<em>Toxoplasma gondii</em> Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

University of Wisconsin

Apicomplexan &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x6291;&#x5236;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x751F;&#x4EA7;&#x4E2D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E0D;&#x8D85;&#x8FC7; 6000 T.&#x866B;&#x63D2;&#x5165;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x59CB;&#x7EC8;&#x65E0;&#x6CD5;&#x6291;&#x5236;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x751F;&#x4EA7;&#x4ECE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4E00;&#x682A;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A; 89B7&#xFF0C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x589E;&#x957F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A81;&#x53D8;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x6B64;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x635F;&#x5931;&#x7684; GRA4 &#x548C; SAG1 &#x86CB;&#x767D;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6CD5;&#x548C;&#x95F4;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x53CA;&#x5185;&#x90E8;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EC6;&#x5206;&#x7684;&#x7535;&#x955C;&#x67D3;&#x8272;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x5185;&#x542B;&#x6709;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;89B7 &#x514B;&#x9686;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x8D28;&#x7C92;&#x6270;&#x4E71;&#x4E86; 3.4 kb &#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7F16;&#x7801;&#x4E0E;&#x7AE0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x80BD;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7C7B;&#x4F3C; patatin &#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x9176;&#x57DF;&#x9884;&#x6D4B; 68 kDa &#x86CB;&#x767D;&#x7684; mRNA&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; patatin &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x8F68;&#x8FF9;&#x4E0E;&#x9057;&#x4F20;&#x4E92;&#x8865;&#x8FD8;&#x539F;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x80FD;&#x591F;&#x6291;&#x5236;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x590D;&#x5236;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; patatin &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8840;&#x51DD;&#x7D20;&#x6807;&#x8BB0;&#x7248;&#x672C;&#x663E;&#x793A;&#x6613;&#x8D1D;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3A;&#x975E;&#x5178;&#x578B; T.&#x866B;&#x7ED3;&#x6784;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x751F;&#x5B58;&#x4E2D;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

Patatin &#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4ECE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x3002;

The apicomplexan parasite Toxoplasma gondii is able to suppress nitric oxide production in activated macrophages. A screen of over 6000 T. gondii insertional mutants identified two clones, which were consistently unable to suppress nitric oxide production from activated macrophages. One strain, called 89B7, grew at the same rate as wild-type parasites in naÃ¯ve macrophages, but unlike wild type, the mutant was degraded in activated macrophages. This degradation was marked by a reduction in the number of parasites within vacuoles over time, the loss of GRA4 and SAG1 protein staining by immunofluorescence assay, and the vesiculation and breakdown of the internal parasite ultrastructure by electron microscopy. The mutagenesis plasmid in the 89B7 clone disrupts the promoter of a 3.4 kb mRNA that encodes a predicted 68 kDa protein with a cleavable signal peptide and a patatin-like phospholipase domain. Genetic complementation with the genomic locus of this patatin-like protein restores the parasites ability to suppress nitric oxide and replicate in activated macrophages. A haemagglutinin-tagged version of this patatin-like protein shows punctate localization into atypical T. gondii structures within the parasite. This is the first study that defines a specific gene product that is needed for parasite survival in activated but not naÃ¯ve macrophages.

A patatin-like protein protects Toxoplasma gondii from degradation in activated macrophages.

Le apicomplexe parasite Toxoplasma gondii est capable de supprimer la production d&#x26;#39;oxyde nitrique dans les macrophages activ&#xE9;s. Un &#xE9;cran de plus de 6000 mutants d&#x26;#39;insertion T. gondii a identifi&#xE9; deux clones, qui &#xE9;taient toujours incapables de supprimer la production d&#x26;#39;oxyde nitrique par les macrophages activ&#xE9;s. Une souche, appel&#xE9;e 89B7, a augment&#xE9; au m&#xEA;me rythme que les parasites de type sauvage dans les macrophages na&#xEF;fs, mais &#xE0; la diff&#xE9;rence de type sauvage, le mutant a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;grad&#xE9; dans les macrophages activ&#xE9;s. Cette d&#xE9;gradation a &#xE9;t&#xE9; marqu&#xE9;e par une r&#xE9;duction du nombre de parasites dans les vacuoles au fil du temps, la perte de GRA4 et la coloration des prot&#xE9;ines SAG1 par immunofluorescence, et la v&#xE9;siculation et la r&#xE9;partition de l&#x26;#39;ultrastructure du parasite interne par microscopie &#xE9;lectronique. Le plasmide mutagen&#xE8;se dans le clone 89B7 perturbe le promoteur d&#x26;#39;un ARNm de 3,4 kb codant pour une prot&#xE9;ine pr&#xE9;dite 68 kDa avec un peptide signal clivable et un domaine en forme de patatine phospholipase. La compl&#xE9;mentation g&#xE9;n&#xE9;tique avec le locus g&#xE9;nomique de cette prot&#xE9;ine patatine comme restaure la capacit&#xE9; des parasites &#xE0; supprimer l&#x26;#39;oxyde nitrique et se r&#xE9;pliquer dans les macrophages activ&#xE9;s. Une version d&#x26;#39;h&#xE9;magglutinine-&#xE9;tiquet&#xE9; de cette prot&#xE9;ine patatine comme montre la localisation ponctu&#xE9;e dans les structures atypiques T. gondii dans le parasite. Cette &#xE9;tude est la premi&#xE8;re qui d&#xE9;finit un produit de g&#xE8;ne sp&#xE9;cifique qui est n&#xE9;cessaire pour la survie du parasite dans les macrophages activ&#xE9;s, mais pas na&#xEF;f.

Une prot&#xE9;ine patatine-comme Prot&#xE8;ge Toxoplasma gondii de la d&#xE9;gradation dans les macrophages activ&#xE9;s

Die Apicomplexan Parasiten Toxoplasma Gondii kann Stickstoffmonoxid-Produktion in aktivierten Makrophagen unterdr&uuml;cken. Ein Bildschirm mit &uuml;ber 6000 T. Gondii muss Mutanten identifiziert zwei Klone, die konsequent Stickstoffmonoxid-Produktion von aktivierten Makrophagen unterdr&uuml;cken konnten. Eine Belastung, genannt 89B7, wuchsen mit der gleichen Geschwindigkeit als Wildtyp Parasiten in naiv-Makrophagen, aber im Gegensatz zu Wildtyp, der Mutant in aktivierten Makrophagen abgebaut wurde. Diese Verschlechterung war gekennzeichnet durch eine Verringerung der Anzahl der Parasiten in Vakuolen im Laufe der Zeit den Verlust der GRA4 und SAG1 Protein Beflecken Immunfluoreszenz-Assay, Bl&auml;schenbildung und Aufschl&uuml;sselung der interne Parasiten-Ultrastruktur durch Elektronenmikroskopie. Die Mutagenese-Plasmid in das 89B7-Klon st&ouml;rt den Projekttr&auml;ger eine 3,4 KB mRNA, die ein vorhergesagten 68 kDa-Protein mit einem cleavable Signal-Peptid und einer Patatin-wie Phospholipase-Dom&auml;ne kodiert. Genetische Erg&auml;nzung mit der genomischen Locus dieses Patatin-&auml;hnlichen Proteins stellt die Parasiten-F&auml;higkeit zu unterdr&uuml;cken, Stickstoffmonoxid und in aktivierten Makrophagen zu replizieren. Eine H&auml;magglutinin-Tag-Version dieses Patatin-&auml;hnlichen Proteins zeigt punctata Lokalisierung in atypischen T. Gondii Strukturen innerhalb der Parasit. Dies ist die erste Studie, die ein spezifisches gen-Produkt, die f&uuml;r &Uuml;berleben von Parasiten ben&ouml;tigt wird definiert, aber nicht naiv Makrophagen aktiviert.

