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Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

Embryonic stem cells (ESC) have two main characteristics: they can be indefinitely propagated in vitro in an undifferentiated state and they are ...

University of Pittsburgh

&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x8FA3;&#x6912;&#x52A0;&#x5DE5;&#x8FA3;&#x6912;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5BF9;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x548C;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x3001; &#x788E;&#x7684;&#x725B;&#x8089;&#x8089;&#x6DF7;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x63D0;&#x53D6;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x5E76;&#x50A8;&#x5B58;&#x5728;&#x6444;&#x6C0F; 7 &#x5EA6; 7 &#x5929;&#x4E2D;&#x63A5;&#x79CD;&#x3002;&#x5408;&#x5E76;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528; C.&#x80DE;&#x8D28;&#x96C4;&#x6027;&#x4E0D;&#x548C;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x83CC;&#x751F;&#x957F;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;&#x63D0;&#x53D6;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x4F24;&#x5BD2;&#x5728;&#x788E;&#x725B;&#x8089;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x6291;&#x83CC;&#x6D53;&#x5EA6;&#x662F;&#x8089;&#x7684; 1.5 &#x6BEB;&#x5347;/100 &#x514B; &#xFF1B;1%&#x3001; 2%&#x3001; 3%&#x548C; 4 %w / w &#x7684;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x5BF9;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5982;&#x7EFF;&#x8113;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x6291;&#x83CC;&#x6548;&#x679C;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x6D53;&#x5EA6; 3 &#x6BEB;&#x5347;/100 &#x514B;&#x7684;&#x8089;&#x8089;&#x7684;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;/100 g 0.3 &#x6BEB;&#x5347;&#x6D53;&#x5EA6;&#x663E;&#x793A;&#x6709;&#x6740;&#x83CC;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5F53; 1 %w / w &#x7684;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x5DF2;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x4E0E;&#x63D0;&#x53D6;&#x8089;&#x65F6;&#xFF0C;&#x51CF;&#x6740;&#x7EFF;&#x8113;&#x6240;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;

&#x751F;&#x725B;&#x8089;&#x8089;&#x4E2D;&#x63A5;&#x79CD;&#x8FA3;&#x6912;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5BF9;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x548C;&#x94DC;&#x7EFF;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x7684;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

The inhibitory effect of the extract of Capsicum annuum bell pepper type was evaluated against Salmonella typhimurium and Pseudomonas aeruginosa, inoculated in minced beef meat mixed with different concentrations of the extract, and stored at 7 degrees C for 7 days. The combined effect of C. annuum extract and sodium chloride on the bacterial growth was evaluated. The minimum inhibitory concentration of the extract to prevent the growth of S. typhimurium in minced beef was 1.5 ml/100 g of meat; the addition of 1%, 2%, 3% and 4% w/w of sodium chloride did not have any additional inhibitory effect on Salmonella. In the case of P. aeruginosa, a concentration of 0.3 ml of the extract/100 g of meat showed a bacteriostatic effect, while a concentration of 3 ml/100 g of meat showed a bactericidal effect. When 1% w/w of sodium chloride was added to the meat together with the extract, the concentration needed to kill P. aeruginosa was reduced.

Antibacterial activity of Capsicum extract against Salmonella typhimurium and Pseudomonas aeruginosa inoculated in raw beef meat.

L&#39;effet inhibiteur de l&#39;extrait du type de poivron Capsicum annuum a &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute; contre Salmonella typhimurium et Pseudomonas aeruginosa, inocul&eacute;s dans la viande de b&oelig;uf hach&eacute; m&eacute;lang&eacute; avec diff&eacute;rentes concentrations de l&#39;extrait et conserv&eacute;e &agrave; 7 degr&eacute;s C pendant 7 jours. Extrait de l&#39;effet combin&eacute; de c. annuum et chlorure de sodium sur la croissance bact&eacute;rienne a &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;. La concentration minimale inhibitrice de l&#39;extrait pour pr&eacute;venir la croissance de S. typhimurium en viande hach&eacute;e &eacute;tait de 1,5 ml/100 g de viande ; l&#39;ajout de 1 %, 2 %, 3 % et 4 % en poids de chlorure de sodium n&#39;avait aucun effet inhibiteur suppl&eacute;mentaire sur Salmonella. Dans le cas de P. aeruginosa, une concentration de 0,3 ml de l&#39;extrait/100 g de viande ont montr&eacute; un effet bact&eacute;riostatique, tandis que d&#39;une concentration de 3 ml/100 g de viande a un effet bact&eacute;ricide. Quand 1 % en poids de chlorure de sodium a &eacute;t&eacute; ajout&eacute; &agrave; la viande ainsi que de l&#39;extrait, la concentration n&eacute;cessaire pour tuer de P. aeruginosa a &eacute;t&eacute; r&eacute;duite.

L&#39;activit&eacute; antibact&eacute;rienne de l&#39;extrait de Capsicum contre Salmonella typhimurium et Pseudomonas aeruginosa inocul&eacute;s dans la viande de boeuf cru.

Antibakterielle Aktivit&#xE4;t der Capsicum-Extrakt gegen Salmonella typhimurium und Pseudomonas aeruginosa in rohes Rindfleisch geimpft.

L&#39;effetto inibitorio dell&#39;Estratto del tipo di peperone Capsicum annuum &egrave; stata valutata contro la Salmonella typhimurium e Pseudomonas aeruginosa, inoculato in carne di manzo macinata mista con diverse concentrazioni di estratto e conservato a 7 gradi C per 7 giorni. L&#39;effetto combinato di c. annuum extract e cloruro di sodio sulla crescita batterica &egrave; stato valutato. La concentrazione minima inibente dell&#39;estratto per prevenire la crescita di S. typhimurium in carne macinata era 1,5 ml/100 g di carne; l&#39;aggiunta di 1%, 2%, 3% e 4% w/w di cloruro di sodio non ha avuto alcun ulteriore effetto inibente sulla Salmonella. Nel caso di p. aeruginosa, una concentrazione di 0,3 ml di Estratto/100g di carne ha mostrato un effetto batteriostatico, mentre una concentrazione di 3 ml/100 g di carne ha mostrato un effetto battericida. Quando 1% w/w di cloruro di sodio &egrave; stato aggiunto alla carne insieme con l&#39;estratto, &egrave; stata ridotta la concentrazione necessaria per uccidere p. aeruginosa.

Attivit&agrave; antibatterica di Estratto di Capsicum contro la Salmonella typhimurium e Pseudomonas aeruginosa inoculato nella carne di manzo cruda.

Capsicum annuum &#x30D4;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x578B;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x3068;&#x725B;&#x8089;&#x306E;&#x3072;&#x304D;&#x8089;&#x8089;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x6DF7;&#x5408; 7 &#x2103; &#x3067; 7 &#x65E5;&#x9593;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3067;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3057;&#x305F;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x3001;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Annuum &#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5869;&#x5316;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;.&#x725B;&#x3072;&#x304D;&#x8089;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x767A;&#x80B2;&#x963B;&#x6B62;&#x6FC3;&#x5EA6; 1.5 ml/100 g &#x306E;&#x8089;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;1%&#x3001;2%&#x3001;3%&#x3001;4 %w/w &#x306E;&#x5869;&#x5316;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x4EFB;&#x610F;&#x8FFD;&#x52A0;&#x6291;&#x5236;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x6FC3;&#x5EA6; 3 ml/100 g &#x306E;&#x8089;&#x306E;&#x4E2D;&#x306E;&#x9759;&#x83CC;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8089;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;/100 g &#x306E; 0.3 ml &#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x6BBA;&#x83CC;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5869;&#x5316;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E; 1 &#xFF05; w/w &#x8089;&#x62BD;&#x51FA;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x7DD1;&#x81BF;&#x83CC;&#x3092;&#x6BBA;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

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&#xACE0;&#xCD94; annuum &#xD53C;&#xB9DD; &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; &#xD2F0; &#xBC0F; &#xB179; &#xB18D; &#xADE0;, &#xB2E4;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC1E0;&#xACE0;&#xAE30; &#xACE0;&#xAE30; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xD63C;&#xD569; &#xD558; &#xACE0; 7 &#xC77C; &#xB3D9;&#xC548; 7 &#xC12D;&#xC528; &#xC628;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC800;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. C. annuum&#xC758; &#xACB0;&#xD569;&#xB41C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC5FC;&#xD654; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBC1B;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC1E0;&#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBBF8; &#xD2F0;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC758; &#xCD5C;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB18D;&#xB3C4; 1.5 ml/100g&#xC758; &#xACE0;&#xAE30;; 1%, 2%, 3% &#xBC0F; 4 %w / w &#xC5FC;&#xD654; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5C6; &#xC5C8; &#xC5B4; &#xC694;. P. &#xB18D; &#xADE0;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; 3 ml/100 g &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; bacteriostatic &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xACE0;&#xAE30; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;/100 g&#xC758; 0.3 ml&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC0B4; &#xADE0; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. 1 %W / w &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, P. &#xB18D; &#xADE0;&#xC744; &#xC8FD; &#xC77C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xCD94; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; &#xD2F0; &#xBC0F; &#xB179; &#xB18D; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; &#xD56D;&#xADE0; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC6D0;&#xC2DC; &#xC1E0;&#xACE0;&#xAE30; &#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se evalu&oacute; el efecto inhibitorio del extracto del tipo de Capsicum annuum pimiento contra Salmonella typhimurium y Pseudomonas aeruginosa, inoculados en carne picada mezclada con diferentes concentraciones del extracto y conservar a 7 grados C, durante 7 d&iacute;as. El efecto combinado de C. annuum extracto y se evalu&oacute; el cloruro de sodio en el crecimiento bacteriano. La concentraci&oacute;n m&iacute;nima inhibitoria del extracto para prevenir el crecimiento de S. typhimurium en carne de vacuno picada fue 1,5 ml/100 g de carne; la adici&oacute;n de 1%, 2%, 3% y 4% p/p de cloruro de sodio no ten&iacute;a ning&uacute;n efecto inhibitorio adicional sobre Salmonella. En el caso de p. aeruginosa, una concentraci&oacute;n de 0,3 ml del extracto/100 g de carne mostr&oacute; un efecto bacteriost&aacute;tico, mientras que una concentraci&oacute;n de 3 ml/100 g de carne mostr&oacute; un efecto bactericido. Cuando 1% p/p de cloruro de sodio se agrega a la carne junto con el extracto, se redujo la concentraci&oacute;n necesaria para matar a p. aeruginosa.

Actividad antibacteriana del extracto de Capsicum contra Salmonella typhimurium y Pseudomonas aeruginosa se inocularon en carne cruda.

&#x76EE;&#x524D;&#x5728;&#x7F8E;&#x56FD; &#xFF08;&#x70AD;&#x75BD;&#x75AB;&#x82D7;&#x5438;&#x9644;) &#x4EBA;&#x7C7B;&#x4F7F;&#x7528;&#x8BB8;&#x53EF;&#x7684;&#x70AD;&#x75BD;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x6548;&#x4EF7;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6D89;&#x53CA;&#x4ECE;&#x4E00;&#x4E2A;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x79EF;&#x6781;&#x63A5;&#x79CD;&#x8C5A;&#x9F20;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4E0E;&#x70AD;&#x75BD;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x6BD2;&#x682A;&#x3002;&#x81F4;&#x547D;&#x6311;&#x6218;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x9700;&#x8981;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x9632;&#x62A4;&#x8BBE;&#x65BD;&#x7684;&#x5B89;&#x5168;&#x4F7F;&#x7528;&#x548C;&#x5B89;&#x5168;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x5E94;&#x53D8;&#x5904;&#x7406;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x56F0;&#x96BE;&#xFF0C;&#x518D;&#x52A0;&#x4E0A;&#x4EBA;&#x6027;&#x5316;&#x7684;&#x8003;&#x8651;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x53EF;&#x89C6;&#x4E3A;&#x6548;&#x529B;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x4E3A;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#xFF0C;&#x75AB;&#x82D7;&#x6B63;&#x5728;&#x7814;&#x5236;&#x7684;&#x975E;&#x81F4;&#x547D;&#x6027;&#x3001; &#x66FF;&#x4EE3;&#x6027;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5C06;&#x9700;&#x8981;&#x5408;&#x9002;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F;&#x3001; &#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5982;&#x9176;&#x8054;&#x514D;&#x75AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6CD5; (ELISA) &#x6216;&#x6BD2;&#x7D20;&#x4E2D;&#x548C;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x3002;&#x7531;&#x5176;&#x4ED6;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76EE;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5E94;&#x5145;&#x5206;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x548C;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x9700;&#x8981;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x662F;&#x9002;&#x5408;&#x5176;&#x76EE;&#x7684;&#x7684;&#x793A;&#x8303;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x7814;&#x7A76;&#x65E8;&#x5728;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5BF9;&#x70AD;&#x75BD;&#x75AB;&#x82D7;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5E94;&#x53CD;&#x9738; ELISA &#x7684;&#x6027;&#x80FD;&#x3002;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x6267;&#x884C;&#x6839;&#x636E;&#x6307;&#x5357; &#x300B; &#x7684;&#x56FD;&#x9645;&#x4F1A;&#x8BAE;&#x7684;&#x534F;&#x8C03; (ICH)&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0A;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B; (37 1159&#x5E74;&#x6B27;&#x76DF;/mL) &#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8303;&#x56F4;&#xFF1A; &#x7EBF;&#x6027; &#xFF08;20 1159&#x5E74;&#x6B27;&#x76DF;/mL &#xFF1B; r2 = 0.99 &#xFF1B; p &#x503C; = 0.21)&#xFF0C;&#x51C6;&#x786E;&#x6027; &#xFF08;91-118%&#x6062;&#x590D;&#xFF09;&#xFF0C;&#x7CBE;&#x5BC6; &#xFF08;&lt; &#x6216; = 20%&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7B80;&#x5386;&#x3001; &#x91CD;&#x590D;&#x6027; &#xFF1B; &lt; &#x6216; = 9 &#x548C; &lt; &#x6216; = 21 %cv&#xFF0C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x6BCF;&#x65E5;&#x548C;&#x6BCF;&#x5206;&#x6790;&#x5E08;&#x5206;&#x522B;)&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9650;&#x5236; &#xFF08;5 &#x6B27;&#x76DF;/&#x6BEB;&#x5347;&#xFF09; &#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x9650;&#x5236; (37 &#x6B27;&#x76DF;/mL)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x6B64;&#x9176;&#x8054;&#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x9644;&#x6CD5;&#x8981;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x9F20;&#x6807;&#x70AD;&#x75BD;&#x75AB;&#x82D7;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027; &#xFF08;&#x6548;&#x4EF7;&#xFF09; &#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x548C;&#x6807;&#x51C6;&#x5316;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x4E0A;&#x8FF0;&#x7279;&#x5F81;&#x3002;

&#x53CD;&#x9738; ELISA &#x6548;&#x4EF7;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x70AD;&#x75BD;&#x75AB;&#x82D7;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x7684;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x3002;

The potency test for the anthrax vaccine currently licensed for human use in the United States (Anthrax Vaccine Adsorbed) involves the protection of actively immunized guinea pigs from a lethal challenge with a virulent strain of Bacillus anthracis. Lethal challenge tests entail the use of specialized containment facilities for the safe and secure handling of the challenge strain. This potential difficulty, plus humane considerations, have prompted us to investigate non-lethal, alternative immunogenicity assays that could be considered as potency tests not only for the current vaccine, but also for vaccines under development. Immunogenicity tests will require suitable measurement of an antibody response to relevant antigens, by methods such as enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) or a toxin neutralization assay. Any assay chosen for this purpose should be adequately validated and reproducible by other laboratories. Validation of an analytical procedure requires the demonstration that the assay is suitable for its intended purpose. The objective of this work was to study the performance of an anti-PA-ELISA designed to assess the antibody response to anthrax vaccines in mice. Validation studies were performed according to the guidelines of the International Conference of Harmonization (ICH), and we have established the working range of the assay (37-1159 EU/mL) on the bases of the following parameters: linearity (20-1159 EU/mL; r2=0.99; p-value=0.21), accuracy (91-118% recovery), precision (< or =20%CV, repeatability; < or =9 and < or =21%CV, intermediate precision per day and per analyst, respectively), detection limit (5 EU/mL), and quantification limit (37 EU/mL). We believe that assay specificity and the above characteristics are adequate to allow this ELISA to be considered for use in a mouse immunogenicity (potency) test of anthrax vaccines, and for the standardization of reagents.

Validation of an anti-PA-ELISA for the potency testing of anthrax vaccine in mice.

Le test de puissance pour le vaccin contre l&#39;anthrax actuellement homologu&eacute; pour la consommation humaine aux &Eacute;tats-Unis (Anthrax vaccin adsorb&eacute;) implique la protection des cobayes activement immunis&eacute;s d&#39;un d&eacute;fi mortel avec une souche virulente de Bacillus anthracis. Tests de provocation l&eacute;tal impliquent l&#39;utilisation d&#39;installations sp&eacute;cialis&eacute;es pour la s&eacute;curit&eacute; d&#39;et s&eacute;curiser la manipulation de la souche de d&eacute;fi. Cette difficult&eacute; potentielle, ainsi que des consid&eacute;rations humanitaires, ont nous a incit&eacute;s &agrave; &eacute;tudier les dosages immunog&eacute;nicit&eacute; non-l&eacute;tales, alternatives qui pourraient &ecirc;tre consid&eacute;r&eacute;s comme des essais de puissance non seulement pour le vaccin actuel, mais aussi pour les vaccins en cours de d&eacute;veloppement. Les tests d&#39;immunog&eacute;nicit&eacute; exigera mesure convenable d&#39;une r&eacute;ponse en anticorps aux antig&egrave;nes pertinentes, par des m&eacute;thodes telles qu&#39;enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) ou un test de neutralisation de la toxine. N&#39;importe quel dosage choisi &agrave; cet effet doit &ecirc;tre ad&eacute;quatement valid&eacute;s et reproductible par d&#39;autres laboratoires. Validation d&#39;une m&eacute;thode d&#39;analyse n&eacute;cessite la d&eacute;monstration que le dosage est adapt&eacute; &agrave; sa fonction pr&eacute;vue. L&#39;objectif de ce travail &eacute;tait d&#39;&eacute;tudier la performance d&#39;un anti-PA-ELISA visant &agrave; &eacute;valuer la r&eacute;ponse immunitaire aux vaccins fi&egrave;vre charbonneuse chez la souris. &Eacute;tudes de validation ont &eacute;t&eacute; effectu&eacute;es conform&eacute;ment aux directives de la Conf&eacute;rence internationale d&#39;harmonisation (CIH), et nous avons &eacute;tabli la port&eacute;e de l&#39;essai (37-1159 UE/mL) sur la base des param&egrave;tres suivants : lin&eacute;arit&eacute; (20-1159 EU/mL; r2 = 0,99 ; valeur p = 0,21), exactitude (91-118 % de r&eacute;cup&eacute;ration), pr&eacute;cision (&lt; ou = 20 % CV, r&eacute;p&eacute;tabilit&eacute;; &lt; ou = 9 et &lt; ou = 21 % CV, fid&eacute;lit&eacute; interm&eacute;diaire par jour et par l&#39;analysterespectivement), la limite de d&eacute;tection (5 UE/mL) et la limite de quantification (37 UE/mL). Nous croyons que la sp&eacute;cificit&eacute; de l&#39;essai et les caract&eacute;ristiques ci-dessus suffisent permettre cette ELISA &agrave; consid&eacute;rer pour une utilisation dans un test de l&#39;immunog&eacute;nicit&eacute; (puissance) de souris des vaccins de la maladie du charbon et de la normalisation des r&eacute;actifs.

Validation d&#39;un ELISA anti-PA pour les essais de puissance du vaccin contre l&#39;anthrax chez la souris.

Die Validierung eines Anti-PA-ELISA zur Wirksamkeitspr&#xFC;fung von Anthrax-Impfstoff bei M&#xE4;usen.

