Extraction of Tissue Antigens for Functional Assays

Many of the antigen targets of adaptive immune response, recognized by B and T cells, have not been defined 1. This is particularly true in autoimmune ...

St. Vincent's Institute of Medical Research

&#x764C;&#x80DA;&#x6297;&#x539F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;-1 (CEACAM1) &#x662F;&#x8868;&#x793A;&#x5BF9;&#x5404;&#x79CD;&#x8840;&#x6DB2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;CEACAM1 &#x62E5;&#x6709;&#x80F6;&#x7C98;&#x5242;&#x548C;&#x5176;&#x56FA;&#x6709; immunoreceptor &#x57FA;&#x4E8E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x56FE;&#x6848;&#xFF0C;&#x62DB;&#x8058;&#x5C0F;&#x6C34;&#x7535; 1 &#x86CB;&#x767D;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; CEACAM1 &#x8868;&#x793A;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x548C;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x6C60;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;CEACAM1 &#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x4EA7;&#x751F;&#x6D88;&#x6781;&#x8C03;&#x8282;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; (FcR)-&gamma;-&#x516D; (GPVI) /Fc &#x53D7;&#x4F53;&#x901A;&#x8FC7;&#x80F6;&#x539F;&#x7684;&#x94FE;&#x3002;ceacam1(-/-) &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x663E;&#x793A;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x6211;&#x80F6;&#x539F;&#x548C; GPVI &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x914D;&#x4F53;&#x3001; &#x80F6;&#x539F;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x80BD; &#xFF08;CRP&#xFF09; CRP &#x4ECB;&#x5BFC;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x805A;&#x96C6;&#xFF0C;&#x589E;&#x5F3A;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7C98;&#x9644;&#x4E0A;&#x578B;&#x80F6;&#x539F;&#xFF0C;&#x548C;&#x9AD8;&#x67B6;&#x7684; CRP &#x4ECB;&#x5BFC; alpha &#x4E0E;&#x81F4;&#x5BC6;&#x9897;&#x7C92;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x4ECE; ceacam1(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x6D3E;&#x751F;&#x7A97;&#x4F53;&#x8F83;&#x5927;&#x6813;&#x5728;&#x80F6;&#x539F;&#x57FA;&#x8D28;&#x52A8;&#x8109;&#x8840;&#x6D41;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E0B;&#x704C;&#x6D41;&#x65F6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E09;&#x6C2F;&#x5316;&#x94C1;&#x53D7;&#x4F24;&#x80A0;&#x7CFB;&#x819C;&#x5C0F;&#x52A8;&#x8109;&#x7684;&#x6D3B;&#x4F53;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x764C;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x7684; ceacam1(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x66F4;&#x5927;&#x548C;&#x66F4;&#x52A0;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;GPVI &#x6D88;&#x8017;&#x4F7F;&#x7528; ceacam1(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53; JAQ1 &#x6CBB;&#x7597;&#x663E;&#x793A;&#x66F4;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x8840;&#x6813;&#x589E;&#x957F;&#x8868;&#x578B;&#x9006;&#x8F6C;&#x3002;ceacam1(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x662F; I &#x578B;&#x80F6;&#x539F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80BA;&#x8840;&#x6813;&#x6813;&#x585E;&#x75C7;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x66F4;&#x654F;&#x611F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;CEACAM1 &#x884C;&#x4E3A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8D1F;&#x9762;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x548C;&#x8840;&#x6813;&#x589E;&#x957F;&#x6D89;&#x53CA;&#x80F6;&#x539F; GPVI &#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x80F6;&#x539F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

CEACAM1 &#x4E0D;&#x5229;&#x89C4;&#x5B9A;&#x4E86;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x80F6;&#x539F;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x8840;&#x6813;&#x751F;&#x957F;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

Carcinoembryonic antigen cell adhesion molecule-1 (CEACAM1) is a surface glycoprotein expressed on various blood cells, epithelial cells, and vascular cells. CEACAM1 possesses adhesive and signaling properties mediated by its intrinsic immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs that recruit SHP-1 protein-tyrosine phosphatase. In this study, we demonstrate that CEACAM1 is expressed on the surface and in intracellular pools of platelets. In addition, CEACAM1 serves to negatively regulate signaling of platelets by collagen through the glycoprotein VI (GPVI)/Fc receptor (FcR)-gamma-chain. ceacam1(-/-) platelets displayed enhanced type I collagen and GPVI-selective ligand, collagen-related peptide (CRP), CRP-mediated platelet aggregation, enhanced platelet adhesion on type I collagen, and elevated CRP-mediated alpha and dense granule secretion. Platelets derived from ceacam1(-/-) mice form larger thrombi when perfused over a collagen matrix under arterial flow compared with wild-type mice. Furthermore, using intravital microscopy to ferric chloride-injured mesenteric arterioles, we show that thrombi formed in vivo in ceacam1(-/-) mice were larger and were more stable than those in wild-type mice. GPVI depletion using monoclonal antibody JAQ1 treatment of ceacam1(-/-) mice showed a reversal in the more stable thrombus growth phenotype. ceacam1(-/-) mice were more susceptible to type I collagen-induced pulmonary thromboembolism than wild-type mice. Thus, CEACAM1 acts as a negative regulator of platelet-collagen interactions and of thrombus growth involving the collagen GPVI receptor in vitro and in vivo.