Ein Patatin-wie Protein sch&uuml;tzt Toxoplasma Gondii vor Erniedrigung in aktivierten Makrophagen.

Il parassita Apicomplexa Toxoplasma gondii &egrave; in grado di sopprimere la produzione di ossido nitrico nei macrofagi attivati. Uno schermo di oltre 6000 T. gondii inserzionale mutanti identificati due cloni, che erano costantemente in grado di sopprimere la produzione di ossido nitrico da macrofagi attivati. Un ceppo, denominato 89B7, &egrave; cresciuto allo stesso tasso come wild-type parassiti nei macrofagi ingenuo, ma a differenza di tipo selvatico, il mutante &egrave; stato degradato in macrofagi attivati. Questo degrado &egrave; stato contrassegnato da una riduzione del numero di parassiti all&#39;interno di vacuoli nel corso del tempo, la perdita di proteine GRA4 e SAG1 colorazione di immunofluorescenza e la ripartizione dell&#39;ultrastruttura del parassita interno vesiculation da microscopia elettronica. Il plasmide di mutagenesi in un clone 89B7 sconvolge il promotore di un 3.4 kb mRNA che codifica per una proteina di 68 kDa previsto con un peptide segnale fessurabili e un dominio simile patatin fosfolipasi. Complementazione genetica con il locus genomico di questa proteina patatin-come ripristina la capacit&agrave; di parassiti di sopprimere l&#39;ossido nitrico e replicare in macrofagi attivati. Una versione di emoagglutinina-tag di questa proteina patatin-come dimostra punctata localizzazione in atipiche T. gondii strutture all&#39;interno del parassita. Questo &egrave; il primo studio che definisce un prodotto del gene specifico che &egrave; necessario per la sopravvivenza del parassita in attivato ma non ingenuo macrofagi.

Una proteina simile patatin protegge Toxoplasma gondii dalla degradazione nei macrofagi attivati.

&#x30A2;&#x30D4;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B5;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 6000&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x305F;&#x633F;&#x5165;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x306E;&#x7523;&#x751F;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;2&#x3064;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 89B7&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x4E00;&#x682A;&#x306F;&#x3001;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x306A;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x901F;&#x5EA6;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x5206;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x306F;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x7D4C;&#x904E;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x6DB2;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6570;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308A;GRA4&#x3068;SAG1&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x67D3;&#x8272;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5185;&#x90E8;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x767A;&#x6CE1;&#x3068;&#x7834;&#x58CA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 89B7&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x958B;&#x88C2;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D1;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;68 kDa&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;3.4&#x30AD;&#x30ED;&#x30D0;&#x30A4;&#x30C8;mRNA&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5185;&#x3067;&#x8907;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x69D8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D8;&#x30DE;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x975E;&#x5B9A;&#x578B;&#x7684;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x70B9;&#x72B6;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x306A;&#x3044;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x30D1;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x5206;&#x89E3;&#x304B;&#x3089;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Apicomplexan &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; Toxoplasma gondii &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC0C1; 6000 T. gondii insertional &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD654;&#xBA74; &#xD655;&#xC778; &#xB450; &#xD074;&#xB860;, &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;, 89B7, &#xB77C;&#xB294; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xC18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC57C;&#xC0DD; &#xC885;&#xB958;&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC;. &#xC774; &#xC131;&#xB2A5; &#xC800;&#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xBCC4;, &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;, &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;, vesiculation &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xB300;&#xAD8C;&#xC758; &#xBD95;&#xAD34;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0;&#xB294; gra4&#xC640; SAG1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; vacuoles &#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC218;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 89B7 &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; mutagenesis &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC; &#xBC29;&#xD574; 3.4 kb&#xC758; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; mRNA cleavable &#xC2E0;&#xD638; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC640; patatin &#xAC19;&#xC740; phospholipase &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; 68 kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Patatin&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xAC8C;&#xB188; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC640; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Patatin&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; haemagglutinin &#xD0DC;&#xADF8; &#xBC84;&#xC804; punctate &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; T. gondii &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBE44;&#xC815;&#xD615;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC774;&#xB2E4;.

Patatin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; Toxoplasma gondii&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El apicomplejo par&#xE1;sito Toxoplasma gondii es capaz de suprimir la producci&#xF3;n de &#xF3;xido n&#xED;trico en macr&#xF3;fagos activados. Una pantalla de m&#xE1;s de 6.000 T. gondii mutantes de inserci&#xF3;n identificaron dos clones, que fueron siempre incapaces de suprimir la producci&#xF3;n de &#xF3;xido n&#xED;trico de los macr&#xF3;fagos activados. Una cepa, llamada 89B7, creci&#xF3; a la misma velocidad que los de tipo salvaje par&#xE1;sitos en macr&#xF3;fagos no tratados previamente, pero a diferencia de tipo silvestre, el mutante fue degradada en los macr&#xF3;fagos activados. Esta degradaci&#xF3;n se caracteriz&#xF3; por una reducci&#xF3;n en el n&#xFA;mero de par&#xE1;sitos dentro de vacuolas en el tiempo, la p&#xE9;rdida de GRA4 y SAG1 tinci&#xF3;n de prote&#xED;nas mediante el ensayo de inmunofluorescencia, y la vesiculaci&#xF3;n y la descomposici&#xF3;n de la ultraestructura par&#xE1;sito interno por microscop&#xED;a electr&#xF3;nica. La mutag&#xE9;nesis pl&#xE1;smido en el clon 89B7 interrumpe el promotor de un ARNm de 3,4 kb que codifica una prote&#xED;na predicha 68 kDa con un p&#xE9;ptido se&#xF1;al escindible y un dominio fosfolipasa patatina similar. Complementaci&#xF3;n gen&#xE9;tica con el locus gen&#xF3;mico de esta prote&#xED;na patatina-como restaura la capacidad para suprimir par&#xE1;sitos &#xF3;xido n&#xED;trico y replicarse en macr&#xF3;fagos activados. Una versi&#xF3;n de la hemaglutinina de etiquetado de esta prote&#xED;na patatin-como muestra la localizaci&#xF3;n punteada en at&#xED;picos T. gondii estructuras dentro del par&#xE1;sito. Este es el primer estudio que define un producto del gen espec&#xED;fico que se necesita para la supervivencia del par&#xE1;sito en los macr&#xF3;fagos activados pero no ingenuo.