Il test di potenza per il vaccino contro l&#39;antrace attualmente concesso in licenza per uso umano negli Stati Uniti (antrace vaccino adsorbito) prevede la tutela delle cavie immunizzati attivamente da una sfida letale con un ceppo virulento di Bacillus anthracis. Sfida letale test comportano l&#39;uso di strutture di contenimento specializzati per la cassetta di sicurezza e garantire la movimentazione del ceppo sfida. Questo potenziale Difficolt&agrave;, oltre a considerazioni umane, hanno ci ha spinti a indagare dosaggi immunogenicit&agrave; non letali, alternative che potrebbero essere considerati come prove di potenza non solo per il vaccino attuale, ma anche per i vaccini in fase di sviluppo. Immunogenicit&agrave; test richieder&agrave; la misura adatta di una risposta anticorpale agli antigeni rilevanti, da metodi come enzima linked immunosorbent assay (ELISA) o un test di neutralizzazione della tossina. Qualsiasi dosaggio scelto per questo scopo deve essere adeguatamente validati e riproducibile da altri laboratori. Convalida di una procedura analitica richiede la dimostrazione che il dosaggio &egrave; adatto per lo scopo previsto. L&#39;obiettivo di questo lavoro era di studiare le prestazioni di un anti-PA-ELISA progettato per valutare la risposta anticorpale ai vaccini antrace nei topi. Sono stati eseguiti studi di validazione secondo le linee guida della conferenza internazionale di armonizzazione (ICH), e abbiamo stabilito il campo di funzionamento del dosaggio (37-1159 EU/mL) sulla base dei seguenti parametri: linearit&agrave; (EU/mL 20-1159; r2 = 0.99; valore p = 0.21), precisione (91-118% di recupero), precisione (&lt; o = 20% CV, ripetibilit&agrave;; &lt; o = 9 e &lt; o = 21% CV, precisione intermedia al giorno e per analistarispettivamente), limite di rilevabilit&agrave; (5 EU/mL) e il limite di quantificazione (37 EU/mL). Noi crediamo che metodologiche specificit&agrave; e le caratteristiche di cui sopra sono sufficienti consentire questa ELISA da considerarsi per uso in un test di immunogenicit&agrave; (potenza) del mouse di vaccini contro l&#39;antrace e per la normalizzazione dei reagenti.

Convalida di un anti-PA-ELISA per la potenza di sperimentazione del vaccino contro l&#39;antrace nei topi.

&#x73FE;&#x5728;&#x30A2;&#x30E1;&#x30EA;&#x30AB;&#x5408;&#x8846;&#x56FD; &#xFF08;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x5438;&#x7740;) &#x3067;&#x30D2;&#x30C8;&#x7528;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x529B;&#x4FA1;&#x8A66;&#x9A13;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x306A;&#x6311;&#x6226;&#x304B;&#x3089;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x30E2;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x5F37;&#x6BD2;&#x682A;&#x3092;&#x4F34;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81F4;&#x6B7B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8; &#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x5C02;&#x9580;&#x5C01;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x8A2D;&#x5099;&#x3001;&#x30BB;&#x30FC;&#x30D5;&#x30C6;&#x30A3; &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E;&#x53D6;&#x6271;&#x3044;&#x3092;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x4EBA;&#x9053;&#x7684;&#x914D;&#x616E;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x529B;&#x8A66;&#x9A13;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306E;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x975E;&#x81F4;&#x6B7B;&#x3001;&#x4EE3;&#x66FF;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6C42;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3001;&#x9069;&#x5F53;&#x306A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x95A2;&#x9023;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x6297;&#x4F53;&#x6CD5; (elisa) &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3084;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306E;&#x4E2D;&#x548C;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x9069;&#x5207;&#x306B;&#x691C;&#x8A3C;&#x6E08;&#x307F;&#x3067;&#x518D;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x4ED6;&#x306E;&#x6240;&#x3067;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x691C;&#x8A3C;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x672C;&#x6765;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x30C7;&#x30E2;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;-PA-ELISA &#x306E;&#x6027;&#x80FD;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x691C;&#x8A3C;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3068;&#x8ABF;&#x548C;&#x306E;&#x56FD;&#x969B;&#x4F1A;&#x8B70; &#xFF08;ICH&#xFF09; &#x306E;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x65BD;&#x884C;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x811A;&#x90E8;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1; (37-1159 EU/mL) &#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;: &#x76F4;&#x7DDA;&#x6027; (20-1159 EU/mL; r2 = 0.99; p &#x5024; = 0.21)&#x3001;&#x7CBE;&#x5EA6; (91 118 &#xFF05; &#x56DE;&#x5FA9;&#xFF09;&#x3001;&#x7CBE;&#x5BC6; (&lt; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x518D;&#x73FE;; 20 %cv = &lt; &#x307E;&#x305F;&#x306F; = 9 &#x3068; &lt; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E2D;&#x9593;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x30A2;&#x30CA;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8; 1 &#x540D;&#x306B;&#x3064;&#x304D; 1 &#x65E5;&#x3042;&#x305F;&#x308A; 21 %cv =&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;)&#x3001;&#x691C;&#x51FA;&#x9650;&#x754C; (5 EU/mL)&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5B9A;&#x91CF;&#x4E0B;&#x9650;&#x5024; (37 EU/mL)&#x3002;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x4E0A;&#x8A18;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x304C;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027; (&#x52B9;&#x80FD;) &#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x306E; ELISA &#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4FE1;&#x3058;&#x308B;&#x3002;

&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;-PA - &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x70AD;&#x75BD;&#x83CC;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x52B9;&#x529B;&#x8A66;&#x9A13; ELISA &#x306E;&#x691C;&#x8A3C;&#x3002;

&#xD604;&#xC7AC; &#xBBF8;&#xAD6D; (&#xD0C4; &#xC800; &#xADE0; &#xBC31;&#xC2E0; Adsorbed)&#xC5D0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD5C8;&#xAC00; &#xD0C4; &#xC800; &#xADE0; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xD6A8;&#xB2A5; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC758; &#xADE0; &#xB4E4;&#xC740; &#xC545;&#xC131; &#xBCC0;&#xC885;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xCC4C;&#xB9B0;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBA74;&#xC5ED;&#xB41C; &#xAE30;&#xB2C8; &#xD53C;&#xADF8;&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xC804; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC804;&#xBB38;&#xB41C; &#xC81C;&#xC57D; &#xC2DC;&#xC124; &#xC548;&#xC804;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC218;&#xBC18; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC548; &#xB3C4;&#xC804; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC;. &#xC774; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0; &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC778;&#xB3C4;&#xC801;&#xC778; &#xACE0;&#xB824; &#xC0AC;&#xD56D; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; &#xBC31;&#xC2E0; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC911;&#xC778; &#xBC31;&#xC2E0; &#xD6A8;&#xB2A5; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBE44;-&#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778;, &#xB300;&#xCCB4; immunogenicity &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xB77C;&#xB294; &#xBA54;&#xC2DC;&#xC9C0;&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;. Immunogenicity &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; immunosorbent &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; (ELISA) &#xAC19;&#xC740; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xB610;&#xB294; &#xB3C5; &#xC18C; &#xC911;&#xD654; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBAA9;&#xC801;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC801;&#xC808; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC80;&#xC99D; &#xD558; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD604;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; &#xC808;&#xCC28;&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xB3C4; &#xB41C; &#xBAA9;&#xC801;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xB370;&#xBAA8;&#xB97C; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xC548;&#xD2F0;-PA-ELISA &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0C4; &#xC800; &#xADE0; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xC131;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xAD6D;&#xC81C; &#xD68C;&#xC758;&#xC758; &#xC870;&#xD654; (ICH), &#xC9C0;&#xCE68;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C;&#xC758; &#xAE30;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; (37-1159 EU/mL)&#xC758; &#xC791;&#xC5C5; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC124;&#xB9BD;: &#xC120;&#xD615;&#xC131; (20-1159 EU/mL; r 2 = 0.99; p-&#xAC12; = 0.21), &#xC815;&#xD655;&#xB3C4; (91-118% &#xBCF5;&#xAD6C;), &#xC815;&#xBC00; (&lt; &#xB610;&#xB294; 20% &#xC774;&#xB825;&#xC11C;, &#xBC18;&#xBCF5;&#xC131;; = &lt; = 9 &#xB610;&#xB294; &#xBC0F; &lt; = 21% &#xC774;&#xB825;&#xC11C;, &#xC911;&#xAC04; &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC560; &#xB110; &#xB9AC;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB2F9; &#xD558;&#xB8E8; &#xB610;&#xB294;&#xAC01;&#xAC01;), &#xAC80;&#xCD9C; &#xD55C;&#xACC4; (5 EU/mL), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBD80; &#xB7C9; &#xD55C;&#xB3C4; (37 EU/mL). &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xBC0F; &#xC704;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC740;&#xC774; &#xC560; &#xB780; &#xD0C4; &#xC800; &#xADE0; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; immunogenicity (&#xD798;) &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xACE0; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC758; &#xD45C;&#xC900;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xACE0;&#xB824; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xAC83;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;&#xACE0;.

&#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD0C4; &#xC800; &#xADE0; &#xBC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xD6A8;&#xB2A5; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC548;&#xD2F0;-PA-ELISA&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La prueba de potencia para la vacuna contra el &aacute;ntrax actualmente con licencia para uso humano en los Estados Unidos (carbunco vacuna adsorbida) implica la protecci&oacute;n de inmunizados activamente de conejillos de Indias de un desaf&iacute;o mortal con una cepa virulenta de Bacillus anthracis. Desaf&iacute;o letal pruebas implican el aprovechamiento de las instalaciones de contenci&oacute;n especializados para la seguridad y garantizar el manejo de la cepa de desaf&iacute;o. Esta dificultad potencial, adem&aacute;s de las consideraciones humanas, han llevado a investigar ensayos de inmunogenicidad no letales, alternativos que podr&iacute;an considerarse como pruebas de potencia, no s&oacute;lo para la vacuna actual, sino tambi&eacute;n para las vacunas en desarrollo. Pruebas de inmunogenicidad requerir&aacute; la medici&oacute;n adecuada de una respuesta de anticuerpos a los ant&iacute;genos relevantes, mediante m&eacute;todos como la enzima linked immunosorbent assay (ELISA) o un ensayo de neutralizaci&oacute;n de la toxina. Cualquier ensayo elegido para este prop&oacute;sito debe ser adecuadamente reproducible y validado por otros laboratorios. Validaci&oacute;n de un procedimiento anal&iacute;tico requiere la demostraci&oacute;n de que el ensayo es conveniente para su prop&oacute;sito. El objetivo de este trabajo fue estudiar el rendimiento de un anti-PA-ELISA dise&ntilde;ado para evaluar la respuesta de anticuerpos a las vacunas de &aacute;ntrax en ratones. Estudios de validaci&oacute;n se realizaron seg&uacute;n las directrices de la Conferencia Internacional de armonizaci&oacute;n (ICH), y hemos establecido el rango de trabajo del ensayo (37-1159 UE/mL) sobre la base de los siguientes par&aacute;metros: linealidad (20-1159 UE/mL, r2 = 0.99; p-valor = 0.21), exactitud (91-118% recuperaci&oacute;n), precisi&oacute;n (&lt; o = 20% CV, repetibilidad; &lt; o = 9 y &lt; o = 21% CV, precisi&oacute;n intermedia por d&iacute;a y por Analistarespectivamente), l&iacute;mite de detecci&oacute;n (5 UE/mL) y l&iacute;mite de cuantificaci&oacute;n (37 UE/mL). Creemos que la especificidad del ensayo y las caracter&iacute;sticas antedichas son suficientes para permitir esta ELISA a considerar para el uso en una prueba de inmunogenicidad (potencia) de rat&oacute;n de carbunco y para la estandarizaci&oacute;n de los reactivos.

Validaci&oacute;n de un anti-PA-ELISA para la prueba de potencia de la vacuna contra el &aacute;ntrax en ratones.

&#x94C1;&#x548C;&#x53F6;&#x9178;&#x542B;&#x91CF;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E4B;&#x5904;&#x662F;&#x6000;&#x5B55;&#x7684;&#x5987;&#x5973;&#x548C;&#x513F;&#x7AE5;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x7ECF;&#x6D4E;&#x548C;&#x793E;&#x4F1A;&#x53D1;&#x5C55;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E0E;&#x5065;&#x5EB7;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;

[&#x8BC4;&#x4F30;&#x8425;&#x517B;&#x6559;&#x80B2;&#x548C;&#x94C1;&#x8865;&#x5145;&#x9884;&#x9632;&#x598A;&#x5A20;&#x8D2B;&#x8840;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;]&#x3002;

Iron and folic acid deficiencies are the major causes of health problems among pregnant women and children, with a significant negative impact on economic and social development.

[Assessment of nutritional education and iron supplement impact on prevention of pregnancy anemia].

Carences en fer et acide folique sont les principales causes de probl&egrave;mes de sant&eacute; chez les femmes enceintes et les enfants, ayant un impact n&eacute;gatif significatif sur le d&eacute;veloppement &eacute;conomique et social.

[&Eacute;valuation de l&#39;&eacute;ducation nutritionnelle et l&#39;impact de suppl&eacute;ment de fer sur la pr&eacute;vention de l&#39;an&eacute;mie de grossesse].

[Beurteilung der Ern&#xE4;hrungserziehung und Eisenpr&#xE4;parat Auswirkungen auf Verh&#xFC;tung einer Schwangerschaft An&#xE4;mie].

Le carenze di ferro e acido folico sono le principali cause di problemi di salute tra le donne incinte e bambini, con un significativo impatto negativo sullo sviluppo economico e sociale.

[Valutazione di educazione nutrizionale e impatto di supplemento di ferro sulla prevenzione dell&#39;anemia in gravidanza].

&#x9244;&#x3068;&#x8449;&#x9178;&#x306E;&#x6B20;&#x4E4F;&#x306F;&#x3001;&#x7D4C;&#x6E08;&#x793E;&#x4F1A;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30B9;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x598A;&#x5A20;&#x4E2D;&#x306E;&#x5973;&#x6027;&#x3084;&#x5B50;&#x4F9B;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x5065;&#x5EB7;&#x4E0A;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

[&#x6804;&#x990A;&#x6559;&#x80B2;&#x3068;&#x9244;&#x30B5;&#x30D7;&#x30EA;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x598A;&#x5A20;&#x8CA7;&#x8840;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;]&#x3002;

&#xCCA0; &#xBD84; &#xBC0F; &#xC5FD; &#xC0B0; &#xACB0;&#xD54D;&#xC774; &#xACBD;&#xC81C;&#xC640; &#xC0AC;&#xD68C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC784;&#xC0B0;&#xBD80;&#xC640; &#xC544;&#xC774; &#xB4E4;, &#xAC74;&#xAC15; &#xBB38;&#xC81C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC6D0;&#xC778;.

[&#xC601;&#xC591; &#xAD50;&#xC721; &#xBC0F; &#xC784;&#xC2E0; &#xBE48; &#xD608;&#xC758; &#xC608;&#xBC29;&#xC5D0; &#xCCA0; &#xBD84; &#xBCF4;&#xCDA9; &#xC601;&#xD5A5; &#xD3C9;&#xAC00;].

Las deficiencias de hierro y &aacute;cido f&oacute;lico son las principales causas de problemas de salud entre las mujeres embarazadas y ni&ntilde;os, con un impacto negativo significativo en el desarrollo econ&oacute;mico y social.

[Evaluaci&oacute;n de la educaci&oacute;n nutricional y el impacto de suplemento de hierro en la prevenci&oacute;n de la anemia del embarazo].

&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x4F20;&#x7EDF;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x7684;&#x53CD;&#x4E49; RNA&#xFF0C;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x5E72;&#x6270; RNA (siRNA) &#x5206;&#x5B50;&#x5C0F;&#x53D1;&#x5939; Rna (shRNA) &#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x9879;&#x6218;&#x7565;&#x5B9E;&#x73B0;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6301;&#x4E45;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x5177;&#x4F53;&#x548C;&#x6700;&#x4F73;&#x6C89;&#x9ED8;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7ED9;&#x5B9A;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E86;&#x4E00;&#x5957;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53CD;&#x4E49; RNA &#x7247;&#x6BB5;&#x548C;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4EA4;&#x4ED8; shRNA &#x5206;&#x5B50;&#x4E3A;&#x5176;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&beta; &#x578B;&#x53D7;&#x4F53; (TGFbetaRII) &#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x987A;&#x8BB0;&#x8005;&#xFF0C;TGFbetaRII &#x548C;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x5C4F;&#x5E55;&#x9488;&#x5BF9; TGFbetaRII &#x7684;&#x6700;&#x4F18;&#x6D88;&#x58F0;&#x5242;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x53CD;&#x4E49; RNA &#x548C; shRNA &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5176;&#x6548;&#x529B;&#x5728;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E0E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x5916;&#x90E8;&#x8868;&#x793A; TGFbetaRII&#x3002;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x53CD;&#x4E49; Rna &#x4E0D;&#x80FD;&#x6C89;&#x9ED8;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; TGFbetaRII&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;shRNAs &#x5F97;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x6301;&#x7F04;&#x9ED8;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; TGFbetaRII&#x3002;&#x8868;&#x660E;&#x987A; TGFbetaRII/GFP &#x8BB0;&#x8005;&#x4E0A;&#x7684;&#x6548;&#x679C;&#x6700;&#x660E;&#x663E;&#x7684; shRNA A549 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; 70%&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; TGFbetaRII &#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x964D;&#x4F4E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7531; TGFbeta &gt; &#x5728; HeLa &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; 80%&#x3002;

&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x9012;&#x53CD;&#x4E49; RNA &#x548C; shRNA &#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6C89;&#x9ED8;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;-&beta; (TGF-&beta;) &#x578B;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;

Gene silencing is an essential tool in gene discovery and gene therapy. Traditionally, viral delivery of antisense RNA and, more recently, small interfering RNA (siRNA) molecules in the form of small hairpin RNAs (shRNA) has been used as a strategy to achieve gene silencing. Nevertheless, the enduring challenge is to identify molecules that specifically and optimally silence a given target gene. In this study, we tested a set of adenovirus-delivered antisense RNA fragments and adenovirus-delivered shRNA molecules for their ability to target human transforming growth factor-beta type II receptor (TGFbetaRII). We used a dicistronic reporter, consisting of the coding sequences for TGFbetaRII and green fluorescent protein (GFP) to screen for optimal silencing agents targeting TGFbetaRII. Our results show, for both antisense RNA and shRNA molecules, that their effectiveness in the GFP screen correlated directly with their ability to reduce exogenously expressed TGFbetaRII. Unexpectedly, the antisense RNAs were unable to silence endogenous TGFbetaRII. In contrast, the shRNAs were able to silence endogenous TGFbetaRII. The shRNA that demonstrated the most pronounced effect on the dicistronic TGFbetaRII/GFP reporter reduced endogenous TGFbetaRII protein expression by 70% in A549 cells and reduced TGFbeta signaling by >80% in HeLa cells.

Adenovirus-delivered antisense RNA and shRNA exhibit different silencing efficiencies for the endogenous transforming growth factor-beta (TGF-beta) type II receptor.