CEACAM1 negatively regulates platelet-collagen interactions and thrombus growth in vitro and in vivo.

Carcinoembryonnaire antig&egrave;ne cellulaire mol&eacute;cule d&#39;adh&eacute;sion-1 (CEACAM1) est une glycoprot&eacute;ine de surface exprim&eacute;e sur diff&eacute;rentes cellules sanguines, cellules &eacute;pith&eacute;liales et les cellules vasculaires. CEACAM1 poss&egrave;de l&#39;adh&eacute;sif et les propri&eacute;t&eacute;s signalisation m&eacute;di&eacute;es par ses immunoreceptor intrins&egrave;que ax&eacute;e sur la tyrosine inhibiteur motifs qui recrutent des prot&eacute;ine-tyrosine-phosphatase SHP-1. Dans cette &eacute;tude, nous d&eacute;montrons que CEACAM1 est exprim&eacute;e &agrave; la surface et dans les r&eacute;serves intracellulaires des plaquettes. En outre, CEACAM1 sert &agrave; r&eacute;guler n&eacute;gativement des plaquettes de signalisation de collag&egrave;ne par le r&eacute;cepteur glycoprot&eacute;ique de /Fc VI (GPVI) (FcR) - gamma - cha&icirc;ne. plaquettes de CEACAM1(-/-) affich&eacute;s renforc&eacute;e type j&#39;ai collag&egrave;ne et ligand GPVI-s&eacute;lectif, collag&egrave;ne-related peptide (CRP), l&#39;agr&eacute;gation plaquettaire induite par le CRP, am&eacute;lior&eacute; l&#39;adh&eacute;sion des plaquettes au type I de collag&egrave;ne et &eacute;lev&eacute;e alpha induite par le CRP et la s&eacute;cr&eacute;tion des granules denses. Plaquettes provenant de souris ceacam1(-/-) thrombus plus grandes forme Lorsque perfus&eacute; sur une matrice de collag&egrave;ne sous d&eacute;bit art&eacute;riel par rapport aux souris de type sauvage. En outre, &agrave; l&#39;aide de la microscopie intravitale d&#39;art&eacute;rioles m&eacute;sent&eacute;riques endommag&eacute;es par le chlorure ferrique, nous montrons que le thrombus forment in vivo chez ceacam1(-/-) souris &eacute;taient plus grands et sont plus stables que ceux chez les souris de type sauvage. Appauvrissement de GPVI &agrave; l&#39;aide d&#39;un anticorps monoclonal JAQ1 traitement des souris ceacam1(-/-) a montr&eacute; une inversion dans le ph&eacute;notype de croissance thrombus plus stable. CEACAM1(-/-) souris &eacute;taient plus sensibles &agrave; la maladie thromboembolique pulmonaire induite par le collag&egrave;ne que les souris de type sauvage de type I. Ainsi, CEACAM1 agit comme un r&eacute;gulateur n&eacute;gatif des interactions plaquettes-collag&egrave;ne et de la croissance de thrombus impliquant le r&eacute;cepteur GPVI de collag&egrave;ne in vitro et in vivo.

CEACAM1 r&eacute;gule n&eacute;gativement les interactions plaquettes-collag&egrave;ne et croissance de thrombus in vitro et in vivo.

Carcinoembryonales Antigen Zelle Adh&auml;sion Molek&uuml;l-1 (CEACAM1) ist ein Oberfl&auml;che Glykoprotein auf verschiedenen Blutzellen, Epithelzellen und vaskul&auml;re Zellen. CEACAM1 besitzt Kleber und Signalisierung Eigenschaften vermittelt durch seine systeminternen Aramburuzabala Tyrosin-basierte hemmenden Motive, die SHP-1-Protein-Tyrosin-Phosphatase zu rekrutieren. In dieser Studie demonstriert, dass CEACAM1 auf der Oberfl&auml;che und in intrazellul&auml;re Pools von Thrombozyten ausgedr&uuml;ckt wird. Dar&uuml;ber hinaus dient CEACAM1, negativ zu regulieren, Signalisierung der Thrombozyten durch Kollagen durch den Glykoprotein VI (GPVI) / FC-Rezeptor (FcR) - Gamma - Kette. ceacam1(-/-) Pl&auml;ttchen angezeigt Verbesserte Typ ich Kollagen und GPVI-selektive Liganden, Kollagen-related-Peptide (CRP), CRP-vermittelten Thrombozytenaggregation verst&auml;rkt Pl&auml;ttchen Adh&auml;sion auf Typ I Kollagen, und erh&ouml;hten CRP-vermittelte Alpha und dichten Untermodul Sekretion. Thrombozyten, die von ceacam1(-/-) M&auml;use Form gr&ouml;&szlig;ere Thromben wenn perfused &uuml;ber eine Kollagen-Matrix unter arteriellen Fluss im Vergleich zu Wildtyp M&auml;usen abgeleitet werden. Dar&uuml;ber hinaus zeigen mit intravital-Mikroskopie, mesenterica Arteriolen Eisenchlorid-verletzt, wir, dass Thromben gebildet in vivo ceacam1(-/-) M&auml;use waren gr&ouml;&szlig;er und stabiler als die Wildtyp M&auml;usen. GPVI Raubbau mit monoklonalen Antik&ouml;rper JAQ1 Behandlungvon ceacam1(-/-) M&auml;use zeigten eine Umkehr in der stabileren Thrombus Wachstum Ph&auml;notyp. ceacam1(-/-) M&auml;use wurden anf&auml;lliger f&uuml;r Typ I Kollagen-induzierten pulmonalen Thromboembolien als Wildtyp M&auml;usen. So wirkt CEACAM1 als einen negativen Regulator der Thrombozyten-Collagen-Interaktionen und der Thrombus Wachstum mit den Kollagen-GPVI-Rezeptor, in-vitro und in vivo.