Una prote&#xED;na similar a Patat&#xED;n Protege Toxoplasma gondii a partir de la degradaci&#xF3;n en macr&#xF3;fagos activados

&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; Rna &#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x957F;&#x524D;&#x4F53;&#x6811;&#x79CD;&#x3002;&#x6210;&#x719F;&#x7684; 16S rRNA &#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684; 5&#39; &#x7AEF;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E24;&#x6B65;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x50AC;&#x5316;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; E &#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; G.&#x5408;&#x4F5C;&#x884C;&#x52A8;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7F3A;&#x4E4F; E &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; G orthologues&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8; 16S rRNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x5982;&#x4F55;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6709;&#x673A;&#x7269;&#x4E2D;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC; 16S rRNA &#x4E5F;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E24;&#x6B65;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x548C;&#x8D1F;&#x8D23; 5 &#x6210;&#x719F; &#39; &#x751F;&#x6210;&#x9176;&#x6700;&#x7EC8;&#x6210;&#x719F;&#x662F;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; YkqC/J1 &#x5E7F;&#x6CDB;&#x5206;&#x5E03;&#x57FA;&#x672C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x3002;&#x6D88;&#x8017;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; J1 B.&#x67AF;&#x8349;&#x6746;&#x83CC; 16S rRNA &#x524D;&#x4F53;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x524D;&#x4F53;&#x7269;&#x79CD;&#x5728;&#x8F6C;&#x5934;&#x6697;&#x793A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5C31;&#x80FD;&#x5728;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x50AC;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; J1 &#x5E9F;&#x9664; 16S rRNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x529B;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; J1 &#x53EF;&#x4EE5;&#x6B63;&#x786E;&#x6210;&#x719F;&#x524D;&#x4F53; 16S rRNA &#x7EC4;&#x88C5;&#x5728; 70 &#x5E74;&#x4EE3;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x76F4;&#x63A5;&#x3002;

&#x6210;&#x719F;&#x7684; 5&#39; &#x7AEF;&#x7684;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC; 16S rRNA &#x7684;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; YkqC/&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; J1&#x3002;

Functional ribosomal RNAs are generated from longer precursor species in every organism known. Maturation of the 5' side of 16S rRNA in Escherichia coli is catalysed in a two-step process by the cooperative action of RNase E and RNase G. However, many bacteria lack RNase E and RNase G orthologues, raising the question as to how 16S rRNA processing occurs in these organisms. Here we show that the maturation of Bacillus subtilis 16S rRNA is also a two-step process and that the enzyme responsible for the generation of the mature 5' end is the widely distributed essential ribonuclease YkqC/RNase J1. Depletion of B. subtilis of RNase J1 results in an accumulation of 16S rRNA precursors in vivo. The precursor species are found in polysomes suggesting that they can function in translation. Mutation of the predicted catalytic site of RNase J1 abolishes both 16S rRNA processing and cell viability. Finally, purified RNase J1 can correctly mature precursor 16S rRNA assembled in 70S ribosomes, showing that its role is direct.

Maturation of the 5' end of Bacillus subtilis 16S rRNA by the essential ribonuclease YkqC/RNase J1.

Fonctionnelles des ARN ribosomiques sont g&eacute;n&eacute;r&eacute;s &agrave; partir des plus esp&egrave;ces pr&eacute;curseur dans chaque organisme connu. Maturation du c&ocirc;t&eacute; 5&#39; de l&#39;ARNr 16 s chez Escherichia coli est catalys&eacute;e par un processus en deux &eacute;tapes de l&#39;action coop&eacute;rative de RNase E et G. RNase Cependant, beaucoup de bact&eacute;ries n&#39;ont pas des orthologues RNase E et G de la RNase, soulevant la question de savoir comment le traitement des ARNr 16 s se produit chez ces organismes. Ici, nous montrons que la maturation de Bacillus subtilis 16 s que rRNA est &eacute;galement un processus en deux &eacute;tapes et que l&#39;enzyme responsable de la g&eacute;n&eacute;ration de la maturit&eacute; 5&#39; fin est la ribonucl&eacute;ase largement distribu&eacute;e essentielle YkqC/RNase J1. Appauvrissement de la couche de b. subtilis de RNase J1 entra&icirc;ne une accumulation des pr&eacute;curseurs d&#39;ARNr 16 s in vivo. Les esp&egrave;ces de pr&eacute;curseur sont trouvent dans les polysomes sugg&eacute;rant qu&#39;ils peuvent fonctionner en traduction. Mutation du site catalytique pr&eacute;dite de RNase J1 abolit les traitement des ARNr 16 s et la viabilit&eacute; des cellules. Enfin, purifi&eacute;e RNase J1 peut correctement mature pr&eacute;curseur ARNr 16 s assembl&eacute;s dans les ribosomes 70 s, montrant que son r&ocirc;le est direct.

La maturation de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; 5&#39; de Bacillus subtilis 16 s ARNr de la ribonucl&eacute;ase essentielle YkqC/RNase J1.

Funktionale Ribosomale RNA aus l&auml;ngeren Vorl&auml;ufer-Arten in jedem Organismus bekannt generiert. Reifung der 5&#39;-Seite des 16S rRNA in Escherichia coli wird in einem zweistufigen Prozess durch die kooperative Ma&szlig;nahmen der RNase E und RNase G. katalysiert. Allerdings fehlen viele Bakterien RNase E und RNase-G Orthologues, heben die Frage, wie die 16S rRNA Verarbeitung in diese Organismen auftritt. Hier zeigen wir, dass die Reifung von Bacillus Subtilis 16S, die rRNA auch ist ein zweistufiger Prozess und das Enzym verantwortlich f&uuml;r die Generierung der Reifen 5&#39; am Ende, der weit verteilten wesentliche Ribonuclease YkqC/RNase-J1. Ersch&ouml;pfung von B. Subtilis der RNase J1 f&uuml;hrt zu einer Anh&auml;ufung von 16S rRNA Vorstufen in-vivo. Die Vorl&auml;ufer-Arten sind in Polysomes, die darauf hindeutet, dass sie, in der &Uuml;bersetzung funktionieren k&ouml;nnen gefunden. Mutation der vorhergesagten katalytische Website der RNase J1 wird sowohl die 16S rRNA Verarbeitung als auch die Zellviabilit&auml;t abgeschafft. Schlie&szlig;lich montiert gereinigten RNase J1 kann richtig ausgereiften Vorl&auml;ufer 16S rRNA in 70 s-Ribosomen, zeigen, dass seine Rolle direct ist.

Reifung der 5&#39;-Ende des Bacillus Subtilis 16S rRNA durch die wesentlichen Ribonuclease YkqC/RNase-J1.