Silen&ccedil;age g&eacute;nique est un outil essentiel dans la d&eacute;couverte des g&egrave;nes et th&eacute;rapie g&eacute;nique. Traditionnellement, virale livraison d&#39;ARN antisens et, plus r&eacute;cemment, petite interf&eacute;rer des mol&eacute;cules d&#39;ARN (siRNA) sous la forme d&#39;une petite &eacute;pingle &agrave; cheveux RNAs (shARN) a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; comme une strat&eacute;gie pour atteindre le silen&ccedil;age g&eacute;nique. N&eacute;anmoins, le d&eacute;fi durable est d&#39;identifier des mol&eacute;cules sp&eacute;cifiquement et de fa&ccedil;on optimale silence un g&egrave;ne cible donn&eacute;e. Dans cette &eacute;tude, nous avons test&eacute; un ensemble de fragments d&#39;ARN antisens ad&eacute;novirus-livr&eacute; et mol&eacute;cules de shARN ad&eacute;novirus-livr&eacute; pour leur capacit&eacute; &agrave; cibler le r&eacute;cepteur de II transformer en humain facteur de croissance-b&ecirc;ta type (TGFbetaRII). Nous avons utilis&eacute; un reporter de dicistronic, dont les s&eacute;quences codantes pour TGFbetaRII et la prot&eacute;ine fluorescente verte (GFP) d&eacute;pister des agents silencieux optimales ciblant TGFbetaRII. Nos r&eacute;sultats montrent, pour les deux antisens RNA et shARN mol&eacute;cules, leur efficacit&eacute; dans l&#39;&eacute;cran de la GFP en corr&eacute;lation directe avec leur capacit&eacute; &agrave; r&eacute;duire de fa&ccedil;on exog&egrave;ne exprim&eacute; TGFbetaRII. Contre toute attente, l&#39;ARN antisens &eacute;tait incapables de garder le silence TGFbetaRII endog&egrave;ne. En revanche, les interf&eacute;rents pouvaient faire taire TGFbetaRII endog&egrave;ne. Le shARN ayant d&eacute;montr&eacute; l&#39;effet plus prononc&eacute; sur le journaliste de TGFbetaRII/GFP dicistronic r&eacute;duit l&#39;expression endog&egrave;ne de la prot&eacute;ine TGFbetaRII de 70 % dans les cellules A549 et TGF signalisation par &gt; 80 % dans les cellules HeLa.

Ad&eacute;novirus-livr&eacute; des ARN antisens et des shARN pr&eacute;sentent diff&eacute;rentes efficacit&eacute;s silencieux pour l&#39;endog&egrave;ne r&eacute;cepteur transforming growth factor-beta (TGF-b&ecirc;ta) type II.

Gene silencing ist ein wesentliches Instrument in Gen-Entdeckung und Gentherapie. Traditionell wurde virale Lieferung von antisense-RNA und, was noch vor kurzem kleine Eingriffe (SiRNA) RNA-Molek&uuml;le in Form von kleinen Haarnadel RNAs (ShRNA) als Strategie verwendet gen Schweigen zu erreichen. Dennoch ist die dauerhafte Herausforderung Molek&uuml;le identifiziert, die speziell und optimal ein angegebene Ziel-gen schweigen. In dieser Studie haben wir eine Reihe von Adenovirus-geliefert antisense-RNA-Fragmente und Adenovirus-geliefert ShRNA-Molek&uuml;le f&uuml;r ihre F&auml;higkeit, menschliche transformierende Wachstumsfaktor-Beta Typ II-Rezeptor (TGFbetaRII) als Ziel getestet. Wir verwendeten Dicistronic Reporter, bestehend aus der kodierende Sequenzen f&uuml;r TGFbetaRII und gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP) Sie auf die optimale silencing Agenten f&uuml;r TGFbetaRII. Unsere Ergebnisse zeigen, f&uuml;r beide Antisense-RNA und ShRNA-Molek&uuml;le, die ihre Wirksamkeit in der GFP-Bildschirm direkt mit ihrer F&auml;higkeit zur Reduzierung der exogen korreliert ausgedr&uuml;ckt TGFbetaRII. Unerwartet, konnten sich die antisense RNAs endogene TGFbetaRII zum Schweigen zu bringen. Im Gegensatz dazu konnten die ShRNAs endogene TGFbetaRII zum Schweigen zu bringen. Der ShRNA, das demonstrierte die ausgepr&auml;gteste Wirkung auf die Dicistronic-TGFbetaRII/GFP-Reporter reduzierte endogene TGFbetaRII Proteinexpression von 70 % in A549 Zellen und reduzierte TGFbeta Signalisierung durch &gt; 80 % im HeLa-Zellen.

Adenovirus-geliefert antisense-RNA und ShRNA zeigen verschiedene silencing Wirkungsgrade f&uuml;r die endogene transformierende Wachstumsfaktor-Beta (TGF-Beta)-Typ-II-Rezeptor.

Silenziamento genico &egrave; uno strumento essenziale nella scoperta del gene e terapia genica. Tradizionalmente, virale consegna di RNA antisenso e, pi&ugrave; recentemente, piccola molecole di RNA (siRNA) sotto forma di piccoli hairpin RNAs (shRNA) di interferire &egrave; stato utilizzato come una strategia per raggiungere il silenziamento genico. Tuttavia, la perdurante sfida &egrave; di identificare molecole che specificamente e in modo ottimale un gene bersaglio dato il silenzio. In questo studio, abbiamo testato una serie di frammenti di RNA antisenso adenovirus-consegnati e molecole di shRNA adenovirus-consegnato per la loro capacit&agrave; di bersaglio umano transforming growth factor-beta tipo II receptor (TGFbetaRII). Abbiamo usato un reporter di dicistronic, costituito dalle sequenze codificanti per TGFbetaRII e la proteina fluorescente verde (GFP) per lo screening ottimali silenziamento agenti targeting TGFbetaRII. I nostri risultati mostrano, per entrambi RNA antisenso e shRNA molecole, che la loro efficacia nella schermata di GFP correlata direttamente con la loro capacit&agrave; di ridurre in maniera esogena espresso TGFbetaRII. Inaspettatamente, il RNAs antisenso era in grado di silenzio TGFbetaRII endogena. In contrasto, il shRNAs erano in grado di silenzio TGFbetaRII endogena. ShRNA che ha dimostrato l&#39;effetto pi&ugrave; pronunciato sul reporter di TGFbetaRII/GFP dicistronic ridotta espressione della proteina di TGFbetaRII endogeno del 70% nelle cellule A549 e ridotto TGFbeta signaling di &amp;gt; 80% in cellule HeLa.

Adenovirus-consegnato RNA antisenso e shRNA esibiscono diverse efficienze di silenziamento per endogena transforming growth factor-beta (TGF-beta) tipo II recettore.

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; RNA &#x3068;&#x3001;&#x3082;&#x3063;&#x3068;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3; Rna &#xFF08;shRNA&#xFF09; &#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x306E; RNA (siRNA) &#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x306F;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x6700;&#x9069;&#x306B;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6C88;&#x9ED9;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A3;&#x30EB;&#x30B9;&#x914D;&#x4FE1;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; RNA &#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x914D;&#x4FE1; shRNA &#x5206;&#x5B50;&#x4EBA;&#x9593;&#x5909;&#x9769;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; II &#x53D7;&#x5BB9; (TGFbetaRII) &#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; dicistronic &#x306E;&#x8A18;&#x8005;&#x306F;&#x3001;TGFbetaRII &#x3068;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (GFP) &#x753B;&#x9762;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8; TGFbetaRII &#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; RNA &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092; GFP &#x753B;&#x9762;&#x5EA6;&#x5916;&#x524A;&#x6E1B;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x95A2; shRNA &#x5206;&#x5B50;&#x3001;TGFbetaRII &#x8868;&#x73FE;&#x3002;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; Rna &#x306F;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; TGFbetaRII &#x3092;&#x6C88;&#x9ED9;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;Shrna &#x5185;&#x56E0;&#x6027; TGFbetaRII &#x3092;&#x6C88;&#x9ED9;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;Dicistronic TGFbetaRII/GFP &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x63EE; shRNA 70 &#xFF05; A549 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027; TGFbetaRII &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3088;&#x308B; tgf &beta; &#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x76EE; HeLa &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; 80 &#xFF05;&#x3002;

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A3;&#x30EB;&#x30B9;&#x914D;&#x4FE1;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9; RNA &#x304A;&#x3088;&#x3073; shRNA &#x5909;&#x63DB;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#xFF08;TGF-&beta;&#xFF09; &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; II &#x53D7;&#x5BB9;&#x306E;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x8868;&#x308F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC785;&#xC744; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC80;&#xC0C9; &#xBC0F; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC804;&#xB2EC; &#xC13C;&#xC2A4; RNA &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB354; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (siRNA) &#xBD84;&#xC790; &#xC791;&#xC740; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; RNAs (shRNA)&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC785;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xB7B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xB3C4;&#xC804;&#xC744; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xCD5C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCE68;&#xBB35; &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xB2EC; &#xC13C;&#xC2A4; RNA &#xC870;&#xAC01; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC720;&#xD615; II &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TGFbetaRII)&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xB2EC; shRNA &#xBD84;&#xC790; &#xC9D1;&#xD569; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;. &#xCF54;&#xB529; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; TGFbetaRII &#xBC0F; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) Tgfbetarii&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; silencing &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD654;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; dicistronic &#xAE30;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; antisense RNA&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; GFP &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; exogenously&#xB97C; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xAD00; shRNA &#xBD84;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; TGFbetaRII. &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C;, &#xC13C;&#xC2A4; RNAs &#xC0DD; TGFbetaRII &#xCE68;&#xBB35; &#xC218; &#xC5C6;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, Shrnas&#xB294; &#xC0DD; TGFbetaRII &#xCE68;&#xBB35; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. Dicistronic TGFbetaRII/GFP &#xAE30;&#xC790;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC2DC;&#xC5F0; shRNA A549 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; 70%&#xB85C; &#xC0DD; TGFbetaRII &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; Tgfbeta&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &amp;gt; &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; 80%.

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xB2EC; &#xC13C;&#xC2A4; RNA&#xC640; Shrna&#xB294; &#xB0B4; &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&#xBCA0;&#xD0C0; (TGF-&#xBCA0;&#xD0C0;) &#xC720;&#xD615; II &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; silencing &#xD6A8;&#xC728;&#xC131;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC;.

Silenciamiento del gen es una herramienta esencial en el descubrimiento de genes y terapia g&eacute;nica. Tradicionalmente, viral entrega de ARN antisentido y, m&aacute;s recientemente, peque&ntilde;a mol&eacute;culas de ARN (siRNA) en forma de horquilla peque&ntilde;o RNAs (shRNA) de interferir se ha utilizado como una estrategia para lograr el silenciamiento g&eacute;nico. Sin embargo, el desaf&iacute;o permanente es identificar mol&eacute;culas que espec&iacute;ficamente y &oacute;ptimo silenciar un gen determinado objetivo. En este estudio, hemos probado un conjunto de fragmentos de ARN antisentidos entregado por adenovirus y mol&eacute;culas shRNA adenovirus-entregado por su capacidad de tratar del receptor humano transformador beta-factor de crecimiento tipo II (TGFbetaRII). Utilizamos un reportero de dicistronic, que consiste en las secuencias de codificaci&oacute;n para que la TGFbetaRII y la prote&iacute;na verde fluorescente (GFP) detectar agentes silenciamiento &oacute;ptima orientaci&oacute;n TGFbetaRII. Nuestros resultados muestran, para ambos antisentido RNA y shRNA mol&eacute;culas, que su eficacia en la pantalla de la GFP se correlaciona directamente con su capacidad para reducir ex&oacute;geno expresaron TGFbetaRII. Inesperadamente, el ARN antisentido fueron incapaces de silenciar TGFbetaRII end&oacute;geno. En contraste, los shRNAs pudieron silenciar TGFbetaRII end&oacute;geno. El shRNA que demostr&oacute; el efecto m&aacute;s pronunciado en el reportero de TGFbetaRII/GFP dicistronic reducci&oacute;n end&oacute;gena TGFbetaRII expresi&oacute;n de la prote&iacute;na en un 70% en las c&eacute;lulas A549 y TGFbeta por &gt; 80% en c&eacute;lulas HeLa.

ARN antisentido entregado por adenovirus y shRNA exhiben diferentes eficiencias de silenciamiento para el end&oacute;gena transformadora del factor de crecimiento beta (TGF-beta) tipo II receptor.

Anti-receptor &#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;225 &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x65B9;&#x6848;&#xFF0C;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#xFF0C;&#x963B;&#x6B62;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; (EGFR) &#x7684;&#x914D;&#x4F53;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5BF9; EGFR &#x5185;&#x541E;&#x3001; &#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x9000;&#x5316;&#x6B64;&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; (125) &#x5185;, &#x541E;&#x4F5C;&#x7528;-225 &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x6BD4;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x660E;&#x663E;&#x8F83;&#x6162;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8109;&#x51B2;&#x5927;&#x901A;&#x5316;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x6211;-225 (125) &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x65B9;&#x6848;&#x6BD4;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F; (125) &#x56E0;&#x5B50;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x88AB;&#x56DE;&#x6536;&#x5230;&#x8868;&#x9762;&#x3002;&#x53E6;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708; 225 (125) &#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;AG1478&#xFF0C;&#x5177;&#x4F53;&#x7684; EGFR &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x5176;&#x6297;&#x5E72;&#x6270;&#x6027;&#x53EF;&#x89C1;&#x4E00;&#x6591;&#x3002;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x6CBB;&#x7597; 225 &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x65B9;&#x6848;&#x7ED3;&#x679C;&#x5728; 30-40%&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x548C;&#x603B;&#x6C34;&#x5E73;&#x5206;&#x6790;&#x51CF;&#x5C11;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x7F13;&#x6162;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684;&#x603B;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;225 &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x65B9;&#x6848;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5185;&#x5728;&#x5316;&#x548C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x901A;&#x8FC7;&#x673A;&#x5236;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x8BE5;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; EGFR &#x5185;&#x5316;&#x548C;&#x4E0B;&#x8C03;&#x4E0B;&#x8C03;&#x3002;

Anti-receptor &#x914D;&#x4F53;&#x963B;&#x585E; 225 &#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x5BF9;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x80DE;&#x541E;&#x548C;&#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The anti-receptor antibody, 225 mAb, is known to block binding of ligand to the epidermal growth factor receptor (EGFR). However, the effect of this neutralizing antibody on EGFR endocytosis, trafficking and degradation remains unclear. Here, we demonstrate that endocytosis of (125)I-225 mAb occurs, albeit with a slower rate than that of EGF. Using pulse chase assays, we show that internalized (125)I-225 mAb is recycled to the surface much more efficiently than internalized (125)I-EGF. Also, we found that internalization of (125)I-225 mAb, in contrast to that of EGF, is independent of receptor tyrosine kinase activity, as evidenced by its insensitivity to AG1478, a specific EGFR tyrosine kinase inhibitor. Analysis of the levels of cell surface and total EGFR showed that treatment with 225 mAb results in a 30-40% decrease in surface EGFR and a relatively slow downregulation of total EGFR. Taken together, these data indicate that 225 mAb induces internalization and downregulation of EGFR via a mechanism distinct from that underlying EGF-induced EGFR internalization and downregulation.

Effect of the anti-receptor ligand-blocking 225 monoclonal antibody on EGF receptor endocytosis and sorting.

Les anticorps anti-receptor, mAb 225, est connu pour bloquer la liaison de ligand pour le r&eacute;cepteur du facteur de croissance &eacute;pidermique (EGFR). Cependant, l&#39;effet de cet anticorps neutralisant sur endocytose EGFR, le trafic et la d&eacute;gradation reste peu clair. Ici, nous d&eacute;montrons que l&#39;endocytose de (125)-225 mAb se produit, mais avec un rythme plus lent que celui de l&#39;EGF. Utilisant pulse chase, nous montrons qu&#39;int&eacute;rioris&eacute; (125) j&#39;ai-225 mAb est recycl&eacute; dans la surface beaucoup plus efficacement qu&#39;int&eacute;rioris&eacute; (125) j&#39;ai-EGF. En outre, nous avons trouv&eacute; qu&#39;internalisation de (125)-225 mAb, contrairement &agrave; celle de l&#39;EGF, est ind&eacute;pendante de l&#39;activit&eacute; tyrosine kinase du r&eacute;cepteur, comme en t&eacute;moigne son insensibilit&eacute; aux AG1478, un inhibiteur de kinase EGFR tyrosine sp&eacute;cifique. Analyse des niveaux de cellules superficielles et total EGFR a montr&eacute; qu&#39;un traitement avec 225 r&eacute;sultats de mAb dans un 30-40 % de diminution de surface EGFR et une diminution relativement lente de l&#39;EGFR, total. Pris ensemble, ces r&eacute;sultats indiquent que mAb 225 induit l&#39;internalisation et la diminution de l&#39;expression de l&#39;EGFR, via un m&eacute;canisme distinct de celui sous-jacent internalisation EGFR induite par l&#39;EGF et diminution de l&#39;expression.

Effet de l&#39;anti-receptor ligand bloquant 225 monoclonal sur l&#39;endocytose des r&eacute;cepteurs EGF et tri.

Der anti-receptor Antik&ouml;rper, 225 mAb ist bekannt, dass die Bindung des Liganden an den epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) blockiert. Die Wirkung dieser neutralisierende Antik&ouml;rper auf EGFR Endozytose, Drogenhandel und Abbau bleibt jedoch unklar. Hier zeigen wir, dass Endozytose (125)-225 mAb auftritt, wenn auch mit einer langsameren Rate als der EGF. Mit Puls-Jagd-Assays, wir zeigen, dass verinnerlicht (125)-225 mAb ist viel effizienter als (125)-EGF verinnerlicht wiederverwendet werden, um die Oberfl&auml;che. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass die Internalisierung der (125)-225-mAb, im Gegensatz zu der EGF-Rezeptor-Tyrosinkinase-Aktivit&auml;t, unabh&auml;ngig ist, wie durch seine Unempfindlichkeit gegen AG1478, ein bestimmtes EGFR-Tyrosinkinase-Hemmer. Analyse des Gehalts an Zelle Oberfl&auml;che und total EGFR, dass die Behandlung mit 225 mAb-Ergebnisse in einer 30-40 zeigte % R&uuml;ckgang der Oberfl&auml;che EGFR und eine relativ langsame Heraufregulation des gesamten EGFR. Zusammen genommen, diese Daten zeigen, dass 225 mAb induziert Internalisierung und Heraufregulation des EGFR &uuml;ber einen Mechanismus, der dieser zugrunde liegenden EGFR EGF-induzierte Internalisierung und Heraufregulation unterscheiden.

Effekt der anti-receptor Ligand blockierende 225 monoklonale Antik&ouml;rper auf EGF-Rezeptor Endozytose und sortieren.

L&#39;anticorpo anti-receptor, 225 mAb, &egrave; noto per bloccare l&#39;associazione del ligando per il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR). Tuttavia, l&#39;effetto di questo anticorpo neutralizzante sull&#39;endocitosi EGFR, traffico e degrado rimane poco chiaro. Qui, ci dimostrano che endocitosi (125)-225 mAb si verifica, anche se con un tasso pi&ugrave; lento di quello di EGF. Utilizzando dosaggi chase pulse, mostriamo che interiorizzato (125) I-225 mAb &egrave; riciclato per la superficie in modo pi&ugrave; efficiente rispetto interiorizzato (125) mi-EGF. Inoltre, abbiamo trovato che interiorizzazione di mAb 225 (125), in contrasto con quella di EGF, &egrave; indipendente da attivit&agrave; di recettore tirosina chinasi, come evidenziato dalla sua insensibilit&agrave; a AG1478, un inibitore di EGFR tirosin chinasi specifico. Analisi dei livelli di cellule superficiali e totale EGFR ha dimostrato che il trattamento con 225 mAb risultati in un 30-40% diminuzione superficie EGFR e una downregulation relativamente lenta dell&#39;EGFR totale. Presi insieme, questi dati indicano che mAb 225 induce interiorizzazione e downregulation di EGFR attraverso un meccanismo differente da quello sottostante interiorizzazione indotta da EGF EGFR e downregulation.

Effetto dell&#39;anti-receptor ligand-blocco 225 anticorpo monoclonale endocitosi recettore EGF e ordinamento.

