, ergab, dass die Heparin-Hydrogel nicht zytotoxischen Zellen und in der Tat gef&ouml;rdert Leberfunktion. Gefangen in der Heparin-basierte Hydrogel Hepatozyten gepflegt hohe Konzentrationen von Albumin und Harnstoff-Synthese nach drei Wochen in der Kultur. Da Heparin Wachstumsfaktoren binden bekannt ist, wir Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGF) - eine wichtige Leber signalisieren Molek&uuml;l - in das Hydrogel aufgenommen. HGF-Release von Heparin Hydrogel Matrix war mit verbunden Enzym-Immunoassay (ELISA) analysiert und wurde gezeigt, dass eine kontrollierte mit nur 40 % GF-Molek&uuml;le, die nach 30 Tagen in Kultur freigegeben auftreten. Wichtig ist, ausgestellt Hepatozyten kultiviert im HGF-haltigen Hydrogele deutlich h&ouml;here Ebenen von Albumin und Harnstoff-Synthese, die im Vergleich zu Zellen kultiviert in den Hydrogel allein. Insgesamt, Heparin-basierte Hydrogel zeigte vielversprechende Matrix f&uuml;r die Kapselung und Wartung der prim&auml;re Hepatozyten schwierig-zu-Kultur zu sein. In Zukunft vorstellen wir Heparin-basierte Hyrogels besch&auml;ftigt, als Matrizen f&uuml;r in-vitro-Differenzierung der Hepatozyten oder Stammzellen sowie Fahrzeuge f&uuml;r die Transplantation dieser Zellen.

Heparin basierenden Hydrogel als Matrix f&uuml;r die Kapselung und Anbau von prim&auml;ren Hepatozyten.

Epatociti primari sono comunemente usati come surrogati del fegato in tossicologia e campi di ingegneria del tessuto, quindi, manutenzione di epatociti funzionali in vitro &egrave; un importante argomento di indagine. Questa carta ha cercato di caratterizzare idrogel a base di eparina come un&#39;impalcatura tridimensionale per la cultura degli epatociti. Gli epatociti di ratto primario sono stati mescolati con una prepolimero soluzione composta da tiolate eparina e processi poly(ethylene glycol) (PEG). Alzando la temperatura da 25 gradi a 37 gradi C ha avviato la reazione di addizione di Michael tra il tiolo e processi moiety e portato nella formazione di idrogel con cellule intrappolate. Analisi di prodotti specifici del fegato, l&#39;albumina e urea, ha rivelato che l&#39;eparina hydrogel era non citotossiche per le cellule e, infatti, promosse la funzione epatica. Epatociti intrappolati nell&#39;idrogel a base di eparina mantenuto alti livelli di albumina e urea di sintesi dopo tre settimane nella cultura. Perch&eacute; eparina &egrave; conosciuto per legare i fattori di crescita, abbiamo incorporato il fattore di crescita degli epatociti (HGF) - un fegato importante molecola di segnalazione - nell&#39;idrogel. HGF rilascio dalla matrice di idrogel di eparina &egrave; stata analizzata utilizzando legato immunoenzimatico (ELISA) e fu dimostrato che si verificano in modo controllato con solo il 40% delle molecole GF rilasciato dopo 30 giorni nella cultura. Soprattutto, epatociti coltivati all&#39;interno di idrogel contenenti HGF esposte significativamente pi&ugrave; elevati livelli di albumina e urea di sintesi rispetto alle cellule coltivate nell&#39;idrogel da solo. Nel complesso, basato su eparina idrogel ha dimostrato di essere una matrice promettente per l&#39;incapsulamento e la manutenzione di difficile--cultura epatociti primari. In futuro, immaginiamo che impiegano eparina-based hyrogels come matrici per la differenziazione in vitro di epatociti o cellule staminali e come veicoli per il trapianto di queste cellule.

Idrogel a base di eparina come matrice per l&#39;incapsulamento e la coltivazione di epatociti primari.

&#x521D;&#x4EE3;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068;&#x7D44;&#x7E54;&#x5DE5;&#x5B66;&#x5206;&#x91CE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x809D;&#x81D3;&#x30B5;&#x30ED;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x306F;&#x3001;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30C8;&#x30D4;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x8AD6;&#x6587;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x8DB3;&#x5834;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x521D;&#x4EE3;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB;&#x5316;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x30DD;&#x30EA;&#xFF08;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#xFF09;&#xFF08;PEG&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30EC;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x3068;&#x6DF7;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 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- &#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;HGF&#xFF09;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x809D;&#x81D3;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x5206;&#x5B50;&#x304C;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;HGF&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#xFF08;ELISA&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x3001;30&#x65E5;&#x5F8C;&#x306B;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;GF&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x308F;&#x305A;&#x304B;40&#xFF05;&#x3067;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;HGF&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x5185;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5C3F;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x96E3;&#x57F9;&#x990A;&#x521D;&#x4EE3;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x884C;&#x5217;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306F;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8ECA;&#x4E21;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x884C;&#x5217;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;hyrogels&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x601D;&#x3044;&#x63CF;&#x304F;&#x3002;