RNAs ribosomal funzionali sono generati da pi&ugrave; specie di precursore in ogni organismo conosciuto. Maturazione del lato 5&#39; del 16S rRNA in Escherichia coli &egrave; catalizzato in un processo in due fasi per azione cooperativa di RNAsi E e G. RNasi Tuttavia, molti batteri privi di RNAsi E e G RNasi orthologues, alzando la questione di come elaborazione di rRNA 16S si verifica in questi organismi. Qui vi mostriamo che la maturazione del Bacillus subtilis 16S che rRNA &egrave; anche un processo in due fasi e che l&#39;enzima responsabile per la generazione di maturo 5&#39; alla fine &egrave; la ribonucleasi essenziale ampiamente distribuita YkqC/RNasi J1. Deplezione di b. subtilis della RNAsi J1 si traduce in un accumulo di precursori di rRNA 16S in vivo. La specie di precursore si trovano a polysomes, suggerendo che essi possano funzionare in traduzione. Mutazione del predetto sito catalitico della RNAsi J1 abolisce sia elaborazione rRNA 16S e vitalit&agrave; cellulare. Infine, purificato RNasi J1 pu&ograve; correttamente maturo precursore 16S rRNA assemblati in ribosomi 70S, mostrando che il suo ruolo &egrave; diretto.

Maturazione dell&#39;estremit&agrave; 5&#39; del Bacillus subtilis 16S rRNA della ribonucleasi essenziale YkqC/RNasi J1.

&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; Rna &#x306F;&#x9577;&#x304F;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x7A2E;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3042;&#x3089;&#x3086;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6210;&#x719F; 16S rRNA &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E; 5&#39; &#x5074;&#x306E; 2 &#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067; rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x3068; RNase G &#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x884C;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x89E6;&#x5A92;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E; 16S rRNA &#x51E6;&#x7406;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x8CEA;&#x554F;&#x306E;&#x5F15;&#x304D;&#x4E0A;&#x3052;&#x3001;rn &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; E &#x3068; RNase G &#x7B2C;&#x30AA;&#x30FC;&#x30BD;&#x30ED;&#x30AC;&#x30B9;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x7D30;&#x83CC;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E; 16S rRNA &#x3082; 2 &#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3068;&#x3001;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F; 5&#39; &#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x7D42;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x304C;&#x5E83;&#x304F;&#x5206;&#x6563;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; YkqC/RNase J1 &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;B. subtilis RNase J1 &#x306E;&#x67AF;&#x6E07; 16S rRNA &#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x7A2E;&#x306F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3092;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RNase J1 &#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5909;&#x7570; 16S rRNA &#x51E6;&#x7406;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x3067;&#x7CBE;&#x88FD; RNase J1 &#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x6B63;&#x3057;&#x304F;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;70 &#x5E74;&#x4EE3;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x306E; 16S rRNA &#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E; 5&#39; &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x6210;&#x719F; 16S rRNA &#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; YkqC/RNase J1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;

&#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; Rnas&#xB294; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; &#xC804;&#xC870; &#xC885;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; 16S Rrna&#xC758; 5&#39; &#xCABD;&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xC740; RNase E&#xC758; RNase G. &#xD611;&#xB3D9; &#xC791;&#xC5C5; &#xD558; &#xC5EC; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; catalysed &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB9CE;&#xC740; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBD80;&#xC871; RNase E &#xBC0F; RNase G orthologues, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; 16S rRNA &#xCC98;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xC81C;&#xAE30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis 16S Rrna&#xB294; &#xB610;&#xD55C; 2 &#xB2E8;&#xACC4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC640; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; 5&#39;&#xC758; &#xC138;&#xB300;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xB05D;&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xC740; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xC0B0; &#xB41C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; ribonuclease YkqC/RNase J1 &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. RNase J1 B. subtilis&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; 16S rRNA &#xC120;&#xAD6C;&#xC790; vivo&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC870; &#xC885; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; polysomes&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. RNase J1 &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9D0;&#xC0B4; 16S rRNA &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC815;&#xD654; RNase J1 &#xC218; &#xC81C;&#xB300;&#xB85C; &#xC131;&#xC219; &#xC804;&#xC870; 16S rRNA &#xC870;&#xB9BD; 70S &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;.

&#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis 16S 5&#39; &#xB05D;&#xC758; &#xC131;&#xC219; rRNA &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; ribonuclease YkqC/RNase j1&#xC73C;&#xB85C;.

Funcionales RNAs ribos&oacute;micos se generan de m&aacute;s especies de precursor en cada organismo conocido. Maduraci&oacute;n del 5&#39; lado de 16S rRNA en Escherichia coli es catalizada en un proceso de dos pasos por la acci&oacute;n cooperativa de RNasa E y g de RNasa. Sin embargo, muchas bacterias carecen de RNasa E y G de RNasa orthologues, planteando la cuesti&oacute;n en cuanto a c&oacute;mo se produce la transformaci&oacute;n de 16S rRNA en estos organismos. Aqu&iacute; mostramos que la maduraci&oacute;n de Bacillus subtilis 16S que rRNA es tambi&eacute;n un proceso de dos etapas y que termina la enzima responsable de la generaci&oacute;n del maduro 5&#39; es la ribonucleasa esencial ampliamente distribuida YkqC/RNasa J1. Agotamiento de B. subtilis de RNasa J1 da lugar a una acumulaci&oacute;n de 16S rRNA precursores in vivo. La especie de precursor se encuentra en polisomas, sugiriendo que pueden funcionar en la traducci&oacute;n. Mutaci&oacute;n del sitio catal&iacute;tico predicho de RNasa J1 suprime tanto procesamiento de rRNA 16S y viabilidad celular. Finalmente, purificada RNasa J1 puede correctamente madura precursor 16S rRNA montado en los ribosomas 70S, mostrando que su papel es directo.

Maduraci&oacute;n del extremo 5&#39; de Bacillus subtilis 16S rRNA de la ribonucleasa esencial YkqC/RNasa J1.

&#x805A;&#x78F7;&#x9178;&#x76D0;&#x662F;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x627E;&#x5230;&#x89D2;&#x8272;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x54CD;&#x5E94;&#x8981;&#x5F3A;&#x8C03;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5305;&#x542B;&#x5185;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x7AEF;&#x672B;&#x5C3E;&#x63D2;&#x5165;&#x70B9;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD; Vtc2p&#xFF0C;&#x78F7;&#x9178;&#x94F5;&#x5408;&#x6210;&#x673A;&#x68B0;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x8F68;&#x8FF9; TgVTC2 &#x5BF9;&#x542B;&#x5B88;&#x6052;&#x7684; SPX&#x3001; &#x804C;&#x8BAD;&#x5C40;&#x548C;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF; 140kDa &#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;TgVTC2 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5185;&#x4E0D;&#x505A; co-localize &#x5E26;&#x6709;&#x5DF2;&#x77E5;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x767D;&#x70B9;&#x6591;&#x70B9;&#x3002;TgVTC2 &#x7A81;&#x53D8;&#x8868;&#x660E;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x76D0;&#x79EF;&#x7D2F;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; TgVTC2 &#x7B80;&#x4ECB;&#x8FD8;&#x539F;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;TgVTC2 &#x5185;&#x7684;&#x63D2;&#x5165;&#x70B9;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x63A8;&#x5B9A;&#x7684; FIKK &#x6FC0;&#x9176;&#x589E;&#x52A0;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x7EA7;&#x522B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8C08;&#x8BDD;&#x5185;&#x5BB9;&#x7EA7;&#x522B;&#x88AB;&#x6062;&#x590D;&#x5230;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6C34;&#x5E73;&#x540E; TgVTC2 &#x8F68;&#x8FF9;&#x4E0E;&#x4E92;&#x8865;&#x3002;TgVTC2 &#x8F68;&#x8FF9;&#x662F;&#x96BE;&#x6CBB;&#x6027;&#x5230;&#x6316;&#x7A7A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6B64; TgVTC2 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E; T.&#x866B;&#x78F7;&#x9178;&#x94F5;&#x5408;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x5939;&#x5C42;&#x3002;