Anti-receptor &#x6297;&#x4F53;&#x3001;225 mAb &#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;EGFR&#xFF09; &#x3078;&#x306E; ligand &#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4E2D;&#x548C;&#x6297;&#x4F53;&#x304C; EGFR &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3084;&#x52A3;&#x5316;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; (125) &#x306E;&#x5B9F;&#x8A3C; - 225 mAb &#x767A;&#x751F;&#x3001;EGF &#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9045;&#x3044;&#x901F;&#x5EA6;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3002;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; (125) &#x79C1;&#x306F; 225 &#x3092;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3059; mAb (125) &#x306F; EGF &#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7121;&#x795E;&#x7D4C;&#x306B; AG1478&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; EGFR &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7ACB;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B; EGF, &#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306E; (125) - 225 mAb &#x306E;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x3092;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EGFR &#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642; 225 mAb &#x7D50;&#x679C;&#x3092; 30-40% &#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3068;&#x30C8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30EB;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x8868;&#x9762; EGFR &#x3084;&#x5408;&#x8A08; EGFR &#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x9045;&#x3044;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; 225 mAb &#x5185;&#x5316;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B; EGF &#x8A98;&#x8D77; EGFR &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CA;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; egfr &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

EGF &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048; anti-receptor &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; 225 &#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

Anti-receptor &#xD56D; &#xCCB4;, 225 mAb, &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (EGFR)&#xC5D0; ligand &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCC28;&#xB2E8; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, EGFR endocytosis, &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; &#xBC0F; &#xC800;&#xD558;&#xAC00; &#xC911;&#xD654; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8; endocytosis (125)-225 mAb &#xBC1C;&#xC0DD; EGF &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB290;&#xB9B0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD568;&#xAED8; &#xC4F0; &#xC2E0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB0B4; &#xBA74; (125) &#xB098;-225 &#xD45C;&#xC2DC; &#xD384;&#xC2A4; &#xCCB4;&#xC774;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, mAb &#xB098; (125) EGF&#xB97C; &#xB0B4; &#xBA74; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xBA74; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; AG1478, &#xD2B9;&#xC815; EGFR &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0;&#xB294; &#xBB34;&#xAC10;&#xAC01;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D; &#xB41C; EGF, &#xB2EC;&#xB9AC; (125)-225 Mab&#xC758; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xBD84;&#xC11D; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xBC0F; &#xCD1D; EGFR 30-40%&#xC5D0;&#xC11C; 225 mAb &#xACB0;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xB808;&#xBCA8;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xD45C;&#xBA74; EGFR &#xCD1D; EGFR&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB290;&#xB9B0; downregulation&#xC5D0;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD45C;&#xC2DC; 225 mAb &#xC720;&#xB3C4; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xBC0F; &#xD574;&#xB2F9; &#xAE30;&#xBCF8; EGF &#xC720;&#xB3C4; EGFR &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xBC0F; downregulation&#xC5D0;&#xC11C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; EGFR&#xC758; downregulation.

EGF &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; endocytosis &#xBC0F; &#xC815;&#xB82C;&#xC5D0; anti-receptor ligand &#xCC28;&#xB2E8; 225 &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

El anticuerpo anti-receptor, mAb 225, es conocido para bloquear la Uni&oacute;n del ligando al receptor del factor de crecimiento epid&eacute;rmico (RFCE). Sin embargo, el efecto de este anticuerpo neutralizante en la endocitosis EGFR, el tr&aacute;fico y la degradaci&oacute;n sigue siendo confuso. Aqu&iacute;, demostramos que endocitosis (125)-225 mAb se produce, aunque con un ritmo m&aacute;s lento que el de EGF. Usando an&aacute;lisis de persecuci&oacute;n de pulso, mostramos que internalizado (125)-225 mAb es reciclado a la superficie mucho m&aacute;s eficientemente que internalizado (125)-EGF. Tambi&eacute;n, se encontr&oacute; que la internalizaci&oacute;n de mAb de-225 (125), en contraste con la de EGF, es independiente de la actividad del receptor tirosina quinasa, evidenciada por su insensibilidad a AG1478, un inhibidor espec&iacute;fico de EGFR tirosina quinasa. An&aacute;lisis de los niveles de c&eacute;lulas superficiales y total EGFR demostr&oacute; que el tratamiento con 225 mAb resultados en un 30-40% disminuci&oacute;n EGFR superficial y un downregulation relativamente lento de EGFR total. Tomados en conjunto, estos datos indican que mAb 225 induce la internalizaci&oacute;n y downregulation de EGFR mediante un mecanismo distinto que subyacente EGFR EGF-inducida de internalizaci&oacute;n y regulaci&oacute;n a la baja.

Efecto del anti-receptor ligand-bloqueo 225 anticuerpo monoclonal en la endocitosis del receptor de EGF y clasificaci&oacute;n.

&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x8F7D;&#x6709; 1634&#x5E74;&#x8282;&#x70B9;&#x624B;&#x52A8;&#x7B56;&#x5C55;&#x4EBA;&#x4FE1;&#x4EE4;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x548C; 5089 &#x4FE1;&#x53F7;&#x76D1;&#x7BA1;&#x5173;&#x7CFB;&#x901A;&#x8FC7;&#x96C6;&#x6210;&#x764C;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; epigenetically &#x6539;&#x53D8;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x764C;&#x75C7;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x800C;&#x764C;&#x75C7;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7BA1;&#x7406;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7279;&#x70B9;&#x764C;&#x75C7;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5EFA;&#x7B51;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x603B;&#x4F53;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECE;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E0A;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5730;&#x56FE;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B; 326 &#x8282;&#x70B9;&#x3001; 892 &#x94FE;&#x63A5;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x53CA;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x5730;&#x56FE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5206;&#x89E3;&#x4E3A; 12 &#x62D3;&#x6251;&#x533A;&#x57DF;&#x6216;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5757;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x51E0;&#x4E2A; &#39;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8857;&#x533A;&#39; &#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x4E30;&#x5BCC;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7A81;&#x53D8;&#x53CA;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5757;&#xFF0C;&#x51FA;&#x73B0;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x53D1;&#x6325;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x764C;&#x75C7;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x529F;&#x80FD;&#x534F;&#x4F5C;&#x4E24;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5757;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x548C;&#x80BA;&#x764C;&#x80BF;&#x7624;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6BD4;&#x5176;&#x4ED6;&#x764C;&#x75C7;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x5757;&#x4E4B;&#x95F4;&#x66F4;&#x4E3A;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x534F;&#x4F5C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x57FA;&#x51C6;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6240;&#x5F97;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7A81;&#x53D8;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7B5B;&#x9009;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x589E;&#x5F3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6E05;&#x9664;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6A21;&#x5F0F;&#x867D;&#x7136;&#x7A81;&#x53D8;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E00;&#x7EA7;&#x5C31;&#x6781;&#x4E3A;&#x591A;&#x6837;&#x548C;&#x590D;&#x6742;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E00;&#x7EA7;&#x53CD;&#x590D;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x534F;&#x4F5C;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5728;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x53D1;&#x73B0;&#x65B0;&#x578B;&#x764C;&#x75C7;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x764C;&#x75C7;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x6620;&#x5C04;&#x3002;

We conducted a comprehensive analysis of a manually curated human signaling network containing 1634 nodes and 5089 signaling regulatory relations by integrating cancer-associated genetically and epigenetically altered genes. We find that cancer mutated genes are enriched in positive signaling regulatory loops, whereas the cancer-associated methylated genes are enriched in negative signaling regulatory loops. We further characterized an overall picture of the cancer-signaling architectural and functional organization. From the network, we extracted an oncogene-signaling map, which contains 326 nodes, 892 links and the interconnections of mutated and methylated genes. The map can be decomposed into 12 topological regions or oncogene-signaling blocks, including a few 'oncogene-signaling-dependent blocks' in which frequently used oncogene-signaling events are enriched. One such block, in which the genes are highly mutated and methylated, appears in most tumors and thus plays a central role in cancer signaling. Functional collaborations between two oncogene-signaling-dependent blocks occur in most tumors, although breast and lung tumors exhibit more complex collaborative patterns between multiple blocks than other cancer types. Benchmarking two data sets derived from systematic screening of mutations in tumors further reinforced our findings that, although the mutations are tremendously diverse and complex at the gene level, clear patterns of oncogene-signaling collaborations emerge recurrently at the network level. Finally, the mutated genes in the network could be used to discover novel cancer-associated genes and biomarkers.

A map of human cancer signaling.

Nous avons effectu&eacute; une analyse compl&egrave;te d&#39;un r&eacute;seau de signalisation manuellement curated humain contenant des n&oelig;uds de 1634 et 5089 signalisation relations r&eacute;glementaires en int&eacute;grant le cancer associated g&eacute;n&eacute;tiques et &eacute;pig&eacute;n&eacute;tiques modifi&eacute; g&egrave;nes. Nous trouvons que le cancer g&egrave;nes mut&eacute;s sont enrichis en boucles de r&eacute;glementation signalisation positifs, alors que les g&egrave;nes m&eacute;thyl&eacute;s associ&eacute;e &agrave; cancer sont enrichis en boucles de r&eacute;gulation signalisation n&eacute;gatives. Plus loin, nous avons caract&eacute;ris&eacute; une vue d&#39;ensemble de l&#39;organisation du cancer-signalisation architecturale et fonctionnelle. Depuis le r&eacute;seau, nous avons extrait une carte de signalisation oncog&egrave;ne, qui contient les 326 n&oelig;uds, 892 liens et les interconnexions des g&egrave;nes mut&eacute;s et m&eacute;thyl&eacute;s. Le plan peut &ecirc;tre d&eacute;compos&eacute; en 12 r&eacute;gions topologiques ou blocs de signalisation oncog&egrave;ne, y compris quelques &laquo; oncog&egrave;ne-signalisation-dependent blocs &raquo; dans lequel fr&eacute;quemment utilis&eacute;s signalisation oncog&egrave;ne &eacute;v&eacute;nements sont enrichis. Un tel bloc, dont les g&egrave;nes sont fortement mut&eacute; et m&eacute;thyl&eacute;s, appara&icirc;t dans la plupart des tumeurs et joue donc un r&ocirc;le central dans la signalisation du cancer. Collaborations fonctionnelles entre deux blocs de l&#39;oncog&egrave;ne-signalisation-d&eacute;pendante se produisent dans la plupart des tumeurs, bien que les tumeurs du sein et du poumon montrent des patrons de collaboration plus complexes entre plusieurs blocs que les autres types de cancer. Analyse comparative de deux ensembles de donn&eacute;es provenant d&#39;un d&eacute;pistage syst&eacute;matique des mutations dans les tumeurs a renforc&eacute; davantage nos r&eacute;sultats qui, bien que les mutations sont extr&ecirc;mement vari&eacute;s et complexes au niveau de la g&egrave;ne, effacer les sch&eacute;mas de signalisation oncog&egrave;ne collaborations &eacute;mergent de fa&ccedil;on r&eacute;currente au niveau du r&eacute;seau. Enfin, les g&egrave;nes mutants dans le r&eacute;seau pourraient &ecirc;tre utilis&eacute;s &agrave; la d&eacute;couverte de nouveaux g&egrave;nes li&eacute;s au cancer et biomarqueurs.

Carte de signalisation du cancer chez l&#39;homme.

F&uuml;hrten wir eine umfassende Analyse der ein manuell kuratierte Signalling Netz, 1634-Knoten enth&auml;lt und 5089 Signalling rechtliche Beziehungen durch die Integration von Krebs-assoziierte genetisch und epigenetically ver&auml;ndert Gene. Wir finden, dass Krebs mutierte Gene werden in positive Signalling regulatorischen Schleifen, angereichert, w&auml;hrend die Krebs-assoziierte methylierte Gene in negative Signalling regulatorischen Schleifen angereichert sind. Wir zeichnen sich weiter ein Gesamtbild der Krebs-Signalisierung architektonische und funktionale Organisation. Aus dem Netz haben wir eine Landkarte Onkogen-Signalisierung, enth&auml;lt 326 Knoten, 892 Links und die Verflechtungen der mutierten und methylierte Gene entnommen. Die Karte kann in 12 topologische Regionen oder Onkogen-Signalisierung Bl&ouml;cke, einschlie&szlig;lich ein paar &#39;Onkogen-Signalisierung-abh&auml;ngigen Blocks&#39; in dem h&auml;ufig verwendete Onkogen-Signalisierung, dass Veranstaltungen bereichert werden zerlegt werden. Eine solcher Block, in dem die Gene h&ouml;chst mutierte und methylierte sind, wird in die meisten Tumoren und somit spielt eine zentrale Rolle im Krebs zu signalisieren. Funktionale Kooperationen zwischen beiden Onkogen-Signalisierung-abh&auml;ngigen Bl&ouml;cken auftreten in die meisten Tumoren, obwohl Brust- und Lungenkrebs Tumoren komplexere kollaborative Muster zwischen mehrere Bl&ouml;cke als andere Krebsarten aufweisen. Benchmarking der beiden Datens&auml;tze von systematischen Screening von Mutationen in Tumoren abgeleitet verst&auml;rkt unsere Erkenntnisse, die, obwohl die Mutationen enorm vielf&auml;ltig und komplexen Ebene gen sind Muster Onkogen-signalisieren klar, Kooperationen entstehen Mindestlaufzeit auf Netzwerkebene. Schlie&szlig;lich k&ouml;nnte die mutierten Gene im Netzwerk verwendet werden, um neuartige Krebs-assoziierten Gene und Biomarker zu entdecken.

Eine Karte des menschlichen Krebs zu signalisieren.

Abbiamo condotto un&#39;analisi completa di una rete di segnalazione umana manualmente a cura contenente i nodi 1634 e geni alterati di geneticamente ed epigeneticamente 5089 segnalazione rapporti normativi integrando associati al cancro. Troviamo che il cancro geni mutati sono arricchiti in loop regolamentare segnalazione positivo, considerando che i geni metilati associati al cancro sono arricchiti in loop regolamentare segnalazione negativa. Abbiamo caratterizzato ulteriormente un quadro complessivo dell&#39;organizzazione cancro-segnalazione architettonica e funzionale. Dalla rete, abbiamo estratto una mappa del oncogene di segnalazione, che contiene 326 nodi, 892 collegamenti e le interconnessioni dei geni mutati e metilati. La mappa pu&ograve; essere scomposto in 12 regioni topologici o del oncogene di segnalazione blocchi, tra cui alcuni &#39;oncogene-Segnalazione-dipendente blocchi&#39; in cui frequentemente utilizzati oncogene-segnalazione eventi sono arricchiti. Una tale blocco, in cui i geni sono mutati e altamente metilato, appare nella maggior parte dei tumori e quindi gioca un ruolo centrale nella segnalazione di cancro. Collaborazioni funzionale tra i due blocchi del oncogene-Segnalazione-dipendente si verificano nella maggior parte dei tumori, anche se i tumori al seno e del polmone presentano modelli pi&ugrave; complessi scenari di collaborazione tra pi&ugrave; isolati rispetto ad altri tipi di cancro. Analisi comparativa di due insiemi di dati derivati da uno screening sistematico delle mutazioni nei tumori ulteriormente rafforzato i nostri risultati che, anche se le mutazioni sono enormemente diverse e complesse a livello del gene, chiara schemi di segnalazione del oncogene collaborazioni ricorrentemente emergono a livello di rete. Infine, i geni mutati in rete potrebbero essere utilizzati per scoprire nuovi geni associati al cancro e biomarcatori.

Mappa di cancro umano di segnalazione.

1634 &#x30CE;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x624B;&#x52D5;&#x3067;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3001;&#x764C;&#x95A2;&#x9023;&#x7D71;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308B; 5089 &#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x898F;&#x5236;&#x95A2;&#x4FC2;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068; epigenetically &#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x304C;&#x3093;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x764C;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8CA0;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x898F;&#x5236;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;&#x8C4A;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x6B63;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x898F;&#x5236;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;&#x5909;&#x7570;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x304C;&#x3093;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x50CF;&#x7279;&#x5FB4;&#x3002;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x304B;&#x3089; 326 &#x30CE;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;892 &#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x304C;&#x3093;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;12 &#x306E;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x30AB;&#x30EB;&#x9818;&#x57DF;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4F1D;&#x9054;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x304C;&#x3093;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#39; &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x5206;&#x89E3;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x764C;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E73;&#x304C;&#x3093;&#x3001;&#x80BA;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5354;&#x8ABF;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x4ED6;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x5C55;&#x793A;&#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30E9;&#x30DC;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x3093;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x9593;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x9014;&#x65B9;&#x3082;&#x306A;&#x304F;&#x591A;&#x69D8;&#x3067;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x304C;&#x3093;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x30AA;&#x30D5;&#x306B;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x88DC;&#x5F37;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x7DB2;&#x7F85;&#x7684;&#x63A2;&#x7D22;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C1;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF; &#x30B3;&#x30E9;&#x30DC;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; emerge &#x53CD;&#x5FA9;&#x7684;&#x3001;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF; &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x764C;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA; &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x3072;&#x3068;&#x764C;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5730;&#x56F3;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; 1634 &#xB178;&#xB4DC;&#xAC00; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC218;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xD050;&#xB808;&#xC774;&#xD130; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC554; &#xAD00;&#xB828; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; 5089 &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC815; &#xAD00;&#xACC4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC0F; epigenetically &#xBCC0;&#xACBD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xADF8; &#xC554; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC554; &#xAD00;&#xB828; methylated &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC815; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xD48D;&#xC131; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC815; &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xB18D;&#xCD95; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xC554; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC74;&#xCD95; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xADF8;&#xB9BC; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; 326 &#xB178;&#xB4DC;, 892 &#xB9C1;&#xD06C; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; methylated &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; oncogene &#xC2E0;&#xD638; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xAC00;&#xC838;&#xC628;. &#xC9C0;&#xB3C4; 12 &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0; &#xC601;&#xC5ED; &#xB610;&#xB294; oncogene &#xC2E0;&#xD638; &#xBE14;&#xB85D;, &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#39;oncogene &#xC2E0;&#xD638; &#xC885;&#xC18D; &#xBE14;&#xB85D; &#xD3EC;&#xD568; &#39;&#xB97C; &#xC790;&#xC8FC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; oncogene &#xC2E0;&#xD638; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xD48D;&#xC131; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xD574; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xB098; &#xB192;&#xACE0; methylated, &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xADF8;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBE14;&#xB85D; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC554; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xC720; &#xBC29; &#xBC0F; &#xD3D0; &#xC885;&#xC591; &#xC804;&#xC2DC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC554; &#xC885;&#xB958; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBE14;&#xB85D; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD611;&#xC5C5; &#xD328;&#xD134; &#xB450; oncogene &#xC2E0;&#xD638; &#xC885;&#xC18D; &#xBE14;&#xB85D; &#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD611;&#xB825; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xC2EC;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xBCA4;&#xCE58;&#xB9C8;&#xD0B9; &#xB354;&#xC6B1; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300;&#xB2E8;&#xD788; &#xB2E4;&#xC591; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCDE8;&#xC18C; oncogene &#xC2E0;&#xD638; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD611;&#xB825;: recurrently &#xB4F1;&#xC7A5; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xC218;&#xC900;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC18C;&#xC124; &#xC554; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC554; &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Realizamos un an&aacute;lisis exhaustivo de una red de se&ntilde;alizaci&oacute;n humano manualmente comisariado que contiene nodos de 1634 y 5089 relaciones reglamentarias se&ntilde;alizaci&oacute;n integrando asociada al c&aacute;ncer gen&eacute;tico y epigen&eacute;ticamente alteraci&oacute;n genes. Encontramos que el c&aacute;ncer genes mutados se enriquecen en lazos de regulaci&oacute;n se&ntilde;alizaci&oacute;n positivas, mientras que los genes metilados asociada al c&aacute;ncer se enriquecen en bucles de regulaci&oacute;n se&ntilde;alizaci&oacute;n negativos. Nos caracteriza una visi&oacute;n global de la organizaci&oacute;n c&aacute;ncer-se&ntilde;alizaci&oacute;n arquitect&oacute;nica y funcional. De la red, se extrajeron un mapa se&ntilde;alizaci&oacute;n oncogene, que contiene 326 nodos, 892 enlaces y las interconexiones de los genes mutados y metilados. El mapa se puede descomponer en 12 regiones topol&oacute;gicas o bloques de oncog&eacute;n-se&ntilde;alizaci&oacute;n, incluyendo a &#39;oncogene-se&ntilde;alizaci&oacute;n-dependiente cuadras&#39; en el que utiliza con frecuencia oncog&eacute;n-se&ntilde;alizaci&oacute;n eventos se enriquecen. Una tal bloque, en el que los genes son altamente mutados y metilado, aparece en la mayor&iacute;a de los tumores y as&iacute; juega un papel central en la se&ntilde;alizaci&oacute;n de c&aacute;ncer. Colaboraciones funcionales entre dos bloques de oncog&eacute;n-se&ntilde;alizaci&oacute;n-dependiente se producen en la mayor&iacute;a de los tumores, aunque los tumores de mama y pulm&oacute;n exhiben patrones m&aacute;s complejos colaborativos entre varios bloques que otros tipos de c&aacute;ncer. Dos conjuntos de datos derivados de cribado sistem&aacute;tico de mutaciones en tumores de benchmarking refuerza nuestros resultados que, aunque las mutaciones son tremendamente diversas y complejas a nivel gene, claro patrones de se&ntilde;alizaci&oacute;n oncog&eacute;n colaboraciones recurrentemente surgen en el nivel de red. Finalmente, los genes mutados en la red podr&iacute;an utilizarse para descubrir nuevos genes asociada al c&aacute;ncer y biomarcadores.