&#x521D;&#x4EE3;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AB;&#x30D7;&#x30BB;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x683D;&#x57F9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D8;&#x30D1;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;

&#xAE30;&#xBCF8; hepatocytes &#xB3C5;&#xADF9;&#xBB3C;&#xACFC; &#xD544;&#xB4DC; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xAC04; &#xB300;&#xB9AC; &#xBAA8; &#xC54C;&#xC120;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; &#xAE30;&#xB2A5; hepatocytes &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC0AC;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC81C;. &#xC774; &#xC885;&#xC774; &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xAE30;&#xBC18; hydrogel hepatocyte &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBE44; &#xACC4;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xACE0;&#xC790; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xC950; hepatocytes prepolymer &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; thiolated &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0;&#xACFC; acrylated poly(ethylene glycol) (&#xB098;&#xBB34; &#xBABB;)&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xD63C;&#xD569; &#xD588;&#xB2E4;. 25&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; 37&#xB3C4; C&#xC758; &#xC628;&#xB3C4; &#xB192;&#xC774; thiol acrylated moieties &#xC0AC;&#xC774; &#xB9C8;&#xC774;&#xD074; &#xCD94;&#xAC00; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xBD09; &#xC140; hydrogel&#xC758; &#xD615;&#xC131; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xAC04; &#xAD00;&#xB828; &#xC81C;&#xD488;, &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC;, &#xC694;&#xC18C;, &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; hydrogel &#xBE44; cytotoxic &#xC140; &#xD558; &#xACE0;, &#xC0AC;&#xC2E4;, &#xAC04;&#xC7A5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC2B9;&#xC9C4;. Hepatocytes &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xAE30;&#xBC18; hydrogel &#xC18D; &#xBB38;&#xD654; 3 &#xC8FC; &#xD6C4; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xBC0F; &#xC694;&#xC18C; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;. &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; hydrogel&#xC5D0; hepatocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (HGF)-&#xC2E0;&#xD638; &#xBD84;&#xC790;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC04;-&#xD1B5;&#xD569;. &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; hydrogel &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; HGF &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD6A8;&#xC18C; immunoassay (ELISA)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; 30 &#xC77C; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB41C; GF &#xBD84;&#xC790;&#xC758; 40%&#xB9CC; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; HGF hydrogels &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xC591; hepatocytes &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xBC0F; &#xC694;&#xC18C; &#xD569;&#xC131; &#xD63C;&#xC790; hydrogel&#xC758; &#xBC30;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xAE30;&#xBC18; hydrogel &#xCEA1;&#xC290;&#xD654; &#xBC0F; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xBB38;&#xD654; &#xAE30;&#xBCF8; hepatocytes&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC218; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xB798;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; hepatocytes &#xB610;&#xB294; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758;&#xC774; &#xC2DD; &#xC704;&#xD55C; &#xCC28;&#xB7C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xAE30;&#xBC18; hyrogels&#xC744; &#xCC44;&#xC6A9; &#xACC4;&#xD68D;.

&#xCEA1;&#xC290;&#xD654; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; hepatocytes&#xC758; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xB85C; &#xD5E4; &#xD30C; &#xB9B0; &#xAE30;&#xBC18; hydrogel.

Hepatocitos primarios se utilizan como sustitutos del h&#xED;gado en los campos de la ingenier&#xED;a de toxicolog&#xED;a y tejidos, por lo tanto, el mantenimiento de los hepatocitos funcionales in vitro es un tema importante de investigaci&#xF3;n. Este trabajo busc&#xF3; caracterizar heparina basado hidrogel como un andamio tridimensional para el cultivo de hepatocitos. Los hepatocitos primarios de rata fueron mezclados con una soluci&#xF3;n de prepol&#xED;mero compuesto de heparina tiolado y acrilado poli (etileno glicol) (PEG). El aumento de la temperatura de 25 grados a 37 grados C reacci&#xF3;n iniciada adici&#xF3;n de Michael entre los restos tiol y acrilado y result&#xF3; en la formaci&#xF3;n de hidrogel con c&#xE9;lulas inmovilizadas. An&#xE1;lisis de productos espec&#xED;ficos del h&#xED;gado, alb&#xFA;mina y urea, revel&#xF3; que el hidrogel heparina no era citot&#xF3;xico para las c&#xE9;lulas y, de hecho, promovido funci&#xF3;n hep&#xE1;tica. Los hepatocitos atrapadas en el hidrogel heparina basado mantenido altos niveles de s&#xED;ntesis de alb&#xFA;mina y urea despu&#xE9;s de tres semanas en cultivo. Debido a que la heparina se sabe que se unen los factores de crecimiento, hemos incorporado el factor de crecimiento de hepatocitos (HGF)-una mol&#xE9;cula de se&#xF1;alizaci&#xF3;n del h&#xED;gado importantes - en el hidrogel. La liberaci&#xF3;n de la matriz de hidrogel HGF heparina se analizaron mediante inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA) y fue demostrado que se producen de una manera controlada, con s&#xF3;lo el 40% de las mol&#xE9;culas de GF liberados despu&#xE9;s de 30 d&#xED;as de cultivo. Es importante destacar que los hepatocitos cultivados dentro de HGF que contienen hidrogeles exhiben niveles significativamente m&#xE1;s altos de la s&#xED;ntesis de alb&#xFA;mina y urea en comparaci&#xF3;n con las c&#xE9;lulas cultivadas en el hidrogel solo. En general, la heparina basado hidrogel demostr&#xF3; ser una matriz prometedora para la encapsulaci&#xF3;n y el mantenimiento de los hepatocitos dif&#xED;ciles de cultivo primario. En el futuro, prevemos empleando heparina basados &#x200B;&#x200B;hyrogels como matrices para la diferenciaci&#xF3;n in vitro de los hepatocitos o c&#xE9;lulas madre y como veh&#xED;culos para el trasplante de estas c&#xE9;lulas.