CEACAM1 regelt negativ Thrombozyten-Collagen-Interaktionen und Thrombus Wachstum in vitro und in vivo.

Antigene carcino-embrionario cella adesione molecola-1 (CEACAM1) &egrave; una glicoproteina di superficie espressa su varie cellule del sangue, cellule epiteliali e cellule vascolari. CEACAM1 possiede propriet&agrave; segnalazione mediata dalla sua intrinseca immunoreceptor basati su tirosina inibitoria motivi che reclutano fosfatasi tirosina della proteina SHP-1 e adesivo. In questo studio dimostriamo che CEACAM1 &egrave; espresso sulla superficie e nel pool intracellulare delle piastrine. Inoltre, CEACAM1 serve a regolare negativamente la segnalazione delle piastrine di collagene attraverso il recettore /Fc glicoproteina VI (GPVI) (FcR) - gamma - catena. piastrine ceacam1(-/-) visualizzate enhanced tipo collagene e GPVI selettivo ligando, peptide correlato al collagene (CRP), aggregazione piastrinica mediata da CRP, maggiore adesione delle piastrine su di tipo collagene e alfa elevato CRP-mediata e la secrezione di granuli densi. Piastrine derivano da topi ceacam1(-/-) trombi pi&ugrave; grandi di forma quando perfuso sopra una matrice di collagene sotto flusso arterioso rispetto ai topi wild-type. Inoltre, utilizzando la microscopia intravital di cloruro ferrico-ferito arteriole mesenteriche, mostriamo che trombi formarono in vivo in ceacam1(-/-) topi erano pi&ugrave; grandi e pi&ugrave; stabili rispetto a quelli nei topi wild-type. Deplezione GPVI utilizzando un anticorpo monoclonale JAQ1 trattamento di topi ceacam1(-/-) ha mostrato un&#39;inversione del fenotipo di crescita trombo pi&ugrave; stabile. ceacam1(-/-) topi erano pi&ugrave; suscettibili di tipo collagene-indotta di Tromboembolia polmonare rispetto ai topi wild-type. Cos&igrave;, CEACAM1 agisce come un regolatore negativo di interazioni piastrine-collagene e della crescita del trombo che coinvolge il recettore GPVI collagene in vitro e in vivo.

CEACAM1 regola negativamente le interazioni piastrine-collagene e la crescita del trombo in vitro e in vivo.