Mapa de se&ntilde;alizaci&oacute;n de c&aacute;ncer en humanos.

&#x5B83;&#x8868;&#x660E; A549 &#x975E;&#x5C0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BA;&#x764C; &#xFF08;&#x975E;&#x5C0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BA;&#x764C;) &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; (EGFR) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5F02;&#x79CD;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x5E38;&#x89C4;&#x4F53;&#x5916;&#x5355;&#x5C42;&#x751F;&#x957F;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6297;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7887;&#x6CCA;&#x5904;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x589E;&#x957F;/&#x751F;&#x5B58;&#x5316;&#x9A8C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x52A8;&#x529B;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x548C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x66F4;&#x7075;&#x654F;&#x6BD4;&#x5355;&#x5C42;&#x751F;&#x957F;&#x5316;&#x9A8C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E24;&#x79CD;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3001; &#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242; AG1478 &#x4E0E;&#x914D;&#x4F53;&#x963B;&#x65AD;&#x6297;&#x4F53; 225 &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#xFF0C;&#x5BF9; A549 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;AG1478 &#x662F;&#x6BD4; 225 &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x5728;&#x6291;&#x5236;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7887;&#x6CCA;&#x5904;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#x539F;&#x56E0;&#x662F;&#x5176;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x800C; 225 &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x548C; AG1478 &#x90FD;&#x80FD;&#x591F;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B58;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x786E;&#x5B9A;&#x54EA;&#x4E9B;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5143;&#x4EF6;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x6700;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x5E76;&#x884C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; EGFR &#x672C;&#x8EAB;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E0B;&#x6E38;&#x901A;&#x8DEF;&#x5143;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; 225 &#x4EBA;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x5708;&#x7684;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x6291;&#x5236; MAPK&#x3001; &#x808C;&#x9187;&#x548C; STAT3 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E0E;&#x5B83;&#x4E0D;&#x80FD;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7887;&#x6CCA;&#x5904;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3001; &#x76F8;&#x5173;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0E;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x6291;&#x5236;&#x52A8;&#x529B;&#x5E76;&#x4E0D;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728; A549 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7887;&#x6CCA;&#x5904;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x751F;&#x5B58;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x52A8;&#x529B;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x975E;&#x5C0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BA;&#x764C;&#x80BF;&#x7624;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

&#x5FAE;&#x5206;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6; A549 &#x975E;&#x5C0F;&#x80BA;&#x764C;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x901A;&#x8DEF;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

It has been demonstrated that A549 non-small cell lung cancer (NSCLC) cells are sensitive to epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors in in vivo xenograft animal models, but are relatively resistant in conventional in vitro monolayer growth assays. Here, we utilized anchorage-independent cell growth/survival assays as well as motility assays and demonstrated that these tests detect the effects of two EGFR inhibitors, the small molecule inhibitor AG1478 and the ligand-blocking antibody 225 mAb, on A549 cells more sensitively than monolayer growth assays. AG1478 was more effective than 225 mAb at inhibiting EGF-stimulated anchorage-independent cell growth, in part due to its pronounced ability to inhibit cell survival, whereas 225 mAb and AG1478 were both able to inhibit cell motility. In order to determine which EGFR signalling pathway components were most strongly associated with these cell responses, we analyzed in parallel the phosphorylation levels of EGFR itself as well as several downstream pathway elements. We found that the limited ability of 225 mAb to inhibit MAPK, PI3K and STAT3 phosphorylation correlated with its inability to promote anchorage independent apoptosis, but did not correlate with its ability to inhibit motility. Based on our results in A549 cells, we propose that EGF stimulates tumour progression of NSCLC largely through effects on anchorage-independent growth and survival, as well as motility.

Differential sensitivity of A549 non-small lung carcinoma cell responses to epidermal growth factor receptor pathway inhibitors.

Il a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; que les cellules A549 non &agrave; petites cellules du poumon cancer (NSCLC) sont sensibles aux inhibiteurs d&#39;epidermal growth factor receptor (EGFR) dans des mod&egrave;les animaux in vivo de x&eacute;nogreffes, mais sont relativement r&eacute;sistants lors d&#39;essais de croissance monocouche in vitro conventionnelle. Ici, nous avons eu recours &agrave; des essais de croissance et de survie des cellules d&#39;anchorage ind&eacute;pendant ainsi que des essais de motilit&eacute; et a d&eacute;montr&eacute; que ces tests d&eacute;tectent les effets de deux inhibiteurs d&#39;EGFR, inhibiteur de la petite mol&eacute;cule AG1478 et le ligand-blocage anticorps 225 mAb, sur cellules A549 plus sensiblement que tests de croissance monocouche. AG1478 a &eacute;t&eacute; plus efficace que le mAb 225 &agrave; inhiber la croissance des cellules d&#39;ancrage ind&eacute;pendant stimul&eacute;e par l&#39;EGF, en partie en raison de sa capacit&eacute; marqu&eacute;e d&#39;inhiber la survie des cellules, tandis que 225 mAb et AG1478 &eacute;taient tous les deux capables d&#39;inhiber la motilit&eacute; cellulaire. Afin de d&eacute;terminer quel EGFR signalisation des composants de la voie &eacute;taient plus fortement associ&eacute;s &agrave; ces r&eacute;ponses cellulaires, nous avons analys&eacute; en parall&egrave;le, les niveaux de la phosphorylation de l&#39;EGFR, elle-m&ecirc;me ainsi que plusieurs &eacute;l&eacute;ments de voie en aval. Nous avons constat&eacute; que la capacit&eacute; limit&eacute;e du mAb 225 pour inhiber la phosphorylation MAPK, PI3K et STAT3 en corr&eacute;lation avec son incapacit&eacute; &agrave; promouvoir anchorage apoptose ind&eacute;pendante, mais qu&#39;il n&#39;est pas corr&eacute;l&eacute; avec sa capacit&eacute; d&#39;inhiber la motilit&eacute;. Selon nos r&eacute;sultats dans les cellules A549, nous proposons que EGF l&#39;stimule la progression tumorale des CBNPC en grande partie par les effets sur la croissance ind&eacute;pendante d&#39;ancrage et de survie, ainsi que la motilit&eacute;.

Sensibilit&eacute; diff&eacute;rentielle de A549 les r&eacute;actions de cellules de carcinome du poumon non &agrave; petites aux inhibiteurs de la voie epidermal growth factor receptor.

Es ist nachgewiesen, dass A549 nicht-kleinzelligem Lungenkrebs (NSCLC) Krebszellen empfindlich auf den humanen epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR)-Inhibitoren in Tiermodellen in vivo Xenograft-reagieren, aber sind relativ best&auml;ndig bei konventionellen in-vitro-Monolayer-Wachstum-Assays. Hier genutzte wir Ankerplatz-unabh&auml;ngige Zelle Wachstum/&Uuml;berlebens-Assays sowie Motilit&auml;t-Proben und gezeigt, dass diese Tests die Auswirkungen der beiden EGFR-Inhibitoren, die niedermolekularer Inhibitor AG1478 und der Ligand blockierende Antik&ouml;rper 225 mAb, auf A549 Zellen empfindlicher als Monolage Wachstum Proben erkennen. AG1478 war wirksamer als 225 mAb bei EGF-stimuliert Ankerplatz-unabh&auml;ngige Zelle Wachstum, teilweise wegen seiner ausgepr&auml;gten F&auml;higkeit Zelle &uuml;berleben, zu hemmen, w&auml;hrend 225 mAb und AG1478 beide in der Lage waren, die Zelle Motilit&auml;t zu hemmen. Um festzustellen, welche EGFR Signalisierung Weg Komponenten am st&auml;rksten von dieser Zelle Antworten zugeordnet waren, analysierten wir parallel die Phosphorylierung-Ebenen der EGFR selbst sowie mehrere nachgeschaltete Weg-Elemente. Wir fanden, dass die begrenzte F&auml;higkeit der 225 mAb, MAPK, PI3K und STAT3 Phosphorylierung hemmen mit ihrer Unf&auml;higkeit zur F&ouml;rderung der Ankerplatz unabh&auml;ngige Apoptosis korreliert, aber nicht mit seiner F&auml;higkeit, Motilit&auml;t hemmen korrelieren. Auf der Grundlage unserer Ergebnisse in A549 Zellen, schlagen wir vor, EGF Tumorprogression des NSCLC weitgehend durch Effekte am Ankerplatz-unabh&auml;ngigen Wachstum und &uuml;berleben, als auch Motilit&auml;t stimuliert.

Differenzielle Empfindlichkeit von A549 non-Small-Lunge Karzinom Zelle Antworten auf epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor-Weg-Inhibitoren.

&Egrave; stato dimostrato che le cellule di cancer (NSCLC) di A549 non a piccole cellule polmonari sono sensibili agli inibitori di epidermal growth factor receptor (EGFR) in modelli animali in vivo xenoinnesto, ma sono relativamente resistenti in monostrato in vitro convenzionale crescita dosaggi. Qui, abbiamo utilizzato i dosaggi di crescita/sopravvivenza ancoraggio-indipendente dalla cellula come pure analisi di motilit&agrave; e ha dimostrato che questi test rilevare gli effetti di due inibitori EGFR, l&#39;inibitore di piccola molecola AG1478 e il ligando di blocco anticorpo 225 mAb, sulle cellule A549 pi&ugrave; sensibile rispetto a dosaggi di crescita dello strato monomolecolare. AG1478 &egrave; stato pi&ugrave; efficace di 225 mAb inibisce la crescita di cellule di ancoraggio-indipendente EGF-stimolata, in parte dovuto alla sua capacit&agrave; pronunciato per inibire la sopravvivenza delle cellule, mentre 225 mAb e AG1478 erano entrambi in grado di inibire la motilit&agrave; cellulare. Al fine di determinare quali EGFR segnalazione percorso componenti erano pi&ugrave; fortemente associati con queste risposte cellulari, abbiamo analizzato in parallelo i livelli di fosforilazione dell&#39;EGFR stesso cos&igrave; come i diversi elementi del percorso a valle. Abbiamo trovato che la limitata capacit&agrave; di 225 mAb di inibire la fosforilazione di MAPK e PI3K STAT3 correlato con la sua incapacit&agrave; di promuovere ancoraggio indipendente apoptosi, ma non ha fatto mettere in correlazione con la sua capacit&agrave; di inibire la motilit&agrave;. Basato sui nostri risultati nelle cellule A549, proponiamo che EGF stimola la progressione tumorale del NSCLC in gran parte attraverso gli effetti sulla crescita ancoraggio-indipendente e sopravvivenza, cos&igrave; come motilit&agrave;.

Sensibilit&agrave; differenziale di A549 del polmone non a piccole carcinoma cell responses to inibitori di epidermal growth factor receptor pathway.

&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;A549 &#x975E;&#x5C0F;&#x7D30;&#x80DE;&#x80BA;&#x764C; (NSCLC) &#x7D30;&#x80DE;&#x306F; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (EGFR) &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5F93;&#x6765; in vitro &#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x62B5;&#x6297;&#x529B;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3088;&#x304F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x691C;&#x51FA; 2 &#x3064;&#x306E; EGFR &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x85AC; AG1478 &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x6297;&#x4F53; 225 &#x30DE;&#x30D6;&#x304C; A549 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x6210;&#x9577;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3088;&#x308A;&#x654F;&#x611F;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7D30;&#x80DE;&#x6210;&#x9577;/&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AG1478 &#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x3001;&#x767A;&#x97F3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067; 225 &#x306E; mAb &#x3068; AG1478 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3044;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E; EGF &#x523A;&#x6FC0;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3067; 225 mAb &#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3068;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x304F;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x305F;&#x306F; EGFR &#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x4E26;&#x884C; EGFR &#x81EA;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30D1;&#x30B9;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A4;&#x8981;&#x7D20;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;MAPK&#x3001;PI3K &#x304A;&#x3088;&#x3073; STAT3 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x80FD;&#x529B; 225 mAb &#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x72EC;&#x7ACB;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x7121;&#x529B;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3068;&#x306F;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;A549 &#x7D30;&#x80DE;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;EGF &#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x751F;&#x5B58;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x5C0F;&#x7D30;&#x80DE;&#x80BA;&#x764C;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

&#x5DEE;&#x52D5;&#x611F;&#x5EA6; A549 &#x80BA;&#x975E;&#x5C0F;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3002;

&#xADF8;&#xAC83;&#xC740; A549 &#xBE44; &#xC791;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xD3D0;&#xC554; (NSCLC) &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xB1CC;&#xC885;&#xC591; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (EGFR) &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC15;&#xD55C; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xB2E8;&#xCE35; &#xC131;&#xC7A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; A549 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB450; EGFR &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; AG1478 ligand &#xCC28;&#xB2E8; &#xD56D; &#xCCB4; 225 Mab&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB2E8;&#xCE35; &#xC131;&#xC7A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD558;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xC575;&#xCEE4;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC140; &#xC131;&#xC7A5;/&#xC0DD;&#xC874; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9;. AG1478 225 mAb &#xBC0F; AG1478 &#xBAA8;&#xB450; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xBC1C;&#xC74C;&#xB41C; &#xB2A5;&#xB825; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; EGF &#xC790;&#xADF9; &#xC575;&#xCEE4;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; 225 mAb &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACBD;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; EGFR&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xBCD1;&#xB82C;&#xB85C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xACBD;&#xB85C; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; &#xC11C; EGFR &#xC790;&#xCCB4; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;. &#xC6B0;&#xB9AC; MAPK, PI3K &#xBC0F; STAT3 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; 225 Mab&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xB2A5;&#xB825; &#xC575;&#xCEE4;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; apoptosis&#xB97C; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD558;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xAD00; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. A549 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; EGF &#xC790;&#xADF9; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC575;&#xCEE4;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; NSCLC&#xC758; &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xD589; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; A549 &#xC544;&#xB2CC; &#xC791;&#xC740; &#xD3D0; &#xC554; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xAC10;&#xB3C4;.

Se ha demostrado que c&eacute;lulas de c&aacute;ncer (NSCLC) de pulm&oacute;n de c&eacute;lulas no-peque&ntilde;as A549 son sensibles a los inhibidores de factor de crecimiento epid&eacute;rmico del receptor (EGFR) en modelos animales de xenoinjerto in vivo, pero son relativamente resistentes en ensayos de crecimiento monocapa in vitro convencional. Aqu&iacute;, utilizamos estudios de crecimiento/supervivencia de c&eacute;lulas de anclaje independiente as&iacute; como ensayos de motilidad y demostraron que estas pruebas detectan los efectos de dos inhibidores EGFR, el inhibidor de mol&eacute;cula peque&ntilde;a AG1478 y el bloqueo de ligando anticuerpo 225 mAb, en las c&eacute;lulas A549 m&aacute;s sensible que el an&aacute;lisis del crecimiento de monocapa. AG1478 fue m&aacute;s efectiva que 225 mAb en inhibir el crecimiento de la c&eacute;lula de anclaje independiente EGF-estimulados, en parte debido a su pronunciada capacidad para inhibir la supervivencia de la c&eacute;lula, mientras que 225 mAb y AG1478 fueron capaces de inhibir la motilidad celular. Para determinar qu&eacute; EGFR se&ntilde;alizaci&oacute;n v&iacute;a componentes eran m&aacute;s fuertemente asociados con estas respuestas celulares, hemos analizado en paralelo los niveles de la fosforilaci&oacute;n de EGFR s&iacute; mismo as&iacute; como varios elementos de la v&iacute;a descendente. Se encontr&oacute; que la limitada capacidad de 225 mAb para inhibir la fosforilaci&oacute;n de MAPK, PI3K y STAT3 correlacionado con su incapacidad para promover la apoptosis independiente de anclaje, pero no se correlacion&oacute; con su capacidad de inhibir la motilidad. En base a nuestros resultados en c&eacute;lulas A549, proponemos que el EGF estimula la progresi&oacute;n del tumor del CPCNP en gran parte a trav&eacute;s de efectos sobre el crecimiento de anclaje independiente y supervivencia, as&iacute; como la movilidad.

Sensibilidad diferencial de respuestas de c&eacute;lulas A549 pulm&oacute;n no-peque&ntilde;o carcinoma a inhibidores de la v&iacute;a de factor de crecimiento epid&eacute;rmico del receptor.

Gadd45 las prote&iacute;nas son reconocidas como tumor y supresores autoinmunes cuya expresi&oacute;n puede ser inducida por estr&eacute;s genot&oacute;xico. Estas prote&iacute;nas participan en la detenci&oacute;n de crecimiento, control del ciclo celular y apoptosis a trav&eacute;s de interacciones con una amplia variedad de socios de la Uni&oacute;n. Aqu&iacute; divulgamos la estructura cristalina de Gadd45gamma, que revela un pliegue que comprende un s&aacute;ndwich de alphabetaalpha con una hebra cinco mixto beta-hoja central con alfa-h&eacute;lices embalados a ambos lados. Basada en la simetr&iacute;a cristalogr&aacute;fica identificamos la interfaz de d&iacute;mero de d&iacute;meros de Gadd45gamma mediante la generaci&oacute;n de mutantes de punto que compromete la dimerizaci&oacute;n y dejar intacta la estructura terciaria del mon&oacute;mero. La interfaz de d&iacute;mero comprende un paquete de cuatro-h&eacute;lice con restos que se conservan los m&aacute;s altamente entre Gadd45 isoformas. Ensayos celulares utilizando estos mutantes punto demuestran eso dimerizaci&oacute;n es esencial para la inhibici&oacute;n del crecimiento. Esta informaci&oacute;n estructural proporciona un nuevo contexto para la evaluaci&oacute;n de la pl&eacute;tora de las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na que rigen las diversas funciones de la familia de Gadd45 de prote&iacute;nas.

El cristal estructura y dimerizaci&oacute;n interfaz de GADD45gamma.