La heparina basado en hidrogel como una matriz para la encapsulaci&#xF3;n y el cultivo de hepatocitos primarios

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x5728;&#x4E8E;&#x8C03;&#x67E5;&#x671F;&#x95F4;&#x9152;&#x7CBE;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x809D;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;GF&#xFF09; &#x6570;&#x7EC4;&#x3002;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (HGF) &#x548C;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D; (BMP) 7 &#x662F;&#x80F6;&#x539F;&#x86CB;&#x767D; (I) &#x4E0E;&#x6DF7;&#x5408;&#x548C;&#x7F06;&#x7EF3;&#x6253;&#x5370;&#x5230;&#x6807;&#x51C6;&#x73BB;&#x7483;&#x5E7B;&#x706F;&#x7247;&#x521B;&#x5EFA; 500 microm &#x76F4;&#x5F84;&#x70B9;&#x7684;&#x6570;&#x7EC4;&#x3002;&#x539F;&#x4EE3;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x76F4;&#x64AD;&#x4E0A;&#x5F62;&#x6210;&#x7FA4;&#x96C6;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x5230;&#x5E95;&#x5C42;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x70B9;&#x5BF9;&#x5E94;&#x7684;&#x6570;&#x7EC4;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6570;&#x7EC4;&#x7136;&#x540E;&#x53D7;&#x4F24;&#x6587;&#x5316;&#x7531;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; 100 &#x6BEB;&#x7C73;&#x4E59;&#x9187;&#x4E3A; 48 h.&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728; GF &#x70B9;&#x4E0A;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x8F83;&#x5C11;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7136;&#x540E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80F6;&#x539F;&#x53EA;&#x70B9;&#x3002;&#x800C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1; (17.3%) &#x8BA4;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x80F6;&#x539F;&#x9635;&#x5217;&#x4E0A;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;/&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x86CB;&#x767D; 7/&#x80F6;&#x539F;&#x70B9;&#x89C2;&#x5BDF;&#x81F3;&#x5C11;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1; (TUNEL &#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4F30;&#x8BA1;&#x7684; 0.3%&#xFF09;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x9152;&#x7CBE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6253;&#x5370; GF &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x9632;&#x6B62;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3001; &#x5370;&#x653F;&#x5E9C;&#x98DE;&#x884C;&#x670D;&#x52A1;&#x961F;&#x8D21;&#x732E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x8868;&#x578B;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x671F;&#x95F4;&#x9152;&#x7CBE;&#x635F;&#x4F24;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FDD;&#x62A4;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE; E-&#x9499;&#x7C98;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;GF &#x82AF;&#x7247;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x8C03;&#x67E5;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x809D;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x5F02;&#x578B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8981;&#x5F3A;&#x8C03;&#x8FD9;&#x4E00;&#x70B9;&#xFF0C;&#x661F;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;-&#x975E;&#x5B9E;&#x8D28;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#x53C2;&#x4E0E;-&#x88AB;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;/&#x80F6;&#x539F;&#x6216;&#x4EC5;&#x80F6;&#x539F;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5168;&#x5C42;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x4E59;&#x9187;&#x8DDF; RT-PCR &#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x661F;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FDD;&#x62A4;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E00;&#x8D77;&#x5C45;&#x4F4F;&#x4E86;&#x5927;&#x5927;&#x4E0D;&#x6FC0;&#x6D3B; (&#x5C11;&#x809D;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;) &#x4E0E;&#x63A7;&#x4EF6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; GF &#x82AF;&#x7247;&#x683C;&#x5F0F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6297;&#x809D;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5316;&#xFF0C;&#x6297;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8C03;&#x67E5;&#x5982;&#x4F55;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x8C03;&#x5236;&#x5F02;&#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x57F9;&#x517B;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x86CB;&#x767D; 7 &#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x9152;&#x7CBE;&#x635F;&#x4F24;&#x5B9A;&#x6027;&#x4FDD;&#x62A4;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5370;&#x5237;&#x9635;&#x5217;&#x4E0A;&#x3002;