Carcinoembryonic &#x6297;&#x539F;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50; 1 &#xFF08;CEACAM1&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x8840;&#x6DB2;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x8868;&#x9762;&#x7CD6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3059;&#x3002;CEACAM1 &#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x63A5;&#x7740;&#x5264;&#x3001;SHP 1 &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x52DF;&#x96C6;&#x305D;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6291;&#x5236;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F; CEACAM1 &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;CEACAM1 &#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x8CA0;&#x306E;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D; VI &#xFF08;GPVI&#xFF09;/Fc &#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; (FcR) - &#x30AC;&#x30F3;&#x30DE; - &#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x3002;&#x8868;&#x793A; ceacam1(-/-) &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x62E1;&#x5F35;&#x578B;&#x306F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x3068; GPVI &#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; (CRP) CRP &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x51DD;&#x96C6;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7C98;&#x7740;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x3068;&#x9AD8;&#x67B6;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; CRP &#x5A92;&#x4ECB;&#x3068;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x9846;&#x7C92;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x7A2E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x52D5;&#x8108;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x6F45;&#x6D41;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x8840;&#x6813; ceacam1(-/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5869;&#x5316;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x9244;&#x8CA0;&#x50B7;&#x4E0A;&#x8178;&#x9593;&#x819C;&#x7D30;&#x52D5;&#x8108;&#x306B;&#x7528;&#x3044;&#x3066;, &#x8840;&#x6813;&#x5F62;&#x6210;&#x3068; in vivo &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5927;&#x304D;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F; ceacam1(-/-) &#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ceacam1(-/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB;&#x6297;&#x4F53; JAQ1 &#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; GPVI &#x67AF;&#x6E07;&#x9006;&#x8EE2;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x8840;&#x6813;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ceacam1(-/-) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x80BA;&#x8840;&#x6813;&#x585E;&#x6813;&#x75C7;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x79C1;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x654F;&#x611F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;CEACAM1 &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x8CA0;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; GPVI &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8840;&#x6813;&#x6210;&#x9577;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CEACAM1 &#x306B;&#x306F;&#x5426;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x8840;&#x6813;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Carcinoembryonic antigen &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790;-1 (CEACAM1)&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD608;&#xC561; &#xC138;&#xD3EC;, &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD608;&#xAD00; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. CEACAM1 &#xC811;&#xCC29;&#xC81C; &#xBC0F; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; immunoreceptor &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xAE30;&#xBC18; &#xAE08;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; SHP 1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xCDA9; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC7AC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC18D;&#xC131;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; ceacam1&#xC640; &#xD608;&#xC18C;&#xD310;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD480; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, CEACAM1 &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB2F9;&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; VI (GPVI) /Fc &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (FcR)-&#xAC10;&#xB9C8;-&#xD1B5;&#xD574; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD608;&#xC18C;&#xD310;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xCCB4;&#xC778;. ceacam1(-/-) &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC720;&#xD615; &#xB098; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xACFC; GPVI &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;, &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xAD00;&#xB828; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; (CRP), CRP &#xC911;&#xC7AC; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC811;&#xCC29; &#xB825; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB192;&#xC740; CRP &#xC911;&#xC7AC; &#xC54C;&#xD30C;&#xC640; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; &#xB9BD; &#xBD84; &#xBE44; &#xB09C;&#xC744; &#xC785;&#xB825;. &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xD615;&#xD0DC; &#xD070; &#xD608;&#xC804; &#xB3D9;&#xB9E5; &#xD750;&#xB984; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC544;&#xB798; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC704;&#xC5D0; &#xB07C;&#xC5B9;&#xB294;&#xB2E4; &#xB54C; ceacam1(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C;. &#xB610;&#xD55C;, mesenteric arterioles &#xCCA0; &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC5D0; intravital &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xD608;&#xC804; &#xD615;&#xC131; &#xC950; &#xD070; &#xACE0; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB354; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; ceacam1(-/-)&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;. GPVI &#xACE0;&#xAC08; ceacam1(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD074;&#xB860; &#xD56D; &#xCCB4; JAQ1 &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD608;&#xC804; &#xC131;&#xC7A5; &#xD615; &#xBC18;&#xC804;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. ceacam1(-/-) &#xC950; &#xB098; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC950; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC720;&#xBC1C; &#xD3D0; thromboembolism &#xC785;&#xB825;&#xC5D0; &#xB354; &#xCDE8;&#xC57D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, CEACAM1 &#xB124;&#xAC70;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xD608;&#xC804; &#xC131;&#xC7A5; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; GPVI &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ceacam1&#xB294; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F; &#xD608;&#xC804; &#xC99D;&#xAC00; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC870;&#xC808;.

Carcinoembrionario ant&iacute;geno celular mol&eacute;cula 1 de adhesi&oacute;n (CEACAM1) es una glicoprote&iacute;na de superficie expresada en diversas c&eacute;lulas sangu&iacute;neas, c&eacute;lulas epiteliales y c&eacute;lulas vasculares. CEACAM1 posee caracter&iacute;sticas se&ntilde;alizaci&oacute;n mediadas por sus motivos inhibitorio immunoreceptor intr&iacute;nsecas basadas en tirosina que reclutan SHP-1 prote&iacute;na-tirosina fosfatasa y adhesivo. En este estudio demostramos que la CEACAM1 se expresa en la superficie y en piscinas intracelulares de plaquetas. Adem&aacute;s, CEACAM1 sirve para regular negativamente la se&ntilde;alizaci&oacute;n de las plaquetas por col&aacute;geno a trav&eacute;s del receptor glicoprote&iacute;na VI (GPVI) /Fc (FcR) - gamma - cadena. ceacam1(-/-) plaquetas muestra mejorado tipo me col&aacute;geno y ligando selectivo GPVI, P&eacute;ptido relacionado con el col&aacute;geno (CRP), agregaci&oacute;n plaquetaria mediada por CRP, mejorado la adhesi&oacute;n de plaquetas por tipo I, col&aacute;geno y alfa elevado de CRP-mediada y secreci&oacute;n de gr&aacute;nulos densos. Las plaquetas derivan de ceacam1(-/-) ratones trombos m&aacute;s grandes de la forma cuando se perfunde sobre una matriz de col&aacute;geno bajo flujo arterial en comparaci&oacute;n con los ratones de tipo salvaje. Adem&aacute;s, usando microscopia intravital a arteriolas mesent&eacute;ricas cloruro f&eacute;rrico-heridos, mostramos que los trombos forman en vivo en ceacam1(-/-) ratones eran m&aacute;s grandes y m&aacute;s estable que los ratones de tipo salvaje. Agotamiento GPVI utilizando el anticuerpo monoclonal JAQ1 tratamiento de ratones ceacam1(-/-) mostr&oacute; un cambio en el fenotipo de crecimiento m&aacute;s estable de trombo. ceacam1(-/-) ratones fueron m&aacute;s susceptibles al tipo I tromboembolismo pulmonar inducida por col&aacute;geno que los ratones de tipo salvaje. As&iacute;, el CEACAM1 act&uacute;a como un regulador negativo de las interacciones de la plaqueta del col&aacute;geno y del crecimiento del trombo con el receptor de col&aacute;geno GPVI in vitro e in vivo.