Gadd45 &#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x80BF;&#x7624;&#x548C;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x6BD2;&#x6027;&#x5F3A;&#x8C03;&#x53EF;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5176;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8C03;&#x63A7;&#x3001; &#x589E;&#x957F;&#x902E;&#x6355;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4F19;&#x4F34;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A; Gadd45gamma&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E2D;&#x592E;&#x4E94;&#x7EDE;&#x6DF7;&#x5408; &beta;-&#x5F20; alphabetaalpha &#x4E09;&#x660E;&#x6CBB;&#x4E0E;&#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;&#x87BA;&#x65CB;&#x88C5;&#x5728;&#x4E24;&#x4FA7;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x5BF9;&#x79F0;&#x786E;&#x5B9A; Gadd45gamma &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x63A5;&#x53E3;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x6210;&#x7834;&#x574F;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x4E09;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#x4E8C;&#x805A;&#x7684;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x63A5;&#x53E3;&#x5305;&#x62EC;&#x6D89;&#x53CA;&#x6700;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x4E4B;&#x95F4; Gadd45 &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x56DB;&#x87BA;&#x65CB;&#x675F;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x68C0;&#x5B9A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F4D;&#x70B9;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x4E8C;&#x805A;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6B64;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x6846;&#x67B6;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684;&#x540D;&#x76EE;&#x7E41;&#x591A;&#x7684;&#x7BA1;&#x6CBB;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; Gadd45 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;

GADD45gamma &#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x4E8C;&#x805A;&#x754C;&#x9762;&#x3002;

Gadd45 proteins are recognized as tumor and autoimmune suppressors whose expression can be induced by genotoxic stresses. These proteins are involved in cell cycle control, growth arrest, and apoptosis through interactions with a wide variety of binding partners. We report here the crystal structure of Gadd45gamma, which reveals a fold comprising an alphabetaalpha sandwich with a central five-stranded mixed beta-sheet with alpha-helices packed on either side. Based on crystallographic symmetry we identified the dimer interface of Gadd45gamma dimers by generating point mutants that compromised dimerization while leaving the tertiary structure of the monomer intact. The dimer interface comprises a four-helix bundle involving residues that are the most highly conserved among Gadd45 isoforms. Cell-based assays using these point mutants demonstrate that dimerization is essential for growth inhibition. This structural information provides a new context for evaluation of the plethora of protein-protein interactions that govern the many functions of the Gadd45 family of proteins.

The crystal structure and dimerization interface of GADD45gamma.

Gadd45 prot&eacute;ines sont reconnues comme la tumeur et suppresseurs auto-immune dont l&#39;expression peut &ecirc;tre induite par le stress g&eacute;notoxique. Ces prot&eacute;ines sont impliqu&eacute;es dans le contr&ocirc;le du cycle cellulaire, arr&ecirc;t de la croissance et l&#39;apoptose par des interactions avec une grande vari&eacute;t&eacute; de partenaires de liaison. Nous rapportons ici la structure cristalline du Gadd45gamma, qui r&eacute;v&egrave;le un pli comprenant un &quot;sandwich&quot; d&#39;alphabetaalpha avec une centrale mixte cinq brin b&ecirc;ta-feuille avec h&eacute;lices alpha-emball&eacute;s de chaque c&ocirc;t&eacute;. Bas&eacute;e sur une sym&eacute;trie cristallographique, nous avons identifi&eacute; l&#39;interface dim&egrave;re de dim&egrave;res Gadd45gamma en g&eacute;n&eacute;rant des mutants point compromise dim&eacute;risation tout en conservant la structure tertiaire du monom&egrave;re intactes. L&#39;interface de dim&egrave;re comprend un ensemble de quatre h&eacute;lices impliquant les r&eacute;sidus qui sont les plus hautement conserv&eacute;es chez les isoformes de Gadd45. Analyses cellulaires &agrave; l&#39;aide de ces mutants point d&eacute;montrent que la dim&eacute;risation est essentielle pour l&#39;inhibition de la croissance. Cette information structurale fournit un nouveau contexte pour l&#39;&eacute;valuation de la pl&eacute;thore des interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine qui r&eacute;gissent les nombreuses fonctions de la famille de Gadd45 des prot&eacute;ines.

Le crystal structure dim&eacute;risation interface et de GADD45gamma.

Gadd45 Proteine werden erkannt, als Tumor und autoimmune Unterdr&uuml;cker, deren Ausdruck von gentoxischen Spannungen induziert werden kann. Diese Proteine sind in Zellzyklus-Kontrolle, Wachstumanhalten und Apoptose durch Interaktionen mit einer Vielzahl von verbindlichen Partner beteiligt. Wir berichten hier die Kristallstruktur von Gadd45gamma, die eine Falte, bestehend aus einer Alphabetaalpha-Sandwich mit einem zentralen f&uuml;nf-angeschwemmte gemischte Beta-Blatt mit Alpha-Helices verpackt auf beiden Seiten enth&uuml;llt. Basierend auf kristallographische Symmetrie identifiziert wir die Dimer-Schnittstelle des Gadd45gamma Dimer durch Generieren von Punkt-Mutanten, die Dimerisierung w&auml;hrend intakt die Terti&auml;rstruktur des Monomers gef&auml;hrdet. Die Dimer-Schnittstelle umfasst ein vier-Helix-B&uuml;ndel, die R&uuml;ckst&auml;nde, die den meisten stark unter Gadd45 Isoformen konserviert werden. Zellbasierte Assays mit diesen Punkt Mutanten zu demonstrieren, dass Dimerisierung ist essentiell f&uuml;r Wachstum Hemmung. Diese strukturelle Informationen bietet einen neuen Kontext f&uuml;r die Bewertung von der F&uuml;lle von Protein-Protein-Interaktionen, die zahlreichen Funktionen der Gadd45-Familie der Proteine zu Regeln.

Die Kristall-Struktur und Dimerisierung Schnittstelle GADD45gamma.

Gadd45 proteine sono riconosciute come tumore e soppressori autoimmuni cui espressione pu&ograve; essere indotta da stress genotossici. Queste proteine sono coinvolte nel controllo del ciclo cellulare, arresto della crescita e apoptosi attraverso interazioni con un&#39;ampia gamma di partner di associazione. Riportiamo qui la struttura di cristallo del Gadd45gamma, che rivela una piega composto da un sandwich di alphabetaalpha con un centrale cinque filamenti misto beta-foglio con alfa-eliche imballati su entrambi i lati. Basato sulla simmetria cristallografica abbiamo identificato l&#39;interfaccia del dimero di Gadd45gamma dimeri generando punto mutanti che compromessa dimerizzazione, lasciando intatta la struttura terziaria del monomero. L&#39;interfaccia del dimero comprende un four-helix bundle che coinvolgono i residui che sono il pi&ugrave; altamente conservati tra isoforme di Gadd45. Cell-based assays usando questi mutanti punto di dimostrano che la dimerizzazione &egrave; essenziale per l&#39;inibizione della crescita. Questa informazione strutturale fornisce un nuovo contesto per la valutazione della pletora di interazioni proteina-proteina che regolano molte funzioni della famiglia Gadd45 di proteine.

Il cristallo struttura dimerizzazione interfaccia e di GADD45gamma.

Gadd45 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5F0F;&#x907A;&#x4F1D;&#x6BD2;&#x6027;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x816B;&#x760D;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x5236;&#x5FA1;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;&#x505C;&#x6B62;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; alphabetaalpha &#x30B5;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x4E2D;&#x592E; 5 &#x9396;&#x6DF7;&#x5408; &beta; - &#x30B7;&#x30FC;&#x30C8; &alpha; &#x3078;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x5074;&#x306B;&#x6E80;&#x54E1;&#x3068;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x308B;&#x6298;&#x308A;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B; Gadd45gamma &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x6211;&#x3005; &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9; Gadd45gamma &#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x6B8B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x59A5;&#x5354;&#x70B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F; Gadd45 &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x9593;&#x3067;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6027;&#x304C;&#x6700;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x542B;&#x3080; 4 &#x672C;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x70B9;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6210;&#x9577;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x305D;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x304C;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Gadd45 &#x65CF;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x8304;&#x591A;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

GADD45gamma &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x3002;

Gadd45 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xC2DD; &#xCC28;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC885;&#xC591;&#xACFC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC9C4;&#xC555;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC2DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC81C;&#xC5B4;, &#xC131;&#xC7A5; &#xAC80;&#xAC70;&#xC640; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; apoptosis&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC911;&#xC559; 5 &#xAC00;&#xB2E5; &#xD63C;&#xD569; &#xB41C; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC2DC;&#xD2B8;&#xC640; alphabetaalpha &#xC0CC;&#xB4DC;&#xC704;&#xCE58; &#xC54C;&#xD30C; &#xD3EC;&#xD568; &#xC591;&#xCABD;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC7A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xBC30;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; gadd45gamma&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;. Dimerization&#xB294; &#xBAA8;&#xB178; &#xBA38;&#xC758; 3 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xD0C0;&#xD611; &#xD558;&#xB294; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; Gadd45gamma &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; dimer &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; crystallographic &#xB300;&#xCE6D;. Dimer &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; Gadd45 isoforms &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xAC00;&#xC7A5; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; 4 &#xB098;&#xC120; &#xBC88;&#xB4E4;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8; dimerization &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAD6C;&#xC870; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; Gadd45 &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xACFC;&#xB2E4; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Gadd45gamma&#xC758; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD138; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; dimerization &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x6297;&#x4F53;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5F88;&#x5927;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x56E0;&#x7D20;&#x59A8;&#x788D;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6210;&#x4E3A;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x7597;&#x6CD5;&#x3002;&#x53EF;&#x53D8;&#x533A;&#x7684;&#x91CD;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53; (HCAbs) &#x6216;&#x5355;&#x57DF;&#x6297;&#x4F53; &#xFF08;sdAbs&#xFF09;&#xFF0C;&#x662F;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x6784;&#x5EFA;&#x57FA;&#x5757;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x5206;&#x5B50;&#x5927;&#x5C0F;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x5BFB;&#x627E;&#x66F4;&#x597D;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x683C;&#x5F0F;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x548C; (&#x6216;) &#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x764C;&#x75C7;&#xFF0C;&#x4E09;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E; sdAb &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9488;&#x5BF9;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; (EGFR) &#x88AB;&#x6784;&#x9020;&#x3001; &#x7279;&#x70B9;&#x548C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;&#x5341;&#x4E00; sdAbs sdAb &#x6C47;&#x8F91; &#x300B; &#x9A7C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x63A5;&#x79CD;&#x75AB;&#x82D7;&#x4ECE;&#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x5C55;&#x793A;&#x5E93;&#x4ECE;&#x88AB;&#x9694;&#x79BB;&#x3002;Pentameric sdAb &#x6216; pentabody&#xFF0C;V2C EG2 &#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x878D;&#x5408;&#x7684; sdAbs EG2&#xFF0C;&#x5230; pentamerization &#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;EG2-hFc &#x5D4C;&#x5408; HCAb &#xFF08;cHCAb&#xFF09;&#xFF0C;&#x662F;&#x7531;&#x878D;&#x5408;&#x5230;&#x7ED3;&#x6676; (Fc) &#x7684;&#x7247;&#x6BB5;&#x4EBA; IgG1 &#x7684; EG2 &#x5174;&#x5EFA;&#x7684;&#x3002;&#x5374; EG2 &#x548C; V2C EG2 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x5728;&#x80BE;&#x810F;&#xFF0C;&#x9759;&#x8109;&#x6CE8;&#x5C04;&#x540E;&#xFF0C;EG2 hFc &#x5C55;&#x51FA;&#x4F18;&#x79C0;&#x80BF;&#x7624;&#x79EF;&#x7D2F;&#xFF0C;&#x800C;&#x8FD9;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x957F;&#x8840;&#x6E05;&#x751F;&#x547D;&#x7684;&#x4E00;&#x534A;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E; IgGs&#x3002;&#x4E2D;&#x7B49;&#x5927;&#x5C0F; &#xFF08;&#x5927;&#x7EA6; 80 kDa) &#x548C;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; Fc &#x4F7F; HCAbs &#x72EC;&#x7279;&#x6297;&#x4F53;&#x683C;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F18;&#x4E8E;&#x6574;&#x4E2A; IgGs &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5F71;&#x50CF;&#x4E0E;&#x6CBB;&#x7597;&#x836F;&#x5242;&#x3002;

&#x9274;&#x522B;&#x80BF;&#x7624;&#x8840;&#x7BA1;&#x5BFC;&#x5411;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x5355;&#x57DF;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x683C;&#x5F0F;&#x3002;

The large molecular size of antibody drugs is considered one major factor preventing them from becoming more efficient therapeutics. Variable regions of heavy chain antibodies (HCAbs), or single-domain antibodies (sdAbs), are ideal building blocks for smaller antibodies due to their molecular size and enhanced stability. In the search for better antibody formats for in vivo imaging and/or therapy of cancer, three types of sdAb-based molecules directed against epidermal growth factor receptor (EGFR) were constructed, characterized and tested. Eleven sdAbs were isolated from a phage display library constructed from the sdAb repertoire of a llama immunized with a variant of EGFR. A pentameric sdAb, or pentabody, V2C-EG2 was constructed by fusing one of the sdAbs, EG2, to a pentamerization protein domain. A chimeric HCAb (cHCAb), EG2-hFc, was constructed by fusing EG2 to the fragment crystallizable (Fc) of human IgG1. Whereas EG2 and V2C-EG2 localized mainly in the kidneys after i.v. injection, EG2-hFc exhibited excellent tumor accumulation, and this was largely attributed to its long serum half life, which is comparable to that of IgGs. The moderate size (approximately 80 kDa) and intact human Fc make HCAbs a unique antibody format which may outperform whole IgGs as imaging and therapeutic reagents.

Differential tumor-targeting abilities of three single-domain antibody formats.

La grande taille mol&eacute;culaire des drogues de l&#39;anticorps est consid&eacute;r&eacute; comme un des principaux facteurs qui les emp&ecirc;che de devenir th&eacute;rapeutique plus efficace. Les r&eacute;gions variables des cha&icirc;nes lourdes des anticorps (HCAbs), ou anticorps &agrave; domaine unique (anticorps), sont les blocs de construction id&eacute;ales pour petits anticorps en raison de leur poids mol&eacute;culaire et une meilleure stabilit&eacute;. Dans la recherche pour mieux formats d&#39;anticorps pour l&#39;imagerie in vivo et/ou de la th&eacute;rapie du cancer, trois types de mol&eacute;cules ax&eacute;e sur les anticorps dirig&eacute;s contre le r&eacute;cepteur du facteur de croissance &eacute;pidermique (EGFR) ont &eacute;t&eacute; construits, caract&eacute;ris&eacute;s et &eacute;prouv&eacute;s. Onze anticorps ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s d&#39;un phage display construit &agrave; partir du r&eacute;pertoire d&#39;anticorps d&#39;un Lama immunis&eacute; avec une variante de l&#39;EGFR. Un anticorps pentam&eacute;rique, ou pentabody, V2C-EG2 a &eacute;t&eacute; construit par la fusion de l&#39;un de l&#39;anticorps, EG2, &agrave; un domaine de prot&eacute;ine pentamerization. Une chim&egrave;re HCAb (cHCAb), EG2-hFc, a &eacute;t&eacute; construit en fusionnant EG2 au fragment cristallisable (Fc) des IgG1 humaine. Consid&eacute;rant que EG2 et V2C-EG2 localis&eacute;e principalement dans les reins apr&egrave;s injection i.v., EG2-hFc expos&eacute;es accumulation de tumeur excellent et cela a &eacute;t&eacute; largement attribu&eacute;e &agrave; son s&eacute;rum longue demi-vie, qui est comparable &agrave; celle des IgG. La taille moyenne (environ 80 kDa) et Fc humaine intacte faire HCAbs un format unique d&#39;anticorps qui peut-&ecirc;tre surpasser IgG entier comme r&eacute;actifs de l&#39;imagerie et la th&eacute;rapeutiques.

Capacit&eacute;s ciblage tumoral diff&eacute;rentielles des trois formats d&#39;anticorps &agrave; domaine unique.

Molekulare Gr&ouml;&szlig;e der Antik&ouml;rpermedikamente gilt als ein wichtigen Faktor, die verhindert, dass sie immer effizienter Therapeutika. Variable Regionen der schweren Kette Antik&ouml;rper (HCAbs) oder einer Dom&auml;ne-Antik&ouml;rper (SdAbs), sind ideale Bausteine f&uuml;r kleinere Antik&ouml;rper aufgrund ihrer molekularen Gr&ouml;&szlig;e und verbesserte Stabilit&auml;t. Bei der Suche nach besseren Antik&ouml;rper-Formate f&uuml;r in-vivo Bildgebung und/oder Therapie von Krebs wurden drei Arten von SdAb basierende Molek&uuml;le gegen den epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR) konstruiert, charakterisiert und getestet. Elf SdAbs wurden isoliert von einer Bakteriophagenbildschirmanzeigebibliothek aus dem Repertoire SdAb ein Lama geimpft mit einer Variante des EGFR gebaut. Ein Pentameric SdAb oder Pentabody, V2C-EG2 war mehrschichtig eines der SdAbs, EG2, ein Pentamerization-Protein-Dom&auml;ne. Ein Chim&auml;rer HCAb (cHCAb), EG2-hFc, war mehrschichtig EG2 auf das Fragment kristallisierbare (Fc) von menschlichen IgG1. W&auml;hrend EG2 und V2C-EG2 nach i.v. Injektion haupts&auml;chlich in den Nieren lokalisiert, EG2-hFc stellte ausgezeichnete Tumor Anh&auml;ufung und dies wurde weitgehend zur&uuml;ckzuf&uuml;hren auf seine lange Serum-Halbwertszeit, die dem IgGs vergleichbar ist. Die mittlerer Gr&ouml;&szlig;e (ca. 80 kDa) und intakten menschlichen Fc machen HCAbs ein einzigartiges Antik&ouml;rper-Format, das ganze IgGs als imaging und therapeutische Reagenzien &uuml;bertreffen kann.

Differenzielle Tumor-targeting-F&auml;higkeiten der drei einzelnen Dom&auml;ne Antik&ouml;rper-Formate.

Le grandi dimensioni molecolari dei farmaci dell&#39;anticorpo sono considerata uno dei fattori pi&ugrave; importante impedendo loro di diventare pi&ugrave; efficiente therapeutics. Regioni variabile della catena pesante anticorpi (HCAbs), o anticorpi singolo dominio (sdAbs), sono blocchetti di costruzione ideale per anticorpi pi&ugrave; piccoli a causa della loro dimensione molecolare e una maggiore stabilit&agrave;. Nella ricerca di migliore anticorpo formati per imaging in vivo e/o terapia del cancro, tre tipi di molecole basate su sdAb diretti contro il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) sono stati costruiti, caratterizzati e testati. Undici sdAbs sono stati isolati da una libreria di visualizzazione dei fagi costruita dal repertorio sdAb di una lama immunizzato con una variante di EGFR. Un pentamerica sdAb, o pentabody, V2C-EG2 fu costruito fondendo uno il sdAbs, EG2, a un dominio della proteina pentamerization. Un chimerico HCAb (cHCAb), EG2-hFc, &egrave; stato costruito fondendo EG2 per il frammento cristallizzabile (Fc) di IgG1 umana. Considerando che EG2 e V2C-EG2 localizzata principalmente nei reni dopo l&#39;iniezione i.v., EG2-hFc esposto accumulo tumore eccellente, e questo &egrave; stato in gran parte attribuito al suo siero lungo met&agrave; della vita, che &egrave; paragonabile a quella di IgGs. La dimensione moderata (circa 80 kDa) e Fc umana intatta rendono HCAbs un formato unico anticorpo che pu&ograve; sbaragliare tutta IgGs come reagenti imaging e terapeutici.

Differenziale targeting tumorale le abilit&agrave; dei tre formati di dominio singolo anticorpo.

