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Site-specific Bacterial Chromosome Engineering: &#934;C31 Integrase Mediated Cassette Exchange (IMCE)

The bacterial chromosome may be used to stably maintain foreign DNA in the mega-base range1. Integration into the chromosome circumvents issues such as ...

University of Waterloo

&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;mRFP1&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x30CA;&#x30A4;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x4E0A;&#x3067;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7C21;&#x5358;&#x200B;&#x200B;&#x306A;&#x8CBB;&#x7528;&#x5BFE;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306A;&#x5149;&#x6E90;&#x3001;&#x30B1;&#x30D9;&#x30C3;&#x30AF;&#x5DDE;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AB;&#x30A6;&#x30F3;&#x30BF;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8CBB;&#x7528;&#x5BFE;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x6F14;&#x5287;&#x30B2;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x308F;&#x305A;&#x304B;20&#x5206;&#x3067;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x969B;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7B80;&#x5355;&#x9AD8;&#x6027;&#x4EF7;&#x6BD4;&#x8BBE;&#x5907;&#x7B5B;&#x9009;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; mRFP1 &#x548C;&#x5C3C;&#x7F57;&#x6CB3;&#x7EA2;&#x8272;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x5370;&#x7248;&#x4E0A;&#x7684;&#x805A;&#x5C45;&#x5730;&#x3002;&#x6B64;&#x8BBE;&#x5907;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x4EFB;&#x4F55;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x5149;&#x6E90;&#xFF0C;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6848;&#x4F8B;&#x9B41;&#x5317;&#x514B;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x8BA1;&#x6570;&#x5668;&#x548C;&#x5177;&#x6210;&#x672C;&#x6548;&#x76CA;&#x7684;&#x5267;&#x9662;&#x51DD;&#x80F6;&#x5EFA;&#x3002;&#x8BE5;&#x8BBE;&#x5907;&#x53EF;&#x4EE5;&#x88C5;&#x914D;&#x5728;&#x77ED;&#x77ED; 20 &#x5206;&#x949F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x65F6;&#x7B5B;&#x9009;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EA7;&#x751F;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x5267;&#x9662;&#xFF1A; &#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x67D3;&#x6599;&#x7B5B;&#x9009;&#x4F7F;&#x7528;&#x5267;&#x9662;&#x51DD;&#x80F6;&#x5177;&#x6709;&#x6210;&#x672C;&#x6548;&#x76CA;&#x8BBE;&#x5907;&#x3002;

Here we report a simple cost-effective device for screening colonies on plates for expression of the monomeric red fluorescent protein mRFP1 and the fluorescent dye Nile red. This device can be built from any simple light source, in our case a Quebec Colony Counter, and cost-effective theatre gels. The device can be assembled in as little as 20 min, and it produces excellent results when screening a large number of colonies.

The fluorescence theatre: a cost-effective device using theatre gels for fluorescent protein and dye screening.

Nous rapportons ici un simple appareil &#xE9;conomique pour les colonies de d&#xE9;pistage sur des plaques pour l&#x26;#39;expression de la mRFP1 monom&#xE8;re prot&#xE9;ine fluorescente rouge et le colorant fluorescent rouge Nil. Ce dispositif peut &#xEA;tre construit &#xE0; partir de toute source de lumi&#xE8;re simple, dans notre cas un compteur de colonies du Qu&#xE9;bec, et des gels de th&#xE9;&#xE2;tre co&#xFB;t-efficaces. Le dispositif peut &#xEA;tre assembl&#xE9; en aussi peu que 20 minutes, et il donne d&#x26;#39;excellents r&#xE9;sultats lors du d&#xE9;pistage d&#x26;#39;un grand nombre de colonies.

Le Th&#xE9;&#xE2;tre de fluorescence: un appareil rentable en utilisant des gels de th&#xE9;&#xE2;tre pour le d&#xE9;pistage des prot&#xE9;ines et Dye fluorescent

Hier berichten wir ein einfaches kosteng&uuml;nstiges Ger&auml;t f&uuml;r das screening von Kolonien auf dem Teller f&uuml;r das Monomer rot fluoreszierende Protein-mRFP1 und der fluoreszierenden Farbstoff Nilrot zum Ausdruck. Dieses Ger&auml;t kann aus einer einfachen Lichtquelle, in unserem Fall ein Quebec Kolonie Z&auml;hler und kosteng&uuml;nstige Theater Gele erstellt werden. Das Ger&auml;t kann in weniger als 20 min montiert werden, und es produziert sehr gute Ergebnisse, wenn eine gro&szlig;e Anzahl von Kolonien screening.

Die Fluoreszenz-Theater: eine kosteng&uuml;nstige Ger&auml;t mit Theater Gele f&uuml;r fluoreszierende Protein und Farbstoff-Screening.

Qui riportiamo un semplice dispositivo conveniente per lo screening di colonie su piastre per l&#39;espressione del mRFP1 la proteina fluorescente rossa monomerico e la tintura fluorescente rosso del Nilo. Questo dispositivo pu&ograve; essere creato da qualsiasi fonte di luce semplice, nel nostro caso un contatore di Colonia del Qu&eacute;bec e conveniente Teatro gel. Il dispositivo pu&ograve; essere montato in meno di 20 min, e produce ottimi risultati quando un gran numero di colonie di screening.

Il teatro di fluorescenza: un dispositivo conveniente utilizzando gel di teatro per la proteina fluorescente e screening di tintura.

&#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; monomeric &#xBD89;&#xC740; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; mRFP1 &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xB098; &#xC77C; &#xB808;&#xB4DC;&#xC758; &#xC2DD; &#xD310;&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xC0C1;&#xC601;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBE44;&#xC6A9; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xAD11;&#xC6D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD018;&#xBCA1; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xCE74;&#xC6B4;&#xD130; &#xBC0F; &#xBE44;&#xC6A9; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xADF9;&#xC7A5; &#xC824;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7A5;&#xCE58; 20 &#xBD84; &#xB9CC;&#xD07C; &#xC801;&#xAC8C; &#xC870;&#xB9BD; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB9CE;&#xC740; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0C1;&#xC601; &#xB54C; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0;.

&#xD615;&#xAD11; &#xADF9;&#xC7A5;: &#xADF9;&#xC7A5; &#xC824;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xC6A9; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC7A5;&#xCE58;.

Aqu&#xED; mostramos un simple dispositivo rentable para las colonias en las placas de cribado para la expresi&#xF3;n del mon&#xF3;mero mRFP1 prote&#xED;na roja fluorescente y el colorante fluorescente del Nilo rojo. Este dispositivo puede ser construido a partir de cualquier fuente de luz simple, en nuestro caso un contador de colonias de Quebec, y el costo-eficaces los geles de teatro. El dispositivo puede ser montado en tan poco como 20 minutos, y produce resultados excelentes cuando se est&#xE1; explorando un gran n&#xFA;mero de colonias.

John R. Heil

Biology

University of Waterloo

Site-specific Bacterial Chromosome Engineering: ΦC31 Integrase Mediated Cassette Exchange (IMCE)

John R. Heil

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Site-specific Bacterial Chromosome Engineering: ΦC31 Integrase Mediated Cassette Exchange (IMCE)

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