TgVTC2 &#x53C2;&#x4E0E;&#x4E86;&#x805A;&#x78F7;&#x9178;&#x76D0;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x3002;

Polyphosphate is found in every cell, having roles in diverse processes, including differentiation and response to stress. In this study, we characterize a Toxoplasma gondii mutant containing an insertion within the carboxy-terminal end of a homolog of Saccharomyces cerevisiae Vtc2p, a component of the polyphosphate synthetic machinery. Locus TgVTC2 encodes a 140kDa protein containing conserved SPX, VTC and transmembrane domains. TgVTC2 localizes in punctate spots within the cytoplasm that do not co-localize with known markers. The TgVTC2 mutant showed dramatically reduced polyphosphate accumulation, a defect restored by introduction of TgVTC2 to the mutant. Insertion within TgVTC2 resulted in increased transcript levels for two loci, including a putative FIKK kinase. These transcript levels were restored to wild-type levels upon complementation with the TgVTC2 locus. The TgVTC2 locus was refractory to knockout, and may be essential. Analysis of this TgVTC2 mutant will facilitate dissection of the T. gondii polyphosphate synthesis pathway.

TgVTC2 is involved in polyphosphate accumulation in Toxoplasma gondii.

Polyphosphate se trouve dans chaque cellule, ayant des r&#xF4;les dans divers processus, y compris la diff&#xE9;renciation et la r&#xE9;ponse au stress. Dans cette &#xE9;tude, nous caract&#xE9;risons une Toxoplasma gondii mutant contenant une insertion au sein de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; carboxy-terminale d&#x26;#39;un homologue de Saccharomyces cerevisiae Vtc2p, un composant de la machine polyphosphate synth&#xE9;tique. Locus TgVTC2 code pour une prot&#xE9;ine contenant 140kDa conserv&#xE9; SPX, VTC et domaines transmembranaires. TgVTC2 se localise dans les taches punctiformes dans le cytoplasme qui ne sont pas co-localisent avec des marqueurs connus. Le mutant a montr&#xE9; de fa&#xE7;on spectaculaire l&#x26;#39;accumulation TgVTC2 polyphosphate r&#xE9;duite, un d&#xE9;faut restaur&#xE9;e par l&#x26;#39;introduction de TgVTC2 le mutant. Insertion dans les TgVTC2 entra&#xEE;n&#xE9; des niveaux de transcription accrues pour deux loci, y compris une kinase FIKK putatif. Ces niveaux de transcription ont &#xE9;t&#xE9; restaur&#xE9;s &#xE0; des niveaux de type sauvage sur la compl&#xE9;mentation avec le locus TgVTC2. Le locus TgVTC2 &#xE9;tait r&#xE9;fractaire &#xE0; &#xE9;limination directe, et peut &#xEA;tre essentiel. Analyse de ce mutant TgVTC2 facilitera la dissection de la voie de T. gondii synth&#xE8;se polyphosphate.

TgVTC2 est impliqu&#xE9; dans l&#x26;#39;accumulation de polyphosphate dans Toxoplasma gondii

Polyphosphate findet sich in jeder Zelle mit Rollen in verschiedene Prozesse, einschlie&szlig;lich Differenzierung und Stressbew&auml;ltigung. In dieser Studie pr&auml;gen wir Toxoplasma Gondii Mutanten, enth&auml;lt eine Einf&uuml;gung innerhalb Carboxy-Terminal Ende ein homologes von Saccharomyces Cerevisiae Vtc2p, eine Komponente der Polyphosphate synthetische Maschinerie. Locus TgVTC2 kodiert ein 140kDa Protein, konservierte SPX, VTC und Transmembran-Dom&auml;nen enthalten. TgVTC2 lokalisiert in punktierte Flecken innerhalb des Zytoplasmas, die nicht mit bekannten Markern co-localize. Der TgVTC2-Mutant zeigten deutlich geringere Polyphosphate Akkumulation, ein Defekt durch Einf&uuml;hrung von TgVTC2 in der Mutant wiederhergestellt. Einf&uuml;gung in TgVTC2 f&uuml;hrte zu erh&ouml;hten Transkript-Level f&uuml;r zwei Loci, einschlie&szlig;lich einer mutma&szlig;lichen FIKK-Kinase. Diese Abschrift Ebenen wurden Wildtyp Ebenen auf Erg&auml;nzung mit der TgVTC2-Locus wiederhergestellt. Der TgVTC2-Locus auf k.o. war und wesentlich sein kann. Analyse von diesem TgVTC2-Mutante wird Dissektion von T. Gondii Polyphosphate-Syntheseweg erleichtern.

TgVTC2 ist Polyphosphate Akkumulation in Toxoplasma Gondii beteiligt.

Polifosfato &egrave; trovato in ogni cella, avendo ruoli in diversi processi, tra cui la differenziazione e la risposta allo stress. In questo studio, abbiamo caratterizzano un mutante di gondii del Toxoplasma contenente un inserimento all&#39;interno le estremit&agrave; carbossi-terminale di un omologo di Saccharomyces cerevisiae Vtc2p, un componente del macchinario sintetico polifosfato. Locus TgVTC2 codifica per una proteina di 140kDa contenenti SPX conservata, VTC e domini transmembrana. TgVTC2 si localizza nel punctato macchie all&#39;interno del citoplasma che non co-localize con marcatori noti. Il mutante TgVTC2 ha mostrato polifosfato drammaticamente ridotto accumulo, un difetto restaurato dall&#39;introduzione di TgVTC2 per il mutante. Inserimento all&#39;interno di TgVTC2 portato a livelli di trascrizione aumentata per due loci, tra cui una chinasi putativa ottenuto. Questi livelli di trascrizione sono stati ristabiliti ai livelli di wild-type su complementazione con il locus TgVTC2. Il locus TgVTC2 era refrattario a eliminazione diretta e pu&ograve; essere indispensabile. Analisi di questa mutante TgVTC2 faciliter&agrave; la dissezione del percorso di sintesi di T. gondii polifosfato.