&#x6297;&#x4F53;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x304C;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B; 1 &#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x6570;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x91CD;&#x9396;&#x6297;&#x4F53; (HCAbs) &#x3084;&#x5358;&#x4E00;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6297;&#x4F53; (sdAbs) &#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x306A;&#x30D3;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;In vivo &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3084;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x6297;&#x4F53;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x3067;&#x306F;&#x3001;3 &#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;EGFR&#xFF09; &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x76E3;&#x7763; sdAb &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x5206;&#x5B50;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8; &#x30FB;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;11 SdAbs &#x306F;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306F; EGFR &#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x514D;&#x75AB;&#x3057;&#x305F;&#x30E9;&#x30DE;&#x306E; sdAb &#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x7BC9;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E94;&#x91CF;&#x4F53; sdAb&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; pentabody&#x3001;V2C EG2 pentamerization &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B; EG2&#x3001;sdAbs &#x306E; 1 &#x3064;&#x3092;&#x878D;&#x5408;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E; HCAb (cHCAb) EG2 hFc EG2 &#x306E;&#x304B;&#x3051;&#x3089;&#x3072;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A; IgG1 &#x3059;&#x308B;&#x7D50;&#x6676; &#xFF08;Fc&#xFF09; &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;EG2 &#x304A;&#x3088;&#x3073; V2C EG2&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x306E;&#x4E3B;&#x306B;&#x9759;&#x8108;&#x5185;&#x6295;&#x4E0E;&#x5F8C;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x816B;&#x760D;&#x96C6;&#x7A4D; EG2 hFc &#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x8840;&#x6E05; Igg &#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3059;&#x534A;&#x5206;&#x306E;&#x4EBA;&#x751F;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9069;&#x5EA6;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA; (&#x7D04; 80 kDa) &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x4EBA;&#x9593; Fc HCAbs &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x7684;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5168;&#x4F53;&#x306E; Igg &#x304C;&#x4E0A;&#x56DE;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x6297;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3092;&#x4F5C;&#x308B;&#x3002;

3 &#x3064;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6297;&#x4F53;&#x5F62;&#x5F0F;&#x306E;&#x5DEE;&#x5206;&#x816B;&#x760D;&#x6A19;&#x7684;&#x5316;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#xD56D; &#xCCB4; &#xC758;&#xC57D;&#xD488;&#xC758; &#xD070; &#xBD84;&#xC790; &#xD06C;&#xAE30; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD559; &#xB418;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xCCB4;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; (HCAbs) &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; (sdAbs)&#xC758; &#xAC00;&#xBCC0; &#xC601;&#xC5ED;&#xC740; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC791;&#xC740; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xBE4C;&#xB529; &#xBE14;&#xB85D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD654;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xCC30; &#xBC0F; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xD56D; &#xCCB4; &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC5D0; sdAb &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC790; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (EGFR)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xB3C5;&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC720;&#xD615; &#xD2B9;&#xC9D5;, &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xAC74;&#xC124; &#xD588;&#xB2E4;. 11 SdAbs &#xB77C;&#xB9C8; EGFR&#xC758; &#xBCC0;&#xC885; &#xC608;&#xBC29; &#xC811;&#xC885;&#xC758; sdAb &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC18C; &#xC804;&#xC2DC; &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Pentameric sdAb, &#xB610;&#xB294; pentabody, V2C EG2 &#xD558;&#xB098; pentamerization &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; EG2, sdAbs, &#xC735;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC74;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. EG2 hFc chimeric HCAb (cHCAb)&#xC5D0; crystallizable (Fc)&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; IgG1 EG2 &#xC735;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC74;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Eg2&#xC640; V2C EG2 i.v. &#xC8FC;&#xC785; &#xD6C4; &#xC2E0;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;, &#xBC18;&#xBA74; EG2 hFc &#xC804;&#xC2DC; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xC885;&#xC591; &#xCD95;&#xC801; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xAE34; &#xD608; &#xCCAD; Iggs&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294; &#xD558;&#xD504; &#xB77C;&#xC774;&#xD504;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC801;&#xB2F9; &#xD55C; &#xD06C;&#xAE30; (&#xC57D; 80 kDa)&#xC640; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Fc &#xD655;&#xC778; HCAbs &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xCCB4; Iggs&#xC744; &#xB2A5;&#xAC00;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4; &#xD615;&#xC2DD;.

&#xCC28;&#xB3D9; &#xC138; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD56D; &#xCCB4; &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El gran tama&ntilde;o molecular de drogas anticuerpo se considera un factor importante que es la terap&eacute;utica m&aacute;s eficaz. Las regiones variables de anticuerpos de cadena pesada (HCAbs), o el &uacute;nico dominio anticuerpos (sdAbs), son bloques de construcci&oacute;n ideales para los anticuerpos m&aacute;s peque&ntilde;os debido a su tama&ntilde;o molecular y mayor estabilidad. En la b&uacute;squeda de mejores anticuerpo formatos de imagen in vivo y/o terapia del c&aacute;ncer, tres tipos de mol&eacute;culas basadas en sdAb dirigidos contra el receptor del factor de crecimiento epid&eacute;rmico (EGFR) fueron construidos, caracterizan y probados. Once sdAbs fueron aislados de una biblioteca de pantalla Fago construida del repertorio sdAb de una llama inmunizado con una variante de EGFR. Un pentam&eacute;rica sdAb, o pentabody, V2C-EG2 fue construido por uno de los sdAbs, EG2, a un dominio de la prote&iacute;na pentamerization de fusi&oacute;n. Un quim&eacute;rico AcVHC (cHCAb), EG2-hFc, fue construido por fusi&oacute;n EG2 al fragmento cristalizable (Fc) de IgG1 humana. Mientras que EG2 y V2C-EG2 localizan principalmente en los ri&ntilde;ones despu&eacute;s de la inyecci&oacute;n i.v., EG2-hFc exhibi&oacute; acumulaci&oacute;n de tumor excelente, y esto se atribuye principalmente a su suero larga vida media, que es comparable a la de dep&oacute;sitos. El tama&ntilde;o moderado (aproximadamente 80 kDa) y Fc humano intacto hacen de HCAbs un formato &uacute;nico anticuerpo que puede superar a IgGs todo como reactivos de la proyecci&oacute;n de imagen y terap&eacute;uticos.

Habilidades de tumor-targeting diferenciales de tres formatos de anticuerpo &uacute;nico dominio.

&#x4ECB;&#x7535;&#x6CF3; (DEP) &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#x6765;&#x64CD;&#x4F5C;&#x548C;&#x7814;&#x7A76;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x91C7;&#x7528;&#x51E0;&#x4E2A;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;2 D DEP &#x82AF;&#x7247;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x6837;&#x672C;&#x91CF;&#xFF0C;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E09;&#x7EF4;&#x78B3;&#x7535;&#x6781; DEP &#x82AF;&#x7247;&#x4EE5;&#x6355;&#x83B7;&#x5E76;&#x91CA;&#x653E;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FDE;&#x7EED;&#x6D41;&#x52A8;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x63D2;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6DB2;&#x3001; &#x4FDD;&#x7559;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x901A;&#x8FC7;&#x79EF;&#x6781;&#x7684; DEP&#xFF0C;&#x5E76;&#x968F;&#x540E;&#x6062;&#x590D;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x80E8;&#x6C34;&#x6D17;&#x6DA4;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x6E05;&#x6D17;&#x3002;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5141;&#x8BB8;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x8981;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;DEP &#x884C;&#x4E3A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6062;&#x590D;&#x5206;&#x6570; DEP &#x56F0;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x6D41;&#x91CF;&#x7387;&#x51FA;&#x73B0;&#x5F71;&#x54CD;&#x82AF;&#x7247;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x53D1;&#x8FBE;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B89;&#x88C5;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x5206;&#x9694;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x78B3;&#x7535;&#x6781;&#x4ECB;&#x7535;&#x6CF3;&#x7684;&#x5728;&#x7EBF;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;

Dielectrophoresis (DEP) represents a powerful approach to manipulate and study living cells. Hitherto, several approaches have used 2-D DEP chips. With the aim to increase sample volume, in this study we used a 3-D carbon-electrode DEP chip to trap and release bacterial cells. A continuous flow was used to plug an Escherichia coli cell suspension first, to retain cells by positive DEP, and thereafter to recover them by washing with peptone water washing solution. This approach allows one not only to analyze DEP behavior of living cells within the chip, but also to further recover fractions containing DEP-trapped cells. Bacterial concentration and flow rate appeared as critical parameters influencing the separation capacity of the chip. Evidence is presented demonstrating that the setup developed in this study can be used to separate different types of bacterial cells.

On-line separation of bacterial cells by carbon-electrode dielectrophoresis.

Dielectrophoresis (DEP) repr&eacute;sente une approche puissante pour manipuler et &eacute;tudier les cellules vivantes. Jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent, plusieurs approches ont utilis&eacute; des puces DEP 2D. Dans le but d&#39;augmenter le volume de l&#39;&eacute;chantillon, dans cette &eacute;tude, nous avons utilis&eacute; une puce DEP-&eacute;lectrode de carbone 3D pour pi&eacute;ger et lib&eacute;rer les cellules bact&eacute;riennes. Un flux continu a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour brancher une suspension de cellules Escherichia coli en premier, de conserver des cellules par DEP positif, puis de les r&eacute;cup&eacute;rer en lavant avec de l&#39;eau pepton&eacute;e solution de lavage. Cette approche permet non seulement d&#39;analyser le comportement des DEP des cellules vivantes au sein de la puce, mais aussi pour r&eacute;cup&eacute;rer davantage des fractions contenant des cellules DEP pi&eacute;g&eacute;s. Taux de flux et de la concentration bact&eacute;rien est apparu en tant que param&egrave;tres critiques qui pourraient influencer la capacit&eacute; de s&eacute;paration de la puce. Nous pr&eacute;sentons ce qui d&eacute;montre que le programme d&#39;installation d&eacute;velopp&eacute; dans cette &eacute;tude peut &ecirc;tre utilis&eacute; pour s&eacute;parer les diff&eacute;rents types de cellules bact&eacute;riennes.

S&eacute;paration en direct des cellules bact&eacute;riennes par di&eacute;lectrophor&egrave;se &eacute;lectrode en charbon.

Dielektrophorese (DEP) stellt einen leistungsf&auml;higen Ansatz zu manipulieren und lebenden Zellen zu studieren. Bisher haben mehrere Ans&auml;tze 2-D-DEP-Chips verwendet. Mit dem Ziel, Probenvolumen zu erh&ouml;hen in dieser Studie verwendet wir einen 3-d Carbon-Elektroden-DEP-Chip auffangen und Freigeben von Bakterienzellen. Ein kontinuierlicher Fluss wurde ein Escherichia-coli-Zellsuspension zuerst Stecker, Zellen durch positive DEP zu behalten und danach wiederhergestellt werden k&ouml;nnen durch Waschen mit Peptonwasser Waschl&ouml;sung verwendet. Dieser Ansatz erlaubt es nicht nur um DEP Verhalten lebender Zellen innerhalb der Chip zu analysieren, sondern auch weitere Br&uuml;che mit DEP-gefangen Zellen wiederherstellen. Bakterielle Konzentration und Flow Rate erschien als kritische Parameter beeinflussen die Trennung-Kapazit&auml;t des Chips. Beweise zeigen, dass das Setup in dieser Studie entwickelten verwendet werden kann, um verschiedene Arten von bakteriellen Zellen zu trennen ist.

Online Trennung von bakteriellen Zellen von Kohlenstoff-Elektroden Dielektrophorese.

Dielettroforesi (DEP) rappresenta un approccio potente per manipolare e lo studio delle cellule viventi. Finora, diversi approcci sono utilizzati chip DEP 2-D. Con l&#39;obiettivo di aumentare il volume del campione, in questo studio abbiamo utilizzato un chip di protezione esecuzione programmi 3D carbonio-elettrodo per intrappolare e rilasciare le cellule batteriche. Un flusso continuo &egrave; stato utilizzato per collegare una sospensione di cellule di Escherichia coli in primo luogo, per mantenere le cellule da DEP positivo e successivamente recuperarli mediante lavaggio con soluzione di lavaggio l&#39;acqua peptonata. Questo approccio permette non solo per analizzare il comportamento DEP di cellule viventi all&#39;interno del chip, ma anche di recuperare ulteriori frazioni contenenti cellule intrappolate DEP. Tasso di flusso e concentrazione batterico &egrave; apparso come parametri critici che influenzano la capacit&agrave; di separazione del chip. Prova &egrave; presentata dimostrando che il setup sviluppato in questo studio pu&ograve; essere utilizzato per separare i diversi tipi di cellule batteriche.

Separazione on-linea di cellule batteriche di carbonio-elettrodo dielettroforesi.

&#x8A98;&#x96FB;&#x6CF3;&#x52D5; (DEP) &#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;2 D DEP &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB; &#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x76EE;&#x7684;&#x3067;&#x3001;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x6211;&#x3005; 3-D &#x30AB;&#x30FC;&#x30DC;&#x30F3;&#x96FB;&#x6975; DEP &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7; &#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x89E3;&#x653E;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x9023;&#x7D9A;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x3092;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B0;&#x30A4;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x6B63;&#x306E; DEP &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x4EE5;&#x5F8C;&#x3001;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30F3;&#x6C34;&#x6D17;&#x6D44;&#x6DB2;&#x6D17;&#x6D44;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3001;&#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x5185;&#x306E;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; DEP &#x52D5;&#x4F5C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B; DEP &#x306B;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x542B;&#x6709;&#x5206;&#x753B;&#x3092;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x83CC;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x767B;&#x5834;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AA;&#x30F3;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x5206;&#x96E2;&#x70AD;&#x7D20;&#x96FB;&#x6975;&#x8A98;&#x96FB;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3002;

Dielectrophoresis (DEP) &#xC870;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0;, &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; 2 &#xCC28;&#xC6D0; DEP &#xCE69;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0D8;&#xD50C; &#xBCFC;&#xB968; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB85C;,&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xD0C4;&#xC18C; &#xC804;&#xADF9; DEP &#xCE69; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD2B8;&#xB7A9; &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;. &#xC5F0;&#xC18D; &#xD750;&#xB984; &#xBA3C;&#xC800; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC140; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158; &#xD50C;&#xB7EC;&#xADF8;, &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; DEP&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xD6C4; &#xC138;&#xCC99; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xCC9C;&#xC5D0; &#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xCC99; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xCD94;&#xAC00; DEP &#xAC07;&#xD600; &#xC140;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;, &#xCE69; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; DEP &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D;&#xD560; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xADE0; &#xB18D;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xD750;&#xB984; &#xC18D;&#xB3C4; &#xCE69;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB9E4;&#xAC1C;&#xB85C; &#xB4F1;&#xC7A5;. &#xC138;&#xADE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC885;&#xB958;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xC124;&#xCE58; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70; &#xC81C;&#xC2DC;.

&#xD0C4;&#xC18C; &#xC804;&#xADF9; dielectrophoresis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC628;&#xB77C;&#xC778; &#xBD84;&#xB9AC;.

Dielectroforesis (DEP) representa un enfoque poderoso para manipular y estudiar las c&eacute;lulas vivas. Hasta ahora, varios enfoques han utilizado 2-D DEP virutas. Con el objetivo de aumentar el volumen de la muestra, en este estudio utilizamos un chip DEP de electrodo de carbono 3D para atrapar y liberar las c&eacute;lulas bacterianas. Un flujo continuo se utiliz&oacute; para tapar una suspensi&oacute;n de c&eacute;lulas de Escherichia coli en primer lugar, para conservar c&eacute;lulas por DEP positivo y despu&eacute;s recuperarlos con agua de peptona, soluci&oacute;n de lavado. Este enfoque permite no s&oacute;lo analizar el comportamiento DEP de c&eacute;lulas vivas en el chip, sino tambi&eacute;n para recuperar otras fracciones que contienen c&eacute;lulas DEP-atrapados. Tasa de flujo y concentraci&oacute;n bacteriana apareci&oacute; como par&aacute;metros cr&iacute;ticos que influyen en la capacidad de la separaci&oacute;n de la viruta. Se presenten pruebas demostrando que el setup desarrollado en este estudio puede usarse para separar los diferentes tipos de c&eacute;lulas bacterianas.

Separaci&oacute;n en l&iacute;nea de las c&eacute;lulas bacterianas por carbono-electrodo dielectroforesis.

Recentemente, le proteine e peptidi sono diventati un valore aggiunto per i prodotti alimentari a causa di nuove conoscenze sulle sue analisi strutturali in relazione ad attivit&agrave; antiossidante e antitumorale. Il nostro obiettivo era di valutare se le frazioni di proteine da semi di cacao Visualizza attivit&agrave; antitumorale sul modello di linfoma murino L5178Y. L&#39;attivit&agrave; antiossidante di queste frazioni &egrave; stato valutato anche con l&#39;obiettivo di trovare una correlazione con l&#39;attivit&agrave; antitumorale.

Attivit&agrave; antitumorale contro il modello murino di linfoma L5178Y delle proteine da semi di cacao (Theobroma cacao L.) in relazione con attivit&agrave; antiossidante in vitro.

Proteine und Peptide haben vor kurzem einen Mehrwert f&uuml;r Lebensmittel aufgrund neuer Erkenntnisse &uuml;ber ihre strukturellen Analysen in Bezug auf die antioxidative und Anti-Krebs-Aktivit&auml;t geworden. Unser Ziel war es zu ermitteln, ob Protein Fraktionen aus Kakao Samen antitumor-Aktivit&auml;t auf Lymphom murinen L5178Y Modell zeigen. Die antioxidative Aktivit&auml;t von diesen Br&uuml;chen ausgewertet wurde auch mit dem Ziel, eine Korrelation mit der antitumor-Aktivit&auml;t zu finden.

Antitumor-Aktivit&auml;t gegen murine Lymphom L5178Y-Modell von Proteinen aus Kakao (Theobroma Cacao L.) Samen im Zusammenhang mit in-vitro-antioxidative Aktivit&auml;t.

&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x80BD;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x98DF;&#x54C1;&#x56E0;&#x5176;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E0E;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x548C;&#x6297;&#x764C;&#x6D3B;&#x6027;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x65B0;&#x77E5;&#x8BC6;&#x800C;&#x589E;&#x52A0;&#x4EF7;&#x503C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5982;&#x679C;&#x4ECE;&#x53EF;&#x53EF;&#x8C46;&#x79CD;&#x5B50;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5206;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624; L5178Y &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0A;&#x663E;&#x793A;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC4;&#x5206;&#x7684;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E5F;&#x8BC4;&#x4EF7;&#xFF0C;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x5BFB;&#x627E;&#x4E0E;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;

&#x9488;&#x5BF9;&#x53EF;&#x53EF; (&#x70ED;&#x5E26;&#x53EF;&#x53EF; L.) &#x79CD;&#x5B50;&#x5728;&#x5173;&#x7CFB;&#x4E2D;&#x4ECE;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624; L5178Y &#x6A21;&#x578B;&#x4E0E;&#x4F53;&#x5916;&#x6297;&#x6C27;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

Recently, proteins and peptides have become an added value to foodstuffs due to new knowledge about its structural analyses as related to antioxidant and anticancer activity. Our goal was to evaluate if protein fractions from cacao seeds show antitumor activity on lymphoma murine L5178Y model. The antioxidant activity of these fractions was also evaluated with the aim of finding a correlation with the antitumor activity.

Antitumor activity against murine lymphoma L5178Y model of proteins from cacao (Theobroma cacao L.) seeds in relation with in vitro antioxidant activity.

R&eacute;cemment, les prot&eacute;ines et les peptides sont devenues une valeur ajout&eacute;e aux denr&eacute;es alimentaires en raison de nouvelles connaissances sur ses analyses structurelles comme li&eacute;s &agrave; l&#39;activit&eacute; antioxydante et anticanc&eacute;reuse. Notre objectif &eacute;tait d&#39;&eacute;valuer si les fractions prot&eacute;iques des graines de cacao montrent une activit&eacute; antitumorale sur le mod&egrave;le murin de L5178Y lymphome. L&#39;activit&eacute; antioxydante de ces fractions a &eacute;galement &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;e dans le but de trouver une corr&eacute;lation avec l&#39;activit&eacute; antitumorale.

Activit&eacute; antitumorale contre mod&egrave;le de lymphome murin L5178Y des prot&eacute;ines des graines de cacao (Theobroma cacao L.) en relation avec l&#39;activit&eacute; antioxydante in vitro.