CEACAM1 regula negativamente las interacciones de la plaqueta del col&aacute;geno y el crecimiento del trombo in vitro e in vivo.

&#x79FB;&#x690D;&#x5230;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA; 1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x5BB9;&#x6613;&#x53D7;&#x5230;&#x540C;&#x79CD;&#x5F02;&#x4F53;&#x53CA;&#x81EA;&#x52A8;&#x514D;&#x75AB; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E3A;&#x5F00;&#x53D1;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4F7F;&#x7528; PBMC &#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x505A;&#x6CD5;&#x662F;&#x51C6;&#x5907;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x80F0;&#x5C9B;&#x6350;&#x52A9; (&#x540C;&#x79CD;&#x5F02;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;) &#x548C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x63D0;&#x53D6; &#xFF08;&#x81EA;&#x52A8;&#x6297;&#x539F;&#xFF09;&#x3002;&#x4EE4;&#x6211;&#x4EEC;&#x5403;&#x60CA;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x5148;&#x5929;&#x6291;&#x5236;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x6297;&#x539F; (&#x7834;&#x4F24;&#x98CE;&#x7C7B;&#x6BD2;&#x7D20;) &#x548C;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x539F; (&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x6297; CD3 OKT3&#xFF09;&#xFF0C;&#x800C;&#x63D0;&#x53D6;&#x51C6;&#x5907;&#x4ECE;&#x80F0;&#x5C9B;&#x4ECE;&#x540C;&#x4E00;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x6291;&#x5236; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;&#x5236;&#x6B62;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62;&#x5355;&#x514B;&#x9686;&#x6297;&#x4F53;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-10R&#x3001; &#x8F6C;&#x5316;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x6216; CD152 &#xFF08;CTLA-4&#xFF09;&#x3002;&#x5B83;&#x4E5F;&#x901A;&#x8FC7;&#x52A0;&#x70ED;&#x3001; &#x66B4;&#x9732;&#x5728;&#x8FD8;&#x539F;&#x5242;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6D88;&#x5316;&#x53D8;&#x6027;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6B7B;&#x8005;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x901A;&#x5E38;&#x7531;&#x4E8E;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x5F3A;&#x7684;&#x677E;&#x9F99;&#x7684;&#x6B7B;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x5236;&#x6B62;&#x56E0;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7532;&#x6CFC;&#x5C3C;&#x9F99;&#x3002;&#x7532;&#x6CFC;&#x5C3C;&#x9F99;&#x65E0;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x5728;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x5728;&#x6291;&#x5236; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x7CD6;&#x76AE;&#x8D28;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x7C73;&#x975E;&#x53F8;&#x916E;&#x5F7B;&#x5E95;&#x626D;&#x8F6C;&#x81F4;&#x813E;&#x63D0;&#x53D6;&#x7684;&#x5236;&#x6B62;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x63D0;&#x53D6;&#x7269;&#x4EBA;&#x813E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5C0F;&#x5C9B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6B7B;&#x8005;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x5305;&#x542B;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x6B8B;&#x4F59;&#x7532;&#x6CFC;&#x5C3C;&#x9F99;&#x904F;&#x6291; T-&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;