TgVTC2 &egrave; coinvolto nell&#39;accumulo di polifosfato di Toxoplasma gondii.

&#x30DD;&#x30EA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x3084;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED;&#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#xB7;&#x30BB;&#x30EC;&#x30D3;&#x30B7;&#x30A8;&#xFF08;Saccharomyces cerevisiae&#xFF09;Vtc2p&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x672B;&#x7AEF;&#x5185;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x3002;&#x8ECC;&#x8DE1;TgVTC2&#x306F;&#x4FDD;&#x5B58;SPX&#x3001;VTC&#x3068;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;140kDa&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; TgVTC2&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5185;&#x306B;&#x6591;&#x70B9;&#x72B6;&#x306E;&#x6591;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3002; TgVTC2&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306B;TgVTC2&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TgVTC2&#x5185;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;FIKK&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;2&#x3064;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;TgVTC2&#x5EA7;&#x3068;&#x76F8;&#x88DC;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x307E;&#x3067;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TgVTC2&#x5EA7;&#x306F;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x306B;&#x96E3;&#x6CBB;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;TgVTC2&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x30DD;&#x30EA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

TgVTC2&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

Polyphosphate &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Toxoplasma gondii &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Saccharomyces cerevisiae Vtc2p, polyphosphate &#xD569;&#xC131; &#xAE30;&#xACC4; &#xAD6C;&#xC131;&#xC758; carboxy &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB05D;&#xC744; &#xCCB4; &#xB0B4; &#xC0BD;&#xC785;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; TgVTC2 &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; SPX, VTC &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; 140kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. TgVTC2 &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xB9C8;&#xCEE4; co-localize &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; punctate &#xAD00;&#xAD11; &#xBA85;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; localizes. TgVTC2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; polyphosphate &#xCD95;&#xC801;, &#xACB0;&#xD568; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Tgvtc2&#xC758; &#xC18C;&#xAC1C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD588;&#xB2E4;. TgVTC2 &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0BD;&#xC785; &#xC0C1; FIKK &#xD0A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; loci&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xB300; &#xBCF8; &#xC218;&#xC900; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC774; &#xB300; &#xBCF8; &#xC218;&#xC900; TgVTC2 &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC640; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xD588;&#xB2E4;. TgVTC2 &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4; 16 &#xAC15;, &#xB0B4; &#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; TgVTC2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; T. gondii polyphosphate &#xD569;&#xC131; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD574; &#xBD80;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD55C;&#xB2E4;.

Tgvtc2&#xB294; Toxoplasma gondii&#xC5D0; polyphosphate &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;.

Polifosfato se encuentra en cada c&#xE9;lula, se le atribuyen funciones en diversos procesos, incluyendo la diferenciaci&#xF3;n y la respuesta al estr&#xE9;s. En este estudio, se caracterizan una Toxoplasma gondii mutante que contiene una inserci&#xF3;n dentro del extremo carboxi-terminal de un hom&#xF3;logo de Saccharomyces cerevisiae Vtc2p, un componente de la maquinaria sint&#xE9;tica polifosfato. Locus TgVTC2 codifica una prote&#xED;na que contiene 140kDa conservado SPX, VTC y dominios transmembrana. TgVTC2 se localiza en puntos puntiformes en el citoplasma que no co-localizar con marcadores conocidos. El mutante TgVTC2 mostr&#xF3; dr&#xE1;sticamente reducida acumulaci&#xF3;n polifosfato, un defecto restaurado por introducci&#xF3;n de TgVTC2 para el mutante. La inserci&#xF3;n dentro de TgVTC2 result&#xF3; en el aumento de los niveles de transcripci&#xF3;n para dos loci, incluyendo una quinasa FIKK putativo. Estos niveles de transcripci&#xF3;n fueron restaurados a la de tipo salvaje en los niveles de complementaci&#xF3;n con el locus TgVTC2. El lugar TgVTC2 refractaria a octavos de final, y puede ser esencial. El an&#xE1;lisis de este mutante TgVTC2 facilitar&#xE1; la disecci&#xF3;n de la v&#xED;a de T. gondii s&#xED;ntesis polifosfato.

TgVTC2 est&#xE1; implicado en la acumulaci&#xF3;n de polifosfatos en el Toxoplasma gondii

&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x662F;&#x9884;&#x7559;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4F7F;&#x7528;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x5176;&#x4E3B;&#x673A;&#x6574;&#x4E2A;&#x4F20;&#x64AD;&#x3002;&#x5F13;&#x5F62;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6301;&#x7EED;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x5E76;&#x751A;&#x81F3;&#x6162;&#x6162;&#x590D;&#x5236;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x51CF;&#x5C11;&#x5982;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E; (NO) &#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x53EB;&#x505A; TgPL1 &#x7684; T.&#x866B; patatin &#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6B64;&#x524D;&#x5DF2;&#x663E;&#x793A;&#x5BF9;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x5341;&#x5206;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4E00;&#x4E2A; T.&#x866B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0E; TgPL1 &#x57FA;&#x56E0; (&Delta;TgPL1) &#x7684;&#x5220;&#x9664;&#x64CD;&#x4F5C;&#x964D;&#x7EA7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6B64;&#x9000;&#x5316;&#x8868;&#x578B;&#x5E9F;&#x9664;&#x4E86;&#x901A;&#x8FC7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x65E0;&#x4F7F;&#x7528; no &#x5408;&#x9176; (iNOS) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6216;&#x8BF1;&#x751F;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5916;&#x6E90;&#x589E;&#x52A0;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x751F;&#x957F;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; &Delta;TgPL1 &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x5230;&#x4E0D;&#x4E86;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F; &Delta;TgPL1 &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9000;&#x5316;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4E00;&#x4E9B;&#x7C7B;&#x4F3C; patatin &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6709;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; A2 (&#x78F7;&#x8102;&#x9176; a2&#xFF09; &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4; TgPL1 &#x6CA1;&#x6709;&#x78F7;&#x8102;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x8BB6;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A; TgPL1 &#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x9884;&#x6D4B;&#x50AC;&#x5316;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684; G-S &#x66F4;&#x6539;&#x3002;TgPL1 &#x90E8;&#x5206; colocalized &#x4E0E; parasitophorous &#x6CE1;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7684;&#x81F4;&#x5BC6;&#x9897;&#x7C92;&#x86CB;&#x767D;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x6807;&#x8BB0;&#x7248;&#x672C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8868;&#x660E; TgPL1 &#x79FB;&#x52A8;&#x5230; parasitophorous &#x6CE1;&#x672A;&#x786E;&#x5B9A;&#x673A;&#x5236;&#x4FDD;&#x62A4;&#x514D;&#x53D7;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3002;

Patatin &#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#x9632;&#x6B62;&#x9000;&#x5316;&#x4E2D;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7684;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x3002;

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that uses immune cells to disseminate throughout its host. T. gondii can persist and even slowly replicate in activated host macrophages by reducing the antimicrobial effects of molecules such as nitric oxide (NO). A T. gondii patatin-like protein called TgPL1 was previously shown to be important for survival in activated macrophages. Here we show that a T. gondii mutant with a deletion of the TgPL1 gene (Î”TgPL1) is degraded in activated macrophages. This degradation phenotype is abolished by the removal of NO by the use of an inducible NO synthase (iNOS) inhibitor or iNOS-deficient macrophages. The exogenous addition of NO to macrophages results in reduced parasite growth but not the degradation of Î”TgPL1 parasites. These results suggest that NO is necessary but not sufficient for the degradation of Î”TgPL1 parasites in activated macrophages. While some patatin-like proteins have phospholipase A2 (PLA2) activity, recombinant TgPL1 purified from Escherichia coli does not have phospholipase activity. This result was not surprising, as TgPL1 contains a G-to-S change at the predicted catalytic serine residue. An epitope-tagged version of TgPL1 partially colocalized with a dense granule protein in the parasitophorous vacuole space. These results may suggest that TgPL1 moves to the parasitophorous vacuole to protect parasites from nitric oxide by an undetermined mechanism.