The goal of the present study was to investigate hepato-protective effects of growth factor (GF) arrays during alcohol injury. Hepatocyte growth factor (HGF) and bone morphogenetic protein (BMP)7 were mixed with collagen (I) and robotically printed onto standard glass slides to create arrays of 500 microm diameter spots. Primary rat hepatocytes were seeded on top of the arrays forming clusters corresponding in size to the underlying protein spots. Cell arrays were then injured in culture by exposure to 100 mm ethanol for 48 h. Hepatocytes residing on GF spots were found to have less apoptosis then cells cultured on collagen-only spots. Least apoptosis (0.3% as estimated by TUNEL assay) was observed on HGF/BMP7/collagen spots whereas most apoptosis (17.3%) was seen on collagen-only arrays. Interestingly, the extent of alcohol-induced apoptosis in hepatocytes varied based on the concentration of printed GF. In addition to preventing apoptosis, printed GFs contributed to maintenance of epithelial phenotype during alcohol injury as evidenced by higher levels of E-cadherin expression in HGF-protected hepatocytes. Importantly, GF microarrays could be used to investigate heterotypic interactions in the context of liver injury. To highlight this, stellate cells - nonparenchymal liver cells involved in fibrosis - were added to hepatocytes residing on arrays of either HGF/collagen or collagen-only spots. Exposure of these cocultures to ethanol followed by RT-PCR analysis revealed that stellate cells residing alongside HGF-protected hepatocytes were significantly less activated (less fibrotic) compared to controls. Overall, our results demonstrate that GF microarray format can be used to screen anti-fibrotic and anti-apoptotic effects of growth factors as well as to investigate how signals delivered to a specific cell type modulate heterotypic cellular interactions.

Cultivating hepatocytes on printed arrays of HGF and BMP7 to characterize protective effects of these growth factors during in vitro alcohol injury.

L&#x26;#39;objectif de la pr&#xE9;sente &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;enqu&#xEA;ter sur h&#xE9;pato-protecteurs des effets de facteurs de croissance (GF) au cours des tableaux des blessures d&#x26;#39;alcool. Facteur de croissance des h&#xE9;patocytes (HGF) et prot&#xE9;ines morphog&#xE9;n&#xE9;tiques osseuses (BMP) 7 ont &#xE9;t&#xE9; m&#xE9;lang&#xE9;s avec du collag&#xE8;ne (I) et robotique imprim&#xE9;s sur des lames de verre standard pour cr&#xE9;er des tableaux de 500 places de diam&#xE8;tre microM. H&#xE9;patocytes primaires de rat ont &#xE9;t&#xE9; ensemenc&#xE9;es au-dessus des tableaux formant des clusters correspondant en taille aux spots de prot&#xE9;ines sous-jacents. R&#xE9;seaux de cellules ont ensuite &#xE9;t&#xE9; bless&#xE9;s dans la culture par l&#x26;#39;exposition &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;thanol &#xE0; 100 mm pour 48 h. H&#xE9;patocytes r&#xE9;sidant sur des spots GF ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; avoir moins de l&#x26;#39;apoptose, puis les cellules cultiv&#xE9;es sur du collag&#xE8;ne-seulement des taches. Au moins l&#x26;#39;apoptose (0,3% selon les estimations de TUNEL test) a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e sur des spots HGF/BMP7/collagen alors que la plupart apoptose (17,3%) a &#xE9;t&#xE9; vu sur le collag&#xE8;ne-seulement des tableaux. Int&#xE9;ressant, la mesure de l&#x26;#39;apoptose induite par l&#x26;#39;alcool dans les h&#xE9;patocytes varie sur la base de la concentration de GF imprim&#xE9;. En plus de pr&#xE9;venir l&#x26;#39;apoptose, imprim&#xE9; FG contribu&#xE9; au maintien de ph&#xE9;notype &#xE9;pith&#xE9;lial au cours des blessures d&#x26;#39;alcool comme en t&#xE9;moignent les niveaux plus &#xE9;lev&#xE9;s de la E-cadh&#xE9;rine dans l&#x26;#39;expression de HGF-prot&#xE9;g&#xE9;es h&#xE9;patocytes. Il est important, les puces GF pourrait &#xEA;tre utilis&#xE9;e pour &#xE9;tudier les interactions h&#xE9;t&#xE9;rotypiques dans le contexte d&#x26;#39;une l&#xE9;sion h&#xE9;patique. Pour mettre en &#xE9;vidence cela, les cellules &#xE9;toil&#xE9;es du foie - les cellules non parenchymateuses impliqu&#xE9;s dans la fibrose, ont &#xE9;t&#xE9; ajout&#xE9;s &#xE0; h&#xE9;patocytes r&#xE9;sidant sur les tableaux de soit HGF / collag&#xE8;ne ou de collag&#xE8;ne-que des taches. L&#x26;#39;exposition de ces cocultures &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;thanol suivie d&#x26;#39;une RT-PCR a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que les cellules &#xE9;toil&#xE9;es du r&#xE9;sidant aux c&#xF4;t&#xE9;s de HGF-prot&#xE9;g&#xE9;es h&#xE9;patocytes &#xE9;taient significativement moins actif (moins fibreux) par rapport aux t&#xE9;moins. Dans l&#x26;#39;ensemble, nos r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que GF puce de format peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour cribler des effets anti-fibrotiques et anti-apoptotique de facteurs de croissance ainsi que d&#x26;#39;&#xE9;tudier comment les signaux livr&#xE9;s &#xE0; un type de cellule sp&#xE9;cifique de moduler les interactions cellulaires h&#xE9;t&#xE9;rotypiques.