&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3084;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4ED8;&#x52A0;&#x4FA1;&#x5024;&#x98DF;&#x54C1;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x77E5;&#x8B58;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x753B;&#x30AB;&#x30AB;&#x30AA;&#x7A2E;&#x5B50;&#x304B;&#x3089;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B; l5178y/tk + &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x753B;&#x5206;&#x306E;&#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

In vitro &#x6297;&#x9178;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x6D3B;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AB;&#x30AB;&#x30AA; &#xFF08;&#x30C6;&#x30AA;&#x30D6;&#x30ED;&#x30DE; &#x30AB;&#x30AB;&#x30AA; L.) &#x7A2E;&#x5B50;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B; l5178y/tk + &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#xCD5C;&#xADFC;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DD;&#xD488;&#xC73C;&#xB85C; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC0F; &#xD56D; &#xC554; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAD00;&#xB828;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC9C0;&#xC2DD; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBD80;&#xAC00; &#xAC00;&#xCE58;&#xB97C; &#xB04C;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xCE74; &#xCE74;&#xC624; &#xC528;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC218; antitumor &#xD65C;&#xB3D9; &#xB9BC;&#xD504; &#xC885; murine L5178Y &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBD84;&#xC218;&#xC758; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xD65C;&#xB3D9; antitumor &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xCC3E;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBAA9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xBC1B;&#xC558;&#xB2E4;.

&#xCCB4; &#xC678; &#xD56D; &#xC0B0;&#xD654; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAD00;&#xACC4;&#xC5D0; &#xCE74; &#xCE74;&#xC624; (Theobroma &#xCE74; &#xCE74;&#xC624; &#xC5F4;&#xB9E4; L.) &#xC528;&#xC557;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; murine &#xB9BC;&#xD504; L5178Y &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; antitumor &#xD65C;&#xB3D9;.

Recientemente, las prote&iacute;nas y p&eacute;ptidos se han convertido en un valor agregado a los productos alimenticios debido a nuevos conocimientos sobre sus an&aacute;lisis estructurales en relaci&oacute;n con la actividad anticancerosa y antioxidantes. Nuestro objetivo fue evaluar si fracciones proteicas de las semillas de cacao muestran actividad antitumoral en modelos murinos de L5178Y linfoma. Tambi&eacute;n se evalu&oacute; la actividad antioxidante de estas fracciones con el objetivo de encontrar una correlaci&oacute;n con la actividad antitumoral.

Actividad antitumoral contra modelo de linfoma murino L5178Y de prote&iacute;nas de las semillas de cacao (Theobroma cacao L.) en relaci&oacute;n con la actividad antioxidante in vitro.

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Type 1 diabetes affects more than a million people in the United States and many more across the world. While pharmaceutical interventions and insulin supplementation are the most commonplace treatment of diabetes, these are not essentially cures and can potentially lead to long-term complications. Transplantation of insulin-producing Islets of Langerhans from donor pancreas has been established as a promising alternative to diabetes therapy. While successful islet transplantation has the potential of providing a cure, the primary hurdles to be overcome for it to be clinically viable are the scarcity of donor islets and immune rejection of transplanted islets. Recent advances in stem cell culture and differentiation techniques have established stem cells as a likely source of transplantable islets. Different stem cell sources have been induced toward pancreatic differentiation using specific chemical perturbations along with use of specific substrates. An approach to overcoming the second hurdle of immune rejection of transplantable islets is to encapsulate the islets in specific biomaterials. In this review, we discuss the extensive use of various substrates for pancreatic differentiation of different stem cell sources, along with different biomaterial designs used for islet transplantation.

Role of substrates in diabetes therapy: stem cell differentiation and islet transplantation.

Diab&#xE8;te de type 1 touche plus d&#x26;#39;un million de personnes aux &#xC9;tats-Unis et beaucoup d&#x26;#39;autres &#xE0; travers le monde. Bien que les interventions pharmaceutiques et de suppl&#xE9;ments d&#x26;#39;insuline sont le traitement le plus commun de diab&#xE8;te, celles-ci ne sont pas essentiellement des rem&#xE8;des et peut potentiellement conduire &#xE0; des complications &#xE0; long terme. La transplantation de productrices d&#x26;#39;insuline &#xEE;lots de Langerhans du pancr&#xE9;as du donneur a &#xE9;t&#xE9; cr&#xE9;&#xE9; comme une alternative prometteuse &#xE0; la th&#xE9;rapie du diab&#xE8;te. Bien que la transplantation d&#x26;#39;&#xEE;lots r&#xE9;ussie a le potentiel de fournir un rem&#xE8;de, les principaux obstacles &#xE0; surmonter pour qu&#x26;#39;il soit viable sur le plan clinique sont la raret&#xE9; des &#xEE;lots donateurs et le rejet immunitaire des &#xEE;lots transplant&#xE9;s. Les progr&#xE8;s r&#xE9;cents dans la culture de cellules souches et les techniques de diff&#xE9;renciation des cellules souches ont &#xE9;tabli comme une source probable d&#x26;#39;&#xEE;lots transplantables. Diff&#xE9;rentes sources de cellules souches ont &#xE9;t&#xE9; induites &#xE0; la diff&#xE9;renciation du pancr&#xE9;as en utilisant des perturbations chimiques sp&#xE9;cifiques ainsi que l&#x26;#39;utilisation de substrats sp&#xE9;cifiques. Une approche pour surmonter le deuxi&#xE8;me obstacle du rejet immunitaire des &#xEE;lots transplantables consiste &#xE0; encapsuler les &#xEE;lots dans les biomat&#xE9;riaux sp&#xE9;cifiques. Dans cette revue, nous discutons de l&#x26;#39;utilisation extensive des diff&#xE9;rents substrats pour la diff&#xE9;renciation pancr&#xE9;atique de diff&#xE9;rentes sources de cellules souches, le long avec des conceptions diff&#xE9;rentes de biomat&#xE9;riaux utilis&#xE9;s pour la transplantation d&#x26;#39;&#xEE;lots.

R&#xF4;le des substrats en th&#xE9;rapie du diab&#xE8;te: diff&#xE9;renciation des cellules souches et la transplantation d&#x26;#39;&#xEE;lots

Typ 1-Diabetes betrifft mehr als 1 Million Menschen in den Vereinigten Staaten und viele mehr auf der ganzen Welt. W&auml;hrend pharmazeutische Interventionen und Insulin-Erg&auml;nzung der banalsten Behandlung von Diabetes sind, diese sind nicht im wesentlichen Kuren und potentiell zu langfristigen Komplikationen f&uuml;hren k&ouml;nnen. Transplantation von Insulin produzierenden kleinen Inseln von Langerhans vom Spender Bauchspeicheldr&uuml;se wurde als eine vielversprechende Alternative zur Diabetestherapie gegr&uuml;ndet. W&auml;hrend erfolgreiche Islet Transplantation das Potenzial f&uuml;r die Bereitstellung einer Heilung hat, sind die prim&auml;ren H&uuml;rden zu klinisch praktikable &uuml;berwunden werden die Knappheit der Spender Inselchen und immun Ablehnung von transplantierten Inselchen. J&uuml;ngste Fortschritte in der Stammzelle-Kultur und Differenzierung-Techniken haben Stammzellen als wahrscheinlich Quelle f&uuml;r &uuml;bertragbare Inselchen etabliert. Verschiedene Stammzell-Quellen haben in Richtung Pankreas Differenzierung mit bestimmte chemische St&ouml;rungen zusammen mit Verwendung von spezifische Substrate induziert worden. Ein Ansatz zur &Uuml;berwindung der zweiten H&uuml;rde immun Ablehnung des &uuml;bertragbare Inselchen ist die Inselchen in bestimmten Biomaterialien zu kapseln. In diesem Bericht diskutieren wir die umfangreiche Verwendung von verschiedenen Substraten f&uuml;r Pankreas Differenzierung der verschiedenen Stammzell-Quellen, zusammen mit verschiedenen Biomaterial Entw&uuml;rfe f&uuml;r Islet Transplantation verwendet.

Rolle der Substrate in der Diabetestherapie: Differenzierung und Inselchen Stammzelltransplantation.

Diabete di tipo 1 colpisce pi&ugrave; di 1 milione di persone negli Stati Uniti e molti altri in tutto il mondo. Mentre gli interventi farmaceutici e somministrazione di insulina sono il trattamento pi&ugrave; comune del diabete, queste non sono essenzialmente cure e pu&ograve; potenzialmente portare a complicanze a lungo termine. Il trapianto di isolotti di Langerhans produttrici di insulina dal pancreas del donatore &egrave; stato istituito come una promettente alternativa alla terapia del diabete. Mentre il trapianto riuscito isolotto ha il potenziale di fornire una cura, gli ostacoli principali da superare per essere clinicamente valida sono la scarsit&agrave; di isolotti di donatore e rifiuto immune trapiantato isolotti. I recenti progressi nelle tecniche di coltura e la differenziazione delle cellule staminali hanno stabilito le cellule staminali come probabile fonte di isolotti trapiantabili. Cellule staminali diverse fonti sono stata indotta verso la differenziazione del pancreas mediante specifiche perturbazioni chimiche insieme all&#39;utilizzo di substrati specifici. Un approccio per superare il secondo ostacolo del rifiuto immune di isolotti trapiantabili &egrave; per incapsulare le isolette in biomateriali specifici. In questa recensione, discutiamo l&#39;uso estensivo di vari substrati per la differenziazione del pancreas di fonti differenti delle cellule staminali, insieme a disegni diversi biomateriali utilizzati per trapianto isolotto.

Ruolo dei substrati nella terapia del diabete: trapianto di cellule staminali differenziazione e isolotto.

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La diabetes tipo 1 afecta a m&#xE1;s de un mill&#xF3;n de personas en los Estados Unidos y muchos m&#xE1;s en todo el mundo. Si bien las intervenciones farmac&#xE9;uticas y de suplementos de insulina son el tratamiento m&#xE1;s com&#xFA;n de diabetes, no son en esencia las curaciones y, potencialmente, puede conducir a complicaciones a largo plazo. El trasplante de islotes productoras de insulina de Langerhans del p&#xE1;ncreas de donantes se ha establecido como una alternativa prometedora para la terapia de la diabetes. Mientras que el &#xE9;xito del trasplante de islotes tiene el potencial de proporcionar una cura, los principales obst&#xE1;culos que deben superarse para que sea cl&#xED;nicamente viable es la escasez de donantes y de los islotes de rechazo inmunol&#xF3;gico de los islotes trasplantados. Los recientes avances en cultivo de c&#xE9;lulas madre y las t&#xE9;cnicas de diferenciaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas madre han establecido como una fuente probable de los islotes para trasplantes. Diferentes fuentes de c&#xE9;lulas madre se han inducido hacia la diferenciaci&#xF3;n pancre&#xE1;tica utilizando perturbaciones qu&#xED;micas espec&#xED;ficas junto con el uso de sustratos espec&#xED;ficos. Un enfoque para superar el segundo obst&#xE1;culo del rechazo inmune de los islotes para trasplantes es encapsular los islotes en biomateriales espec&#xED;ficos. En esta revisi&#xF3;n, se discuten el uso extensivo de diversos sustratos para la diferenciaci&#xF3;n del p&#xE1;ncreas de diferentes fuentes de c&#xE9;lulas madre, junto con diferentes dise&#xF1;os de biomateriales utilizados para el trasplante de islotes.

El papel de los sustratos en la terapia de la diabetes: diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre y el trasplante de islotes

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The mechanisms by which human embryonic stem cells (hESC) differentiate to endodermal lineage have not been extensively studied. Mathematical models can aid in the identification of mechanistic information. In this work we use a population-based modeling approach to understand the mechanism of endoderm induction in hESC, performed experimentally with exposure to Activin A and Activin A supplemented with growth factors (basic fibroblast growth factor (FGF2) and bone morphogenetic protein 4 (BMP4)). The differentiating cell population is analyzed daily for cellular growth, cell death, and expression of the endoderm proteins Sox17 and CXCR4. The stochastic model starts with a population of undifferentiated cells, wherefrom it evolves in time by assigning each cell a propensity to proliferate, die and differentiate using certain user defined rules. Twelve alternate mechanisms which might describe the observed dynamics were simulated, and an ensemble parameter estimation was performed on each mechanism. A comparison of the quality of agreement of experimental data with simulations for several competing mechanisms led to the identification of one which adequately describes the observed dynamics under both induction conditions. The results indicate that hESC commitment to endoderm occurs through an intermediate mesendoderm germ layer which further differentiates into mesoderm and endoderm, and that during induction proliferation of the endoderm germ layer is promoted. Furthermore, our model suggests that CXCR4 is expressed in mesendoderm and endoderm, but is not expressed in mesoderm. Comparison between the two induction conditions indicates that supplementing FGF2 and BMP4 to Activin A enhances the kinetics of differentiation than Activin A alone. This mechanistic information can aid in the derivation of functional, mature cells from their progenitors. While applied to initial endoderm commitment of hESC, the model is general enough to be applicable either to a system of adult stem cells or later stages of ESC differentiation.

Population Based Model of Human Embryonic Stem Cell (hESC) Differentiation during Endoderm Induction.

Les m&#xE9;canismes par lesquels les cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) diff&#xE9;rencient &#xE0; la lign&#xE9;e endodermique n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;s. Les mod&#xE8;les math&#xE9;matiques peuvent aider &#xE0; l&#x26;#39;identification de l&#x26;#39;information m&#xE9;caniste. Dans ce travail, nous utilisons une approche de mod&#xE9;lisation bas&#xE9;e sur la population de comprendre le m&#xE9;canisme d&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;endoderme CSEh, r&#xE9;alis&#xE9;e exp&#xE9;rimentalement avec l&#x26;#39;exposition &#xE0; l&#x26;#39;activine A et activine A compl&#xE9;t&#xE9;e par des facteurs de croissance (facteur de croissance des fibroblastes (FGF2) et la prot&#xE9;ine morphog&#xE9;n&#xE9;tique osseuse 4 (BMP4 )). La population cellulaire de diff&#xE9;renciation est analys&#xE9;e tous les jours pour la croissance cellulaire, la mort cellulaire, et l&#x26;#39;expression des prot&#xE9;ines endoderme Sox17 et CXCR4. Le mod&#xE8;le stochastique commence avec une population de cellules indiff&#xE9;renci&#xE9;es, d&#x26;#39;o&#xF9; il &#xE9;volue dans le temps en attribuant &#xE0; chaque cellule une propension &#xE0; prolif&#xE9;rer, meurent et se diff&#xE9;rencier en utilisant les r&#xE8;gles d&#x26;#39;utilisation de certaines d&#xE9;finis. Douze autres m&#xE9;canismes qui pourraient d&#xE9;crire les dynamiques observ&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; simul&#xE9;s, et une estimation des param&#xE8;tres ensemble a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e sur chaque m&#xE9;canisme. Une comparaison de la qualit&#xE9; de l&#x26;#39;accord des donn&#xE9;es exp&#xE9;rimentales avec des simulations pour plusieurs m&#xE9;canismes concurrents ont conduit &#xE0; l&#x26;#39;identification de celui qui d&#xE9;crit correctement les dynamiques observ&#xE9;es dans des conditions d&#x26;#39;induction les deux. Les r&#xE9;sultats indiquent que l&#x26;#39;engagement de CSEh endoderme se produit &#xE0; travers une couche de germe de mesendoderm interm&#xE9;diaire qui diff&#xE9;rencie plus loin dans le m&#xE9;soderme et l&#x26;#39;endoderme, et que, pendant la prolif&#xE9;ration d&#x26;#39;induction de la couche de germe de l&#x26;#39;endoderme est promu. En outre, notre mod&#xE8;le sugg&#xE8;re que CXCR4 est exprim&#xE9; en mesendoderm et l&#x26;#39;endoderme, mais n&#x26;#39;est pas exprim&#xE9; dans le m&#xE9;soderme. Comparaison entre les deux conditions d&#x26;#39;induction indique que la suppl&#xE9;mentation FGF2 et BMP4 &#xE0; l&#x26;#39;activine A am&#xE9;liore la cin&#xE9;tique de diff&#xE9;renciation que l&#x26;#39;activine A seul. Cette information sur le m&#xE9;canisme peut aider &#xE0; la d&#xE9;rivation de cellules matures fonctionnelles, de leurs anc&#xEA;tres. Lorsqu&#x26;#39;elle est appliqu&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;engagement initial de l&#x26;#39;endoderme CSEh, le mod&#xE8;le est assez g&#xE9;n&#xE9;ral pour &#xEA;tre applicable soit &#xE0; un syst&#xE8;me de cellules souches adultes ou les &#xE9;tapes ult&#xE9;rieures de la diff&#xE9;renciation ESC.

Mod&#xE8;le de la population bas&#xE9;e sur des cellules souches embryonnaires humaines (CSEh) Diff&#xE9;renciation cours de l&#x26;#39;induction Endoderme

Die Mechanismen, mit denen menschlicher embryonaler Stammzellen (hESC) zu endodermalen Linie unterscheiden, haben nicht ausgiebig studiert. Mathematische Modelle k&ouml;nnen zur Identifizierung der mechanistischen Informationen helfen. In dieser Arbeit verwenden wir einen bev&ouml;lkerungsbezogene Modellierung-Ansatz um zu verstehen, den Mechanismus der Endodermis Induktion in hESC, experimentell mit der Exposition gegen&uuml;ber Activin A durchgef&uuml;hrt und Activin A erg&auml;nzt mit Wachstumsfaktoren (grundlegende Fibroblasten-Wachstumsfaktor (FGF2) und Knochen morphogenetische Protein 4 (BMP4)). Die ausschlaggebenden Zellpopulation ist t&auml;glich f&uuml;r zellul&auml;re Wachstum, Zelltod und Expression der Endodermis Proteine Sox17 und CXCR4 analysiert. Das stochastische Modell beginnt mit einer Bev&ouml;lkerung von undifferenzierten Zellen, wodurch sie sich rechtzeitig durch Zuweisen von jeder Zelle eine Neigung zu vermehren, zu sterben und zu differenzieren, mit bestimmten benutzerdefinierten Regeln entwickelt. Zw&ouml;lf alternative Mechanismen, die die beobachteten Dynamik beschreiben k&ouml;nnte, wurden simuliert und ein Ensemble-Parametersch&auml;tzung wurde am einzelnen Mechanismus durchgef&uuml;hrt. Ein Vergleich der Qualit&auml;t der Vereinbarung von experimentellen Daten mit Simulationen f&uuml;r mehrere konkurrierende Mechanismen, die zur Identifizierung eines angemessen beschreibt die beobachteten Dynamik unter beiden Bedingungen Induktion f&uuml;hrte. Die Ergebnisse zeigen, dass hESC Engagement f&uuml;r Endodermis durch eine fortgeschrittene Mesendoderm-Mikrobe-Schicht, erfolgt die weiter differenziert in Mesoderm und Entoderm, und die w&auml;hrend der Induktion Verbreitung von der Endodermis Mikrobe-Schicht wird gef&ouml;rdert. Dar&uuml;ber hinaus empfiehlt unser Modell CXCR4 wird ausgedr&uuml;ckt in Mesendoderm und Entoderm, aber wird nicht im Mesoderm ausgedr&uuml;ckt. Vergleich zwischen den zwei Induktions-Bedingungen zeigt, dass FGF2 und BMP4 Activin A erg&auml;nzen die Kinetik der Differenzierung als Activin A allein erh&ouml;ht. Diese mechanistische Informationen kann bei der Ableitung von funktionalen, Reifen Zellen von ihrer Vorfahren helfen. W&auml;hrend auf urspr&uuml;ngliche Endodermis Engagement der hESC angewendet, das Modell ist ausreichend allgemein anwendbar ist entweder zu einem Erwachsenen ergeben sich Zellen oder sp&auml;teren Phasen der ESC Differenzierung.

Maria Jaramillo

Department of Bioengineering

University of Pittsburgh

Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

Maria Jaramillo

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University of Pittsburgh

Endothelial Cell Co-culture Mediates Maturation of Human Embryonic Stem Cell to Pancreatic Insulin Producing Cells in a Directed Differentiation Approach

Department of Bioengineering