A patatin-like protein protects Toxoplasma gondii from degradation in a nitric oxide-dependent manner.

Toxoplasma gondii est un parasite intracellulaire obligatoire qui utilise des cellules immunitaires de diffuser tout au long de son h&#xF4;te. T. gondii peut persister et m&#xEA;me lentement se r&#xE9;pliquer dans les macrophages activ&#xE9;s d&#x26;#39;accueil en r&#xE9;duisant les effets antimicrobiens des mol&#xE9;cules telles que l&#x26;#39;oxyde nitrique (NO). Un T. gondii patatin-like prot&#xE9;ine appel&#xE9;e TgPL1 a d&#xE9;j&#xE0; &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; &#xEA;tre important pour la survie dans les macrophages activ&#xE9;s. Ici, nous montrons que T. gondii mutant avec une d&#xE9;l&#xE9;tion du g&#xE8;ne TgPL1 (&#x394;TgPL1) est d&#xE9;grad&#xE9;e dans les macrophages activ&#xE9;s. Ce ph&#xE9;notype d&#xE9;gradation est supprim&#xE9;e par l&#x26;#39;&#xE9;limination de NO par l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;une NO synthase inductible (iNOS) inhibiteur ou iNOS d&#xE9;ficientes en macrophages. L&#x26;#39;ajout exog&#xE8;ne de NO &#xE0; des r&#xE9;sultats dans les macrophages de croissance du parasite r&#xE9;duit, mais pas la d&#xE9;gradation de &#x394;TgPL1 parasites. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le NO est n&#xE9;cessaire mais non suffisante pour la d&#xE9;gradation de &#x394;TgPL1 parasites dans les macrophages activ&#xE9;s. Alors que certaines prot&#xE9;ines patatine comme ont phospholipase A2 (PLA2) l&#x26;#39;activit&#xE9;, recombinant purifi&#xE9; &#xE0; partir de TgPL1 Escherichia coli n&#x26;#39;a pas d&#x26;#39;activit&#xE9; phospholipase. Ce r&#xE9;sultat n&#x26;#39;est pas surprenant, comme TgPL1 contient un G-to-S changement au niveau du r&#xE9;sidu s&#xE9;rine catalytique pr&#xE9;dit. Une version &#xE9;pitope &#xE9;tiquet&#xE9; de TgPL1 partiellement colocalis&#xE9;s avec une prot&#xE9;ine granule dense dans l&#x26;#39;espace vacuole parasitophore. Ces r&#xE9;sultats pourraient sugg&#xE9;rer que TgPL1 se d&#xE9;place vers la vacuole parasitophore pour prot&#xE9;ger des parasites de l&#x26;#39;oxyde nitrique par un m&#xE9;canisme ind&#xE9;termin&#xE9;.

Une prot&#xE9;ine patatine-comme Prot&#xE8;ge Toxoplasma gondii de la d&#xE9;gradation dans un oxyde nitrique de mani&#xE8;re d&#xE9;pendante

Toxoplasma Gondii ist ein obligat intrazellul&auml;re Parasiten, der Immunzellen verwendet in seinem Wirt zu verbreiten. T. Gondii kann beibehalten und sogar langsam in Makrophagen aktiviert Host replizieren, indem die die antimikrobielle Wirkung der Molek&uuml;le wie Stickstoffmonoxid (NO). Bezeichneten TgPL1 T. Gondii Patatin-&auml;hnlichen Proteins war zuvor als wichtig f&uuml;r das &Uuml;berleben in aktivierten Makrophagen gezeigt. Hier zeigen wir, dass T. Gondii Mutanten mit einer L&ouml;schung des TgPL1-Gens (&Delta;TgPL1) in aktivierten Makrophagen abgebaut wird. Dieser Abbau-Ph&auml;notyp wird durch den Abbau von NO durch die Verwendung eines durch Induktion Nr. abgeschafft Synthase (iNOS) Inhibitor oder iNOS-defizienten Makrophagen. Die exogene Hinzuf&uuml;gung von NO zu Makrophagen f&uuml;hrt zu reduzierten Parasit Wachstum aber nicht den Abbau von &Delta;TgPL1 Parasiten. Diese Ergebnisse legen nahe, die Nr. ist notwendig, aber nicht ausreichend f&uuml;r den Abbau von &Delta;TgPL1 Parasiten in aktivierten Makrophagen. W&auml;hrend einige Patatin-&auml;hnliche Proteine Phospholipase A2 haben (PLA2) Aktivit&auml;t, rekombinante TgPL1 gereinigt von Escherichia coli hat keinen Phospholipase-Aktivit&auml;t. Dieses Ergebnis war nicht &uuml;berraschend, da TgPL1 einen G-S-Wechsel an der vorhergesagten katalytischen Serin-R&uuml;ckstand enth&auml;lt. Ein Epitop-Tags Version des TgPL1, die teilweise mit einem dichten Granulat-Protein im Parasitophorous Vakuole Raum colocalized. Diese Ergebnisse k&ouml;nnen schlagen vor, da&szlig; TgPL1 in der Parasitophorous-Vakuole verschiebt, Parasiten von Stickstoffmonoxid durch einen unbestimmten Mechanismus zu sch&uuml;tzen.

Ein Patatin-wie Protein sch&uuml;tzt Toxoplasma Gondii vor Erniedrigung Stickstoffmonoxid-abh&auml;ngigen Weise.