&#x6B8B;&#x4F59;&#x7532;&#x6CFC;&#x5C3C;&#x9F99;&#x53D6;&#x6D88;&#x5230;&#x813E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x80F0;&#x5C9B;&#x63D0;&#x53D6;&#x6B7B;&#x8005;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#x6350;&#x732E;&#x8005;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Pancreatic islets, transplanted into recipients with type 1 diabetes, are exposed to allogenic and auto-immune T-cell responses. We set out to develop an assay to measure these responses using PBMC. Our approach was to prepare spleen extract from the islet donors (allo-antigen) and islet extracts (auto-antigen). To our surprise, we found that spleen extracts potently inhibited the proliferation of human T cells driven by antigen (tetanus toxoid) and mitogen (anti-CD3 mAb, OKT3), whereas extracts prepared from pancreatic islets from the same donor did not suppress T-cell proliferation. Suppression mediated by spleen extracts was unaffected by blocking mAbs against the IL-10R, transforming growth factor-Î² or CD152 (CTLA-4). It was also unaffected by denaturing the spleen extracts by heating, exposing to reducing agents or protease digestion. Because deceased organ donors are commonly given the immunosuppressive glucocorticoid methylprednisolone prior to death, we hypothesized that suppression was due to residual methylprednisolone in the spleen extracts. Methylprednisolone could be detected by mass spectrometry in spleen extracts at concentrations that suppress T-cell proliferation. Finally, the glucocorticoid receptor antagonist mifepristone completely reversed the suppression caused by the spleen extracts. We conclude that extracts of human spleen, but not islets, from deceased organ donors contain sufficient residual methylprednisolone to suppress the proliferation of T-cells in vitro.

Residual methylprednisolone suppresses human T-cell responses to spleen, but not islet, extracts from deceased organ donors.

Des &icirc;lots pancr&eacute;atiques, transplant&eacute;s dans les b&eacute;n&eacute;ficiaires atteints de diab&egrave;te de type 1, sont expos&eacute;s &agrave; des allog&egrave;nes et auto immune responses de lymphocytes T. Nous avons entrepris de d&eacute;velopper un test permettant de mesurer ces r&eacute;ponses &agrave; l&#39;aide de PBMC. Notre approche &eacute;tait de pr&eacute;parer rate extrait les donateurs de l&#39;&icirc;lot (allo-antig&egrave;nes) et &icirc;lot extraits (auto-antig&egrave;ne). A notre grande surprise, nous avons constat&eacute; que des extraits de rate inhibent fortement la prolif&eacute;ration des cellules T humaines, conduit par l&#39;antig&egrave;ne (t&eacute;tanos) et mitog&egrave;ne (anti-CD3 mAb, OKT3), tandis que les extraits pr&eacute;par&eacute;s &agrave; partir des &icirc;lots pancr&eacute;atiques d&#39;un m&ecirc;me donneur n&#39;a pas supprim&eacute; la prolif&eacute;ration des lymphocytes T. R&eacute;pression m&eacute;di&eacute;e par des extraits de la rate n&#39;est pas affect&eacute;e par le blocage du mAbs contre l&#39;IL-10R, transforming growth factor-&beta; ou CD152 (CTLA-4). Il n&#39;est &eacute;galement pas affect&eacute;e en d&eacute;naturant les extraits de la rate par chauffage, les exposant &agrave; des agents r&eacute;ducteurs ou digestion prot&eacute;asique. Parce que les donneurs d&#39;organes d&eacute;c&eacute;d&eacute;s figurent couramment la m&eacute;thylprednisolone glucocortico&iuml;de immunosuppresseurs avant son d&eacute;c&egrave;s, nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que suppression &eacute;tait due &agrave; la m&eacute;thylprednisolone r&eacute;siduelle dans les extraits de la rate. M&eacute;thylprednisolone pouvait &ecirc;tre d&eacute;tect&eacute;e par spectrom&eacute;trie de masse dans les extraits de la rate &agrave; des concentrations qui inhibent la prolif&eacute;ration des lymphocytes T. Enfin, la mif&eacute;pristone d&#39;antagoniste r&eacute;cepteur glucocortico&iuml;de a compl&egrave;tement invers&eacute; la compression caus&eacute;e par les extraits de la rate. Nous concluons que les extraits de rate humaine, mais pas d&#39;&icirc;lots, de donneurs d&#39;organes d&eacute;c&eacute;d&eacute;e contiennent la m&eacute;thylprednisolone r&eacute;siduelle suffisante pour supprimer la prolif&eacute;ration des lymphocytes T in vitro.

M&eacute;thylprednisolone r&eacute;siduelle supprime les r&eacute;ponses de cellules T humaines aux extraits de rate, mais pas d&#39;&icirc;lot, des donneurs d&#39;organes d&eacute;c&eacute;d&eacute;s.