Cultiver h&#xE9;patocytes sur les tableaux imprim&#xE9;s de HGF et BMP7 pour caract&#xE9;riser les effets protecteurs de ces facteurs de croissance dans les cours de blessures alcool in vitro

Das Ziel der vorliegenden Studie war es, Hepato-sch&uuml;tzende Effekte von Wachstumsfaktor (GF) Arrays w&auml;hrend Alkohol Verletzungen zu untersuchen. Hepatozyten-Wachstumsfaktor (HGF) und Knochen morphogenetic Proteins (BMP) 7 waren gemischt mit Kollagen (I) und robotically gedruckt auf Norm Objekttr&auml;ger Arrays 500 Microm Durchmesser Spots erstellt. Prim&auml;re Ratte Hepatozyten wurden am Anfang des Arrays bilden Cluster entspricht in der Gr&ouml;&szlig;e zu den zugrunde liegenden Proteinspot ausges&auml;t. Zelle Arrays wurden dann in der Kultur durch die Exposition gegen&uuml;ber 100 mm &Auml;thanol verletzt, f&uuml;r 48 h. Hepatozyten hier auf GF-Spots gefunden wurden, haben weniger Apoptosis dann Zellen kultiviert auf nur-Kollagen-Spots. Zumindest Apoptosis (0.3 % von TUNEL-Test gesch&auml;tzten) wurde am HGF/BMP7/Kollagen Flecken beobachtet, w&auml;hrend die meisten Apoptosis (17,3 %) auf nur-Kollagen-Arrays gesehen wurde. Interessanterweise basiert das Ausma&szlig; der Alkohol-induzierten Apoptose in Hepatozyten variiert die Konzentration der gedruckten GF. Neben verhindern Apoptosis, gedruckt GFs trugen zu Wartung der epithelialen Ph&auml;notyps w&auml;hrend Alkohol Verletzungen wie h&ouml;here E-Cadherin Ausdruck im HGF-gesch&uuml;tzte Hepatozyten belegt. Wichtig ist, k&ouml;nnte GF Microarrays zur heterotypischen Interaktionen im Zusammenhang mit der Sch&auml;digung der Leber zu untersuchen. Um dies zu markieren, wurden - Nonparenchymal Leber Zellen beteiligt Fibrose - stellate Cells Hepatozyten auf Arrays von HGF/Kollagen oder Kollagen nur Flecken hinzugef&uuml;gt. Exposition von diesen Kokulturen zu Ethanol, gefolgt von RT-PCR-Analyse ergab, dass stellate wohnten neben Hepatozyten HGF-gesch&uuml;tzten Zellen deutlich weniger (weniger fibrotische) im Vergleich zu Kontrollen aktiviert waren. Insgesamt zeigen unsere Ergebnisse, dass GF Microarray-Format der Bildschirm anti-fibrotic dient und Anti-apoptotische Wirkung von Wachstumsfaktoren sowie zu untersuchen, wie die Signale an einem bestimmten Zelltyp &uuml;bermittelt heterotypischen zellul&auml;re Interaktionen modulieren.

Anbau von Hepatozyten auf gedruckten Arrays von HGF und BMP7, sch&uuml;tzende Wirkung dieser Faktoren Wachstum w&auml;hrend der in-vitro-Alkohol-Sch&auml;digung zu charakterisieren.

L&#39;obiettivo del presente studio era di indagare gli effetti epato-protettivo del fattore di crescita (GF) matrici durante l&#39;infortunio di alcol. Fattore di crescita degli epatociti (HGF) e bone morphogenetic protein (BMP) 7 sono stati mescolati con il collagene (I) e robotizzato stampate su vetrini standard per creare matrici di 500 punti di diametro microm. Epatociti di ratto primario sono stati seminati in cima le matrici formando ammassi corrispondente nella dimensione per le macchie di proteine sottostante. Cellule matrici furono feriti poi nella cultura da esposizione all&#39;etanolo 100 mm per 48 h. epatociti che risiedono su macchie di GF sono stati trovati per avere meno apoptosi poi cellule coltivate su macchie solo collagene. Macchie di HGF/BMP7/collagene &egrave; stata osservata almeno apoptosi (0,3% come valutato mediante saggio TUNEL) considerando che la maggior parte apoptosi (17,3%) &egrave; stato visto su matrici solo collagene. &Egrave; interessante notare che, nella misura di apoptosi indotta da alcol in epatociti variati basato sulla concentrazione del GF stampato. Oltre evitando apoptosis, stampato GFs contribuito alla manutenzione della fenotipo epiteliale durante l&#39;infortunio di alcool come evidenziato dai pi&ugrave; alti livelli di espressione di E-caderina in epatociti HGF-protetto. Soprattutto, microarrays del GF potrebbe essere utilizzato per indagare le interazioni heterotypic nel contesto del danno epatico. Per evidenziare questo, le cellule stellate - nonparenchymal fegato cellule coinvolte nella fibrosi - sono stati aggiunti gli epatociti che risiedono su matrici di HGF/collagene o macchie solo collagene. L&#39;esposizione di questi cocultures a etanolo seguita da analisi di RT-PCR ha rivelato che le cellule stellate che risiedono a fianco di epatociti HGF-protetti erano significativamente meno attivate (meno fibrotico) rispetto ai controlli. Nel complesso, i nostri risultati dimostrano che GF microarray formato pu&ograve; essere utilizzato a schermo anti-fibrotic e anti-apoptotic effetti di fattori di crescita cos&igrave; da indagare come segnali consegnato a un tipo di cella specifici modulano le interazioni cellulari heterotypic.