Toxoplasma gondii &egrave; un parassita intracellulare obbligato che utilizza le cellule immunitarie per diffondere in tutta la sua ospite. T. gondii pu&ograve; persistere e ancora lentamente replicare in macrofagi attivati host riducendo gli effetti antimicrobici di molecole, come l&#39;ossido nitrico (NO). Una T. gondii patatin-come proteina chiamata TgPL1 precedentemente &egrave; stata indicata per essere importante per la sopravvivenza nei macrofagi attivati. Qui vi mostriamo che un T. gondii mutante con una delezione del gene TgPL1 (&Delta;TgPL1) &egrave; degradato in macrofagi attivati. Questo fenotipo di degradazione &egrave; abolito dalla rimozione di NO tramite l&#39;uso di un viscoelastico NO sintasi (iNOS) inibitore o deficit di iNOS macrofagi. L&#39;aggiunta esogena di NO ai macrofagi risultati in crescita ridotta parassita ma non la degradazione di parassiti &Delta;TgPL1. Questi risultati suggeriscono che non &egrave; necessario ma non sufficiente per la degradazione di &Delta;TgPL1 parassiti nei macrofagi attivati. Mentre alcune proteine patatin-come hanno fosfolipasi A2 (PLA2) attivit&agrave;, TgPL1 ricombinante purificato da Escherichia coli non hanno attivit&agrave; fosfolipasi. Questo risultato non &egrave; stato sorprendente, TgPL1 contiene una modifica di G-a-S presso il residuo di serina catalitico previsto. Una versione di TgPL1 parzialmente colocalized con una proteina di granuli densi nello spazio vacuolo parasitophorous epitopo-etichettato. Questi risultati possono suggerire che TgPL1 sposta il vacuolo parasitophorous per proteggere i parassiti da ossido nitrico da un meccanismo indeterminato.

Una proteina simile patatin protegge Toxoplasma gondii dalla degradazione in modo ossido nitrico-dipendente.

&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x539F;&#x866B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x767A;&#x4FE1;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x504F;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306F;&#x6301;&#x7D9A;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#xFF08;NO&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6297;&#x83CC;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5185;&#x3067;&#x8907;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TgPL1&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;TgPL1&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#xFF08;&#x394;TgPL1&#xFF09;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304C;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3067;&#x5206;&#x89E3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;NO&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;iNOS&#xFF09;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x307E;&#x305F;&#x306F;iNOS&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x308B;NO&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x394;TgPL1&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x3078;&#x306E;NO&#x306E;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x52A0;&#x7B97;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;NO&#x304C;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x394;TgPL1&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x5FC5;&#x8981;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;A2&#xFF08;PLA2&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;TgPL1&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; TgPL1&#x304C;&#x4E88;&#x6E2C;&#x89E6;&#x5A92;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;G-&#x306B;-S&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; TgPL1&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;parasitophorous&#x80DE;&#x7A7A;&#x9593;&#x5185;&#x306E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x9846;&#x7C92;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;parasitophorous&#x6DB2;&#x80DE;&#x3078;TgPL1&#x52D5;&#x304D;&#x304C;&#x672A;&#x5B9A;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7A92;&#x7D20;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D1;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x5206;&#x89E3;&#x304B;&#x3089;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x3092;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Toxoplasma gondii &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD574;&#xB2F9; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC720;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC758;&#xBB34; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC774;&#xB2E4;. T. gondii &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xCC9C;&#xCC9C;&#xD788;&#xB3C4; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; (NO)&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD56D;&#xADE0; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC904;&#xC5EC; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. T. gondii patatin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; TgPL1 &#xB77C;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; TgPL1 &#xC720;&#xC804;&#xC790; (&Delta;TgPL1)&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC640; T. gondii &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC800;&#xD558; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC800;&#xD558; &#xD615; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC5C6;&#xC74C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; NO&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3D0;&#xC9C0; synthase (iNOS) &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; iNOS &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;. &#xC544;&#xB2C8;&#xC694; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; exogenous &#xCD94;&#xAC00; &#xAC10;&#xC18C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &Delta;TgPL1 &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC800;&#xD558; &#xD558;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC544;&#xB2C8; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &Delta;TgPL1 &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0;. Patatin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC77C;&#xBD80;&#xB294; phospholipase A2 (PLA2) &#xD65C;&#xB3D9;, &#xC815;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Tgpl1&#xC5D0;&#xB294; phospholipase &#xD65C;&#xB3D9;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; Tgpl1&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; G S &#xBCC0;&#xD654; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; &#xC77C;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xC5C8;&#xB2E4;. TgPL1 parasitophorous &#xACF5;&#xD3EC; &#xACF5;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xB9BD; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; colocalized &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;&#xC758; &#xD53C;&#xD1A0; &#xD504; &#xD0DC;&#xADF8; &#xBC84;&#xC804;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; TgPL1 &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC744; &#xBCF4;&#xD638; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; parasitophorous &#xACF5;&#xD3EC; &#xC774;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC548;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Patatin &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; Toxoplasma gondii&#xB97C; &#xBCF4;&#xD638; &#xD55C;&#xB2E4;.

Toxoplasma gondii es un par&#xE1;sito intracelular obligado, que utiliza las c&#xE9;lulas inmunes para difundir a trav&#xE9;s de su anfitri&#xF3;n. T. gondii puede persistir e incluso poco a poco replicarse en los macr&#xF3;fagos activados de acogida mediante la reducci&#xF3;n de los efectos antimicrobianos de mol&#xE9;culas como el &#xF3;xido n&#xED;trico (NO). Un T. gondii patatin-como la prote&#xED;na llamada TgPL1 se hab&#xED;a demostrado que es importante para la supervivencia en los macr&#xF3;fagos activados. Aqu&#xED; nos muestran que uno de T. gondii mutante con una deleci&#xF3;n del gen TgPL1 (&#x394;TgPL1) es degradada en los macr&#xF3;fagos activados. Este fenotipo se suprime la degradaci&#xF3;n por la eliminaci&#xF3;n de NO por el uso de un NO sintasa inducible (iNOS) inhibidor de la iNOS o macr&#xF3;fagos deficientes. La adici&#xF3;n ex&#xF3;gena de NO a resultados macr&#xF3;fagos en el crecimiento del par&#xE1;sito reducido pero no la degradaci&#xF3;n de &#x394;TgPL1 par&#xE1;sitos. Estos resultados sugieren que el NO es necesaria pero no suficiente para la degradaci&#xF3;n de &#x394;TgPL1 par&#xE1;sitos en macr&#xF3;fagos activados. Mientras que algunas prote&#xED;nas patatina similares tienen la fosfolipasa A2 (PLA2) actividad, recombinante TgPL1 purificada a partir de E. coli no tiene actividad fosfolipasa. Este resultado no fue sorprendente, ya que contiene una TgPL1 G a S el cambio en el residuo de serina catal&#xED;tica predijo. Una versi&#xF3;n ep&#xED;topo de etiquetado de la parte TgPL1 colocalized con una prote&#xED;na de gr&#xE1;nulos densos en el espacio vacuola. Estos resultados pueden sugerir que TgPL1 se mueve a la vacuola para proteger a los par&#xE1;sitos de &#xF3;xido n&#xED;trico mediante un mecanismo indeterminado.

Una prote&#xED;na similar a Patat&#xED;n Protege Toxoplasma gondii a partir de la degradaci&#xF3;n del &#xF3;xido n&#xED;trico en una forma dependiente de la

Crystal Tobin

Department of Medical Microbiology and Immunology

University of Wisconsin

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Crystal Tobin

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Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

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