Pankreas Inselchen, transplantierte in Empf&auml;nger mit Typ 1-Diabetes sind allogene und autoimmune T-Zell-Reaktionen ausgesetzt. Wir uns vorgenommen, um ein Assay zur Messung dieser Antworten mit PBMC zu entwickeln. Unser Ansatz war Milz Auszug aus dem Inselchen Spender (allo-Antigen) vorbereiten und Inselchen extrahiert (Auto-Antigen). Zu unserer &Uuml;berraschung fanden wir, dass die Milz Extrakte stark gehemmt, die Verbreitung von menschlichen T-Zellen, die angetrieben von Antigen (Tetanustoxoid) und Mitogen (Anti-CD3 mAb, OKT3), w&auml;hrend Extrakte aus Pankreas Inseln vom gleichen Spender vorbereitet T-Zellproliferation nicht unterdr&uuml;ckt wurden. Unterdr&uuml;ckung von Milz Extrakte vermittelt verschont von blockieren mAbs gegen den IL-10R, transforming Growth Factor-&beta; oder CD152 (CTLA-4). Es war auch durch Denaturierung der Milz Extrakte von Heizung, Verf&uuml;gbarmachen von Reduktionsmitteln oder Protease Verdauung unber&uuml;hrt. Weil verstorbenen Organspender die immunsuppressive Glukokortikoid-Methylprednisolon vor Tod h&auml;ufig gegeben sind, Hypothese wir, dass verbleibende Methylprednisolon in der Milz Extrakte Unterdr&uuml;ckung zur&uuml;ckzuf&uuml;hren. Methylprednisolon konnte durch Massenspektrometrie in Milz Extrakte bei Konzentrationen erkannt werden, die T-Zellproliferation zu unterdr&uuml;cken. Die Glukokortikoid-Rezeptor-Antagonist Mifepriston umgekehrt schlie&szlig;lich vollst&auml;ndig die Unterdr&uuml;ckung durch die Milz Extrakte verursacht. Wir schlie&szlig;en, dass Ausz&uuml;ge der menschlichen Milz, aber nicht Inselchen aus verstorbenen Organspender ausreichend verbleibende Methylprednisolon enthalten um die Vermehrung von T-Zellen in vitro zu unterdr&uuml;cken.

Residual Methylprednisolon unterdr&uuml;ckt menschliche T-Zell-Antworten f&uuml;r Milz, aber nicht Inselchen, Extrakte von verstorbenen Organspender.

Isole pancreatiche, trapiantati in destinatari con diabete di tipo 1, sono esposti a trapianto allogenico e auto-immune risposte delle cellule T. Abbiamo deciso di sviluppare un test per misurare queste risposte utilizzando PBMC. Il nostro approccio era quello di preparare la milza Estratto da donatori isolotto (allo-antigeni) e isolotto estratti (auto-antigene). Con nostra sorpresa, abbiamo scoperto che gli estratti della milza inibiscono potentemente la proliferazione delle cellule T umane guidato da antigene (Toxoide di tetano) e mitogeno (mAb anti-CD3, OKT3), considerando che estratti preparati da isole pancreatiche da donatore stesso non sopprimere la proliferazione delle cellule T. Soppressione mediata da estratti di milza era influenzata dal blocco mAbs contro IL-10R, trasformando il fattore di crescita-&beta; o CD152 (CTLA-4). &Egrave; stato anche influenzato da denaturare il milza estratti da riscaldamento, esposizione ad agenti riducenti o digestione della proteasi. Perch&eacute; i donatori deceduti organo sono comunemente dato il metilprednisolone glucocorticoidi immunosoppressori prima della morte, abbiamo ipotizzato che soppressione era dovuta al residuo metilprednisolone in estratti della milza. Metilprednisolone potrebbe essere rilevato da spettrometria di massa nella milza estratti a concentrazioni che sopprimono la proliferazione delle cellule T. Infine, i glucocorticoidi recettore antagonista mifepristone completamente rovesciato la repressione causata da estratti della milza. Possiamo concludere che gli estratti della milza umana, ma non isolotti, da donatori deceduti organo contengano metilprednisolone residua sufficiente per sopprimere la proliferazione delle cellule T in vitro.

Metilprednisolone residua elimina risposte delle cellule T umane alla milza, ma non isolotto, estratti da donatori deceduti organo.