Coltivazione di epatociti su matrici stampate di HGF e BMP7 per caratterizzare gli effetti protettivi di questi fattori di crescita durante l&#39;infortunio di alcool in vitro.

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x6642;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;GF&#xFF09;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x809D;&#xB7;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;HGF&#xFF09;&#x3068;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;BMP&#xFF09;7&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#xFF08;I&#xFF09;&#x3068;&#x6DF7;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x30ED;&#x30DC;&#x30C3;&#x30C8;&#x5236;&#x5FA1;500&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x4E0A;&#x306B;&#x5370;&#x5237;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x521D;&#x4EE3;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x4E0A;&#x306B;&#x64AD;&#x7A2E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;48&#x6642;&#x9593;&#x3001;100 mm&#x306E;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x3002; GF&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x4E0A;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x809D;&#x200B;&#x200B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;&#x6B21;&#x306B;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#xFF08;17.3&#xFF05;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#xFF08;TUNEL&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898B;&#x7A4D;&#x3082;&#x3089;&#x308C;&#x305F;0.3&#xFF05;&#xFF09;HGF/BMP7/collagen&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x5370;&#x5237;&#x3055;&#x308C;&#x305F;GF&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5909;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HGF&#x3067;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;E-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x5370;&#x5237;&#x3055;&#x308C;&#x305F;GFS&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x6642;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x7DAD;&#x6301;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;GF&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x7570;&#x578B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x661F;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE; - &#x7DDA;&#x7DAD;&#x75C7;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x975E;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE; - &#x306F;HGF /&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x4E0A;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x809D;&#x200B;&#x200B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; RT-PCR&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x304C;HGF&#x3067;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x661F;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#xFF08;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5316;&#xFF09;&#x304C;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;GF&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x7570;&#x578B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6297;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x5316;&#x3068;&#x6297;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x4F53;&#x5916;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;HGF&#x3068;BMP7&#x306E;&#x5370;&#x5237;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x4E0A;&#x306E;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x80B2;&#x6210;

&#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC54C;&#xCF54;&#xC62C; &#xBD80;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (GF) &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; hepato &#xBCF4;&#xD638; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. Hepatocyte &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (HGF)&#xC640; &#xBF08; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (BMP) 7&#xB294; (I) &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xD63C;&#xD569; robotically 500 microm &#xC9C1;&#xACBD; &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xD45C;&#xC900; &#xC720;&#xB9AC; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC778;&#xC1C4; &#xB41C;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xC950; hepatocytes &#xAE30;&#xBCF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBA85;&#xC18C; &#xD06C;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC5B4;&#xB808;&#xC774; &#xC704;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xB4DC; &#xD588;&#xB2E4;. 48 H. Hepatocytes GF &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC801;&#xC740; apoptosis &#xB2E4;&#xC74C; &#xC140; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC804;&#xC6A9; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC140; &#xBC30;&#xC5F4; &#xD588;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xC74C; 100mm &#xC5D0;&#xD0C4;&#xC62C;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xC0C1;. &#xBC18;&#xBA74; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; apoptosis (17.3%) &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xB9CC; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4; HGF/BMP7/&#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; apoptosis &#xCD94;&#xC815; &#xB4F1;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xC11C; (0.3%) &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xB2E4;&#xC591; hepatocytes&#xC5D0; apoptosis &#xC54C;&#xCF54;&#xC62C; &#xC720;&#xBC1C;&#xC758; &#xBC94;&#xC704; &#xC778;&#xC1C4; GF&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;. Apoptosis, GFs &#xC778;&#xC1C4; &#xBC29;&#xC9C0; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC0C1;&#xD53C; &#xD615;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xC5D0; &#xC54C;&#xCF54;&#xC62C; &#xBD80;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; HGF &#xBCF4;&#xD638; hepatocytes&#xC5D0; &#xC804;&#xC790; cadherin &#xC2DD;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, GF microarrays &#xAC04; &#xC0C1;&#xD574;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; heterotypic &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC8FC;&#xBB38;&#xACFC; &#xC140;-nonparenchymal &#xAC04; &#xC12C;&#xC720; &#xC99D;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;-hepatocytes HGF/&#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC774;&#xB098; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC804;&#xC6A9; &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RT-PCR &#xBD84;&#xC11D; &#xB4A4; &#xC5D0;&#xD0C4;&#xC62C;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; cocultures&#xC758; &#xB178;&#xCD9C;&#xC740; &#xC8FC;&#xBB38;&#xACFC; &#xC140; hepatocytes HGF &#xBCF4;&#xD638;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC70;&#xC8FC; &#xD588;&#xB2E4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB35C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; (&#xB35C; fibrotic) &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; GF microarray &#xD615;&#xC2DD; anti-fibrotic &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC870;&#xC0AC;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC548;&#xD2F0;-apoptotic &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCC0;&#xC870; heterotypic &#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCCB4; &#xC678; &#xC54C;&#xCF54;&#xC62C; &#xBD80;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xBCF4;&#xD638; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC9D3;&#xB294; HGF bmp7&#xC758; &#xC778;&#xC1C4; &#xB41C; &#xBC30;&#xC5F4; hepatocytes &#xC721;&#xC131;.