1 &#x578B;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x306B;&#x79FB;&#x690D;&#x3001;&#x81B5;&#x5CF6;&#x306F;&#x540C;&#x7A2E;&#x3068;&#x81EA;&#x52D5;&#x514D;&#x75AB; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; PBMC &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x7740;&#x624B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x813E;&#x81D3;&#x81B5;&#x5CF6;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC; &#xFF08;&#x540C;&#x7A2E;&#x6297;&#x539F;&#xFF09; &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x3092;&#x6E96;&#x5099;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x81B5;&#x5CF6; (&#x81EA;&#x52D5;&#x6297;&#x539F;) &#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9A5A;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x813E;&#x81D3;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x5F37;&#x529B;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x3067;&#x540C;&#x4E00;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x81B5;&#x5CF6;&#x304B;&#x3089;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x305F; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x6297;&#x539F; &#xFF08;&#x7834;&#x50B7;&#x98A8;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30A4;&#x30C9;&#xFF09; &#x3068; mitogen (OKT3 &#x6297; CD3 mAb) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x813E;&#x81D3;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x6291;&#x5236;&#x3060;&#x3063;&#x305F; IL 10R &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066; Mab &#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; &beta; &#x307E;&#x305F;&#x306F; CD152 &#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B; (CTLA-4)&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3082;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6696;&#x623F;, &#x9084;&#x5143;&#x5264;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D88;&#x5316;&#x306B;&#x516C;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6B7B;&#x4F53;&#x81D3;&#x5668;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304C;&#x3088;&#x304F;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9; &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3;&#x6B7B;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x6B8B;&#x7559;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306E;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30B3;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x30DF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x306F;&#x813E;&#x81D3;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6291;&#x5727;&#x3092;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x9006;&#x8EE2;&#x3002;&#x6B7B;&#x4F53;&#x81D3;&#x5668;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x813E;&#x81D3;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x5C0F;&#x5CF6;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x306B; in vitro &#x3067;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x6B8B;&#x7559;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C9;&#x30CB;&#x30BE;&#x30ED;&#x30F3;&#x542B;&#x3080;&#x3092;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xD0C0;&#xC785;-1 &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xC774;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xB3C5;&#xB3C4; allogenic &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; T &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; PBMC&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xCC29;&#xC218;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC811;&#xADFC; &#xC900;&#xBE44; &#xBE44;&#xC7A5; &#xC12C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; (&#xC5EC; &#xBCF4;&#xC138;&#xC694;-&#xD56D; &#xC6D0;)&#xC744; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xACE0; &#xC12C; (&#xC790;&#xB3D9;-&#xD56D; &#xC6D0;)&#xC744; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; potently &#xAC19;&#xC740; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xB3C5;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC900;&#xBE44; &#xB41C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xBC18;&#xBA74; &#xD56D; &#xC6D0; (&#xD30C;&#xC0C1;&#xD48D; toxoid)&#xACFC; &#xBB3C;&#xC9C8; (&#xC548;&#xD2F0;-CD3 mAb, OKT3)&#xC5D0; &#xD798;&#xC785;&#xC5B4; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB294; IL-10r&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; mAbs &#xCC28;&#xB2E8;, &#xBCC0;&#xD615; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;-&beta; &#xB610;&#xB294; cd152&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; (CTLA-4). &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xC5F4;, &#xAC10;&#xC18C; &#xC694;&#xC6D0; &#xB610;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C;&#xD654;&#xB97C; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xBCC0;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;. &#xACE0; &#xC778;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC8FD;&#xC74C; &#xBA74;&#xC5ED; glucocorticoid methylprednisolone &#xC81C;&#xACF5;, &#xC5B5;&#xC81C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC794;&#xC5EC; methylprednisolone &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. Methylprednisolone T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, glucocorticoid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; mifepristone&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBE44;&#xC7A5; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC18;&#xB300; &#xD558; &#xACE0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xACE0; &#xC778;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBE44;&#xC7A5; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB3C5;&#xB3C4;&#xC758; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC794;&#xC5EC; methylprednisolone &#xACB0;&#xB860;.

&#xC794;&#xC5EC; methylprednisolone &#xBE44;&#xC7A5;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC12C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C; &#xACE0; &#xC778;&#xB41C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; T&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Islotes pancre&aacute;ticos, trasplantados en recipientes con diabetes tipo 1, est&aacute;n expuestos a las respuestas de c&eacute;lulas T de al&oacute;genos y autoinmunes. Nos propusimos para desarrollar un ensayo para medir estas respuestas usando PBMC. Nuestro enfoque deb&iacute;a preparar bazo Extracto de los donantes del islote (allo-ant&iacute;geno) y extractos de islote (auto-ant&iacute;geno). Para nuestra sorpresa, encontramos que los extractos de bazo potentemente inhibici&oacute;n la proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas T humanas impulsado por el ant&iacute;geno (toxoide tet&aacute;nico) y mit&oacute;geno (mAb anti-CD3, OKT3), mientras que los extractos preparados a partir de islotes pancre&aacute;ticos de la misma donante no suprimi&oacute; a la proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas T. Supresi&oacute;n mediada por extractos de bazo era inafectada por bloqueo mAbs contra el IL-10R, transformar el factor de crecimiento-&beta; o CD152 (CTLA-4). Tambi&eacute;n era inafectada por la desnaturalizaci&oacute;n de los extractos de bazo por calefacci&oacute;n, exponiendo a agentes reductores o digesti&oacute;n de la proteasa. Porque los donantes fallecidos reciben com&uacute;nmente la metilprednisolona glucocorticoides inmunosupresores antes de la muerte, presumimos que la supresi&oacute;n obedece a metilprednisolona residual en los extractos de bazo. Metilprednisolona podr&iacute;a ser detectada por espectrometr&iacute;a de masas en los extractos de bazo en concentraciones que inhiben la proliferaci&oacute;n del T-cell. Finalmente, la mifepristona de antagonista del receptor de glucocorticoides revirti&oacute; completamente la represi&oacute;n causada por los extractos de bazo. Concluimos que los extractos de bazo humano, pero no de islotes, de donantes fallecidos contienen metilprednisolona residual suficiente para suprimir la proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas T in vitro.

Rochna Chand

Immunology and Diabetes Unit

St. Vincent's Institute of Medical Research

Extraction of Tissue Antigens for Functional Assays

Rochna Chand

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Immunology and Diabetes Unit

St. Vincent's Institute of Medical Research

Extraction of Tissue Antigens for Functional Assays

Immunology and Diabetes Unit