El objetivo del presente estudio fue investigar efectos hepato-protectores de factor de crecimiento (GF) las matrices durante la lesi&#xF3;n de alcohol. Factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) y la prote&#xED;na morfogen&#xE9;tica &#xF3;sea (BMP) 7 se mezclaron con col&#xE1;geno (I) y un robot impresa en portaobjetos de vidrio est&#xE1;ndar para crear matrices de 500 puntos Microm di&#xE1;metro. Hepatocitos primarios de rata fueron sembradas en la parte superior de las matrices que forman grupos correspondientes en tama&#xF1;o a las manchas de prote&#xED;nas subyacentes. Matrices de c&#xE9;lulas fueron lesionados luego en cultivo por la exposici&#xF3;n a etanol de 100 mm durante 48 h. Los hepatocitos que residen en los puntos GF se encontr&#xF3; que ten&#xED;an menos apoptosis entonces las c&#xE9;lulas cultivadas en s&#xF3;lo col&#xE1;geno-manchas. Por lo menos la apoptosis (0,3% estimado por TUNEL ensayo) se observ&#xF3; en los puntos HGF/BMP7/collagen mientras que la mayor&#xED;a la apoptosis (17,3%) se observ&#xF3; s&#xF3;lo en el col&#xE1;geno matrices. Curiosamente, el grado de alcohol apoptosis inducida en los hepatocitos variado basado en la concentraci&#xF3;n de GF impreso. Adem&#xE1;s de la prevenci&#xF3;n de la apoptosis, impreso FC contribuido al mantenimiento de fenotipo epitelial durante la lesi&#xF3;n de alcohol como se evidencia por el aumento de los niveles de E-cadherina en HGF protegidos por los hepatocitos. Es importante destacar que, microarrays de GF podr&#xED;a ser utilizado para investigar las interacciones heterot&#xED;picos en el contexto de la lesi&#xF3;n hep&#xE1;tica. Para resaltar esto, las c&#xE9;lulas estrelladas hep&#xE1;ticas no parenquimatosas, c&#xE9;lulas implicadas en la fibrosis - se a&#xF1;adieron a los hepatocitos que residen en las matrices de cualquiera de HGF / col&#xE1;geno o col&#xE1;geno puntos solamente. La exposici&#xF3;n de estos co-cultivos de etanol seguido por RT-PCR an&#xE1;lisis revel&#xF3; que las c&#xE9;lulas estrelladas que resid&#xED;an junto con HGF protegidos por los hepatocitos fueron significativamente menos activo (menos fibrosis) en comparaci&#xF3;n con los controles. En general, nuestros resultados demuestran que GF formato microarrays puede ser utilizado para cribar efectos anti-fibr&#xF3;ticas y anti-apopt&#xF3;ticos de factores de crecimiento, as&#xED; como para investigar c&#xF3;mo las se&#xF1;ales entregadas a un tipo espec&#xED;fico de c&#xE9;lula modular heterot&#xED;picas interacciones celulares.

El cultivo de hepatocitos en matrices impresas de HGF y BMP7 para caracterizar los efectos protectores de estos factores de crecimiento en la injuria Durante alcohol Vitro

Regulatory T cells (Tregs) migrate into peripheral sites of inflammation such as allografts undergoing rejection, where they serve to suppress the immune response. In this study, we find that ∼30-40% of human CD25(hi) FOXP3(+) CD4(+) Tregs express the peripheral CXC chemokine receptor 3 (CXCR3) and that this subset has potent immunoregulatory properties. Consistently, we observed that proliferative responses as well as IFN-γ production were significantly higher using CXCR3-depleted versus undepleted responders in the mixed lymphocyte reaction, as well as following mitogen-dependent activation of T cells. Using microfluidics, we also found that CXCR3 was functional on CXCR3(pos) Tregs, in as much as chemotaxis and directional persistence towards interferon-γ-inducible protein of 10 kDa (IP-10) was significantly greater for CXCR3(pos) than CXCR3(neg) Tregs. Following activation, CXCR3-expressing CD4(+) Tregs were maintained in vitro in cell culture in the presence of the mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitor rapamycin, and we detected higher numbers of circulating CXCR3(+) FOXP3(+) T cells in adult and pediatric recipients of renal transplants who were treated with mTOR-inhibitor immunosuppressive therapy. Collectively, these results demonstrate that the peripheral homing receptor CXCR3 is expressed on subset(s) of circulating human Tregs and suggest a role for CXCR3 in their recruitment into peripheral sites of inflammation.

Subsets of human CD4(+) regulatory T cells express the peripheral homing receptor CXCR3.

Leukocyte trafficking plays a critical role in determining the progress and resolution of inflammation. Although significant progress has been made in understanding the role of leukocyte activation in inflammation, dissecting the interactions between different leukocyte subpopulations during trafficking is hampered by the complexity of in vivo conditions and the lack of detail of current in vitro assays. To measure the effects of the interactions between neutrophils and monocytes migrating in response to various chemoattractants, at single-cell resolution, we developed a microfluidic platform that replicates critical features of focal inflammation sites. We integrated an elastase assay into the focal chemotactic chambers (FCCs) of our device that enabled us to distinguish between phlogistic and nonphlogistic cell recruitment. We found that lipoxin A(4) and resolvin D1, in solution or incorporated into nano-proresolving medicines, reduced neutrophil and monocyte trafficking toward leukotriene B(4). Lipoxin A(4) also reduced the elastase release from homogenous and heterogenous mixtures of neutrophils and monocytes. Surprisingly, the effect of resolvin D1 on heterogenous mixtures was antisynergistic, resulting in a transient spike in elastase activity, which was quickly terminated, and the degraded elastin removed by the leukocytes inside the FCCs. Therefore, the microfluidic assay provides a robust platform for measuring the effect of leukocyte interactions during trafficking and for characterizing the effects of inflammation mediators.

Microfluidic chambers for monitoring leukocyte trafficking and humanized nano-proresolving medicines interactions.

Following severe burns and trauma injuries, the changes of neutrophil migratory phenotype are a double-edged sword. Activated neutrophils migrate into injured tissues and help contain microbial infections, but they can also enter normal tissues and damage vital organs. Depleting the neutrophils from circulation protects vital organs against neutrophil-induced damage but leaves the body exposed to infectious complications. Here we show that restoring normal neutrophil migratory phenotype in rats with burn injuries correlates with improved survival in a classical double-injury model of sequential burn and septic insults. We uncovered that the directionality of neutrophils from burned rats can be restored both in vitro by 1 nM resolvin D2 (RvD2) and in vivo by RvD2 for 7 d, 25 ng/kg body mass (8-10 ng/rat). Restoring neutrophil directionality dramatically increases survival after a second septic insult at d 9 postburn. Survival of RvD2-treated animals increases from 0 to 100% after lipopolysaccharide injection and is extended by 1 wk after cecal ligation. Survival does not significantly increase when the restoration of neutrophil directionality is incomplete, following shorter regimens of RvD2. We conclude that restoring neutrophil directionality using RvD2 could have prophylactic value and delay lethal complications after burn injuries.

Resolvin D2 restores neutrophil directionality and improves survival after burns.

The goal of the present study was to modulate the phenotype expression of hepatocytes in vitro on surfaces imprinted with growth factors (GFs). Hepatocyte growth factor (HGF) or transforming-growth factor-β1 (TGF-β1) were mixed with collagen (I) and robotically printed onto standard glass slides to create arrays of 300 μm or 500 μm diameter spots. Primary rat hepatocytes were seeded on top of the arrays, forming clusters corresponding in size to the underlying protein spots. The TGF-β1 spots appeared to downregulate markers of hepatic (epithelial) phenotype while upregulating expression of mesenchymal markers. Conversely, hepatocytes cultured on HGF spots maintained high level of epithelial markers. When hepatocytes were seeded onto alternating spots of HGF and TGF-β1, their phenotype was found to depend on center-to-center distance between the spots. At shorter distances cross-expression of epithelial and mesenchymal markers was observed while at distances exceeding 1.25 mm divergence of phenotypes, epithelial on HGF and mesenchymal on TGF-β was seen. Overall, our results demonstrate that GF-encoded surfaces can modulate phenotype within groups of cells cultured on the same surface. Given the importance of phenotype switching in development, fibrosis and cancer, this platform may be used to gain useful insights into the mechanisms of processes such as epithelial-to-mesenchymal transition or stem cell fate selections.

Local control of hepatic phenotype with growth factor-encoded surfaces.

Neutrophil chemotaxis is critical for defense against infections and its alterations could lead to chronic inflammation and tissue injury. The central role that transient alterations of neutrophil chemotaxis could have on patient outcomes calls for its quantification in the clinic. However, current methods for measuring neutrophil chemotaxis require large volumes of blood and are time consuming. To address the need for rapid and robust assays, we designed a microfluidic device that measures neutrophil chemotaxis directly from a single droplet of blood. We validated the assay by comparing neutrophil chemotaxis from finger prick, venous blood and purified neutrophil samples. We found consistent average velocity of (19 ± 6 μm/min) and directionality (91.1%) between the three sources. We quantified the variability in neutrophil chemotaxis between healthy donors and found no significant changes over time. We also validated the device in the clinic and documented temporary chemotaxis deficiencies after burn injuries.

Caroline N. Jones

The BioMEMS Resource Center,
Department of Surgery,
The BioMEMS Resource Center, Department of Surgery

Massachusetts General Hospital

Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood

Caroline N. Jones

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}The BioMEMS Resource Center,Department of Surgery,The BioMEMS Resource Center, Department of Surgery

Massachusetts General Hospital

Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood

The BioMEMS Resource Center,
Department of Surgery,
The BioMEMS Resource Center, Department of